王傳鵬 楊超 趙駿 劉彬荷 劉佳微 李芝蘭

芹菜素對(duì)雄性小鼠肝臟SOD、GSH-Px、CAT活力影響

王傳鵬 楊超 趙駿 劉彬荷 劉佳微 李芝蘭

目的觀察不同劑量、不同作用時(shí)間，芹菜素(AP)對(duì)雄性小鼠肝臟氧化還原酶活力的影響。方法將200只雄性小鼠按體重隨機(jī)分為對(duì)照組(生理鹽水)、低劑量組(AP 252 mg/kg bw)、中劑量組(AP 504 mg/kg bw)和高劑量組(AP 1008 mg/kg bw)4組，各組動(dòng)物又隨機(jī)分成5個(gè)時(shí)間組即：7 d組、14 d組、21 d組、28 d組、35 d組。小鼠給予0.01 ml/g bw 生理鹽水和不同濃度的芹菜素灌胃，1次/d。分批處死小鼠，制備肝勻漿。測(cè)定超氧化物歧化酶(SOD)、谷胱甘肽過氧化物酶(GSH-Px)及過氧化氫酶(CAT)活力。結(jié)果SOD活力28 d高劑量組明顯低于其他組(P<0.05)，35 d中劑量組SOD活力低于對(duì)照組及低劑量組(P<0.05)；GSH-Px活力28 d高劑量組較對(duì)照組及低劑量組低(P<0.05)；CAT活力變化不明顯。結(jié)論AP對(duì)雄性小鼠肝臟SOD、GSH-Px活力具有一定抑制作用。

芹菜素；超氧化物歧化酶(SOD)；谷胱甘肽過氧化物酶(GSH-Px)；過氧化氫酶(CAT)

芹菜素(apigenin，AP)是天然存在的一種黃酮類化合物，廣泛存在于多種水果、蔬菜、豆類和茶葉中[1]，具有抗氧化等多方面的生物學(xué)活力[2]。有報(bào)道芹菜素具有廣泛的抗氧化作用[3]；隋海霞[4]與Skiboh C F[5]等體外研究結(jié)果表明，大劑量攝入黃酮類化合物，會(huì)使其成為致突變劑、促氧化劑，產(chǎn)生氧自由基而產(chǎn)生毒副作用。因此對(duì)于芹菜素的抗氧化作用機(jī)制及有效劑量范圍有必要進(jìn)一步研究。本研究擬通過不同劑量芹菜素對(duì)成年雄性小鼠灌胃，在不同時(shí)間觀察點(diǎn)檢測(cè)肝臟組織SOD、GSH-Px、CAT活力，探討芹菜素對(duì)肝臟氧化酶影響的劑量效應(yīng)和時(shí)間效應(yīng)，旨在為芹菜素功效的深入研究及開發(fā)利用提供科學(xué)依據(jù)。

1 資料與方法

1.1一般資料

1.1.1實(shí)驗(yàn)動(dòng)物 成年健康SPF級(jí)昆明種雄性小鼠200只，動(dòng)物合格證號(hào)編號(hào)為SCXK(甘)2011 -0001-0001067，飼養(yǎng)在甘肅中醫(yī)學(xué)院中心實(shí)室的SPF級(jí)實(shí)驗(yàn)室內(nèi)。

1.1.2芹菜素 芹菜素購(gòu)于陜西惠科植物開發(fā)有限公司(生產(chǎn)批號(hào)，HK20110105)，經(jīng)HPLC檢測(cè)，芹菜素純度為98 %，用生理鹽水配制成所需濃度。

1.1.3主要試劑與儀器 試劑盒均購(gòu)自南京建成生物工程研究所。超氧化物歧化酶(SOD)測(cè)定試劑盒(生產(chǎn)批號(hào):20120326)，谷胱甘肽過氧化物酶(GSH-PX)測(cè)定試劑盒(生產(chǎn)批號(hào):20120323)，過氧化氫酶(CAT)測(cè)定試劑盒。722型分光光度計(jì)(上海精密科學(xué)儀器有限公司)，JA3003N 電子秤(上海精密科學(xué)儀器有限公司)，LD4-2 離心機(jī)(北京醫(yī)用離心機(jī)廠)，DK-600 s 型三用恒溫水浴箱(上海精宏實(shí)驗(yàn)設(shè)備有限公司)。

1.2方法

1.2.1實(shí)驗(yàn)分組 將200只雄性小鼠按體重隨機(jī)分為對(duì)照組(生理鹽水10 ml/kg bw)、低劑量組(AP 252 mg/kg bw)、中劑量組(AP 504 mg/kg bw)和高劑量組(AP 1008 mg/kg bw)4組，每組50只。小鼠每天給予生理鹽水或不同濃度的芹菜素灌胃1次，連續(xù)7 d、14 d、21 d、28 d、35 d，分批處死動(dòng)物。取出肝臟，稱取0.2～0.4 g加入9倍體積的勻漿介質(zhì)，研磨成勻漿，置于離心機(jī)內(nèi)3000r/min離心10 min，取上清液，-4℃保存?zhèn)溆谩?/p>

1.2.2肝臟抗氧化酶活力測(cè)定 黃嘌呤氧化酶法測(cè)定SOD活力；DTNB直接法測(cè)定GSH-Px活力；可見光法測(cè)定CAT；以上檢測(cè)均按試劑盒說明操作。

2 結(jié)果

對(duì)不同時(shí)間觀察點(diǎn)小鼠SOD、GSH-Px、CAT測(cè)定結(jié)果，進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)檢驗(yàn)，與同期對(duì)照相比較：7 d 低劑量和中劑量組SOD活力升高具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，中劑量組GSH-Px活力的降低和高劑量組GSH-Px活力升高的差異具有顯著性；21 d低、高劑量組GSH-Px活力的升高具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義；28 d高劑量組SOD、GSH-Px、CAT活力降低的差異具有顯著性；35 d中劑量組SOD活力降低具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

對(duì)CAT、GSH-Px、SOD活力進(jìn)行析因分析：SOD交互作用、時(shí)間效應(yīng)有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，劑量效應(yīng)無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義；GSH-Px交互作用、時(shí)間效應(yīng)有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，劑量效應(yīng)無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義；CAT交互作用、劑量效應(yīng)無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，時(shí)間效應(yīng)有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2.1芹菜素對(duì)SOD活力影響 經(jīng)析因分析，SOD活力時(shí)間與劑量的交互效應(yīng)有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P=0.0063)。在同一時(shí)間點(diǎn)上觀察劑量效應(yīng)，SOD活力7 d、21 d各劑量組均高于對(duì)照組，14 d低、高劑量組均低于對(duì)照組，28 d高劑量組低于對(duì)照組及低、中劑量組，35 d中劑量組低于對(duì)照組、中劑量組與低劑量組差異亦具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

在同一劑量水平上觀察時(shí)間效應(yīng)，SOD活力高、中、低劑量組與對(duì)照組差值14 d時(shí)均較7 d時(shí)減小，21 d時(shí)各劑量組間差距最小，28 d高劑量組降低最明顯，35 d時(shí)中劑量組降低更為突出。

2.2芹菜素對(duì)GSH-Px活力影響 經(jīng)析因分析，GSH-Px活力時(shí)間與劑量的交互效應(yīng)有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P=0.0036)。

在同一時(shí)間點(diǎn)上觀察劑量效應(yīng)，GSH-Px活力21 d各劑量組均高于對(duì)照組，且低劑量組與對(duì)照組差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義；28 d高劑量與對(duì)照組、低劑量組間差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

在同一劑量水平上觀察時(shí)間效應(yīng)，GSH-Px活力高、中、低劑量組在21 d時(shí)均明顯增高，28 d時(shí)高劑量組的降低最為突出。

2.3芹菜素對(duì)CAT活力影響 經(jīng)析因分析，時(shí)間和劑量間無(wú)交互效應(yīng)(P=0.5979)，劑量效應(yīng)無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P=0.950)，存在時(shí)間效應(yīng)(P=0.020)。

合并低、中、高劑量組為芹菜素組，觀察芹菜素?cái)z入與否對(duì)機(jī)體內(nèi)CAT活力影響。7 d芹菜素組CAT活力高于對(duì)照組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P=0.060)，其他時(shí)間點(diǎn)上，芹菜素處理組與對(duì)照組間的差距不大。

3 討論

生物體內(nèi)活力氧傷害的防御機(jī)制主要由抗氧化酶和非酶體系組成，抗氧化酶主要有SOD、GSH-Px等，它們?cè)谇宄杂苫?、阻止生物大分子氧化損傷等方面起到了非常重要的作用[9]。其中SOD可以清除體內(nèi)多余的超氧陰離子，在防御生物體氧化損傷方面有著重要意義[10]。本次實(shí)驗(yàn)結(jié)果，28 d高劑量組SOD活力明顯低于中、低劑量組和對(duì)照組，35 d中劑量組SOD活力降低更為突出，提示本實(shí)驗(yàn)條件下504 mg/kg bw 和1008 mg/kg bw 的AP處理28 d后對(duì)小鼠SOD活力抑制明顯，表現(xiàn)為亞急性作用。

GSH-Px主要的生物學(xué)作用是清除脂質(zhì)過氧化物和H2O2，當(dāng)SOD將自由基歧化為H2O2后，GSH-Px和其他酶可將其分解為水，完成體內(nèi)活力氧的清除作用[11]。本次實(shí)驗(yàn)結(jié)果，GSH-Px活力高、中、低劑量組在21 d時(shí)均明顯增高，28 d時(shí)高劑量組的降低最為突出，提示本實(shí)驗(yàn)條件下1008 mg/kg bw的AP處理28 d，對(duì)小鼠GSH-Px活力抑制明顯，表現(xiàn)為亞急性作用。

文獻(xiàn)顯示，在SOD，GSH-Px，CAT 3種抗氧化酶中，CAT 活力的靈敏度最差[11]。本次研究中未發(fā)現(xiàn)芹菜素的劑量效應(yīng)，不同劑量組合并后結(jié)顯示，7 d時(shí)AP組CAT活力高于對(duì)照組且差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，隨處理時(shí)間延長(zhǎng)CAT活力與對(duì)照間的差距減小，提示本實(shí)驗(yàn)條件下AP處理7 d，小鼠CAT活力增加，可能與應(yīng)激反應(yīng)有關(guān)。

本研究結(jié)果支持AP對(duì)雄性小鼠肝臟SOD、GSH-Px活力具有一定抑制作用。

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EffectofApigeninonSOD,GSH-Px,CATActivitiesinMaleMiceLiver

WANGChuan-peng,YANGChao,ZHAOJun,etal.
ThePublicHealthSchoolofLanzhouUniversity,Lanzhou,Gansu730000

ObjectiveTo observe the effects of apigenin at different doses and different time on activities of oxido-reductases in male mice liver.Methods200 male mice were randomly divided into 4 groups according to body weight including: matched group(NS), low-dose group(AP 252 mg/kg bw), middle-dose group(AP 504 mg/kg bw)and high-dose group(AP 1008 mg/kg bw). Mice of each group were divided into 7 days, 14 days, 21 days, 28 days and 35 days group. Mice were given 0.01 ml/g bw of normal saline or different concentrations of apigenin at every day by gavage. All mice were killed at the different time observation sites. Liver homogenates were prepared, to measure the activities of superoxide dismutase(SOD), glutathione peroxidase(GSH-Px)and catalase(CAT).ResultsThe activity of SOD of high-dose group on the 28th day was significantly lower than the other groups(P<0.05). On the 35th day, the activity of SOD of middle-dose group was significantly lower than matched-group and high-dose group. The activity of GSH-Px of high-dose group on 28th day was significantly lower than matched group and high-dose group(P<0.05). The activity of CAT did not change significantly.ConclusionApigenin has a certain inhibitory effect on the activity of SOD and GSH-Px in male mice liver.

Apigenin;Superoxide dismutase(SOD); Glutathione peroxidase(GSH-Px);Catalase(CAT)

蘭州大學(xué)2012年“本科教學(xué)工程”國(guó)家級(jí)大學(xué)生創(chuàng)新創(chuàng)業(yè)訓(xùn)練計(jì)劃項(xiàng)目(項(xiàng)目編號(hào)：201210730040)

730000 蘭州大學(xué)公共衛(wèi)生學(xué)院

李芝蘭