★ 龔飛鵬 于歡 朱龍濤 龔千鋒

(1.江西省人民醫(yī)院 南昌 330000；2.江西中醫(yī)學(xué)院 南昌 330004；3.北京中醫(yī)藥大學(xué) 北京 100102)

砂燙法與烘烤法對(duì)馬錢(qián)子中抗炎鎮(zhèn)痛成分影響*

★ 龔飛鵬1,2于歡2,3朱龍濤2龔千鋒2**

(1.江西省人民醫(yī)院 南昌 330000；2.江西中醫(yī)學(xué)院 南昌 330004；3.北京中醫(yī)藥大學(xué) 北京 100102)

目的：建立馬錢(qián)子士的寧和馬錢(qián)子堿的含量測(cè)定方法，評(píng)價(jià)砂燙法與烘烤法對(duì)二者含量的影響。方法：分別制備砂燙馬錢(qián)子和烘烤馬錢(qián)子，采用高效液相色譜法測(cè)定士的寧和馬錢(qián)子堿含量，以C18柱為固定相，乙腈(A):水-乙酸-三乙胺(230∶2.4∶0.4)(B)=11∶89為流動(dòng)相，檢測(cè)波長(zhǎng)為254nm。結(jié)果：以200℃烘烤馬錢(qián)子30分鐘，士的寧和馬錢(qián)子含量水平與砂燙馬錢(qián)子水平相當(dāng)。結(jié)論：砂燙馬錢(qián)子炮制過(guò)程溫度、時(shí)間對(duì)生物堿含量影響較大，而烘烤馬錢(qián)子工藝可控性更強(qiáng)，用來(lái)控制馬錢(qián)子質(zhì)量?jī)?yōu)勢(shì)顯著。

HPLC法；士的寧；馬錢(qián)子堿；含量測(cè)定

馬錢(qián)子,為馬錢(qián)科植物馬錢(qián)Strychnosnux-vomicaL.或云南馬錢(qián)StrychnospierrianaAW. Hill的干燥成熟種子。始載于《本草綱目》，并為歷版《中國(guó)藥典》所收載。味苦、性寒、有大毒，歸肝、脾經(jīng)，具通絡(luò)止痛、散結(jié)消腫之功效，臨床上常用于風(fēng)濕痹痛、跌打損傷、麻木癱瘓等疾病。馬錢(qián)子中生物堿類(lèi)成分為其有效成分，士的寧和馬錢(qián)子堿是總生物堿的主要有效成分，同時(shí)也是馬錢(qián)子的毒性成分，兩者之和幾乎占總生物堿的80-90%。

1 儀器與試藥

1.1 儀器

高效液相色譜儀(Dionex UltiMate3000)；PAD檢測(cè)器；Chromeleon工作站；KQ3200超聲波清洗器(杭州中拓儀器有限公司)；HH-2數(shù)顯恒溫水浴鍋(國(guó)華電器有限公司)；CFP-110X50型報(bào)喜龍電炒鍋(報(bào)喜龍電器廠)；Mettler AE240天平(十萬(wàn)分之一)；FW100高速萬(wàn)能粉碎機(jī)(天津市泰斯特儀器有限公司)；馬弗爐；GZX-9146MBE型數(shù)顯鼓風(fēng)干燥箱(上海博訊實(shí)業(yè)有限公司)；自動(dòng)雙重蒸餾器(上海亞榮生化儀器有限公司)。

1.2 試藥

士的寧(購(gòu)于中國(guó)藥品生物制品檢定所，批號(hào)0705-200306)；馬錢(qián)子堿(購(gòu)于中國(guó)藥品生物制品檢定所，批號(hào)0704-200104，經(jīng)純化后，用歸一法測(cè)定含量為98.5%)；甲醇(色譜純)(德國(guó)Merck公司)；乙腈(色譜純)(Merck公司)；哇哈哈純凈水；其他試劑均為分析純。

2 方法與結(jié)果

2.1 色譜條件

色譜柱：Hypersil ODS2 5μm4.6mm×250mm；流動(dòng)相：乙腈(A)：水-乙酸-三乙胺(230∶2.4∶0.4)(B)=11∶89；檢測(cè)波長(zhǎng)：254nm；理論板數(shù)按士的寧峰計(jì)算應(yīng)不低于5 000。柱溫：30℃；流速：1.0mL/min；進(jìn)樣量：10μL。

2.2 馬錢(qián)子炮制品與溶液制備

砂燙馬錢(qián)子制備：取潔凈粗河沙加入鍋內(nèi)加熱，用溫程300℃溫度計(jì)距鍋底3mm測(cè)溫，待溫度至230℃時(shí)投入潔凈生馬錢(qián)子，掩埋30s左右，然后不斷翻動(dòng)約3分鐘，至鼓起爆裂并顯棕褐色或深棕色時(shí)迅速出鍋，晾涼。將制備好的樣品用小型粉碎機(jī)粉碎，過(guò)三號(hào)篩備用。

烘烤馬錢(qián)子制備：放入已經(jīng)預(yù)熱至200℃的鼓風(fēng)烘箱中進(jìn)行烘制，30min后取出，晾涼。將制備好的樣品用小型粉碎機(jī)粉碎，過(guò)三號(hào)篩備用。

對(duì)照品溶液的制備：取士的寧6mg、馬錢(qián)子堿對(duì)照品5mg，精密稱(chēng)定，分別置10mL容量瓶中，加甲醇適量使其溶解并稀釋至刻度，搖勻。分別精密量取2mL，置同一10mL容量瓶中，用甲醇稀釋至刻度，搖勻，即得(每1mL含士的寧0.12mg，馬錢(qián)子堿0.1mg)。

供試品溶液的制備：分別取砂燙馬錢(qián)子、烘烤馬錢(qián)子粉1.0g，加入20.0mL(pH=1)的鹽酸水。稱(chēng)重，超聲提取20min，超聲功率250w。稱(chēng)重，補(bǔ)足減失重量。過(guò)濾，棄去初濾液，取續(xù)濾液，取1mL置于10mL容量瓶中，用pH=1的酸水定容，搖勻，分別用作砂燙馬錢(qián)子供試品溶液和烘烤馬錢(qián)子供試品溶液。

2.3 線(xiàn)性關(guān)系考察

精密吸取混合對(duì)照品溶液3、5、8、12、15、20μL，連續(xù)進(jìn)樣3次。以濃度為橫坐標(biāo)，峰面積積分值為縱坐標(biāo)繪制工作曲線(xiàn)。士的寧的回歸方程為：Y=4.4453X+0.3525，r=0.9998、馬錢(qián)子堿的回歸方程為Y=3.4255X-0.6671，r=0.9991，線(xiàn)性關(guān)系良好。

2.4 精密度試驗(yàn)

精密吸取對(duì)照品溶液重復(fù)進(jìn)樣6次，測(cè)定士的寧和馬錢(qián)子堿峰面積。其RSD為0.46%。

2.5 穩(wěn)定性試驗(yàn)

取供試品溶液，分別在0、1、2、4、8、12、24h進(jìn)樣，供試品溶液24h中峰面積無(wú)大變化，士的寧RSD為1.84%，馬錢(qián)子堿RSD為1.99%。供試品溶液在24h內(nèi)穩(wěn)定。

2.6 重復(fù)性試驗(yàn)

取同一批生馬錢(qián)子樣品，平行制備5份，分別進(jìn)樣，測(cè)定峰面積值，士的寧RSD為1.5%，馬錢(qián)子堿RSD為1.89%。表明該實(shí)驗(yàn)方法重現(xiàn)性好。

2.7 加樣回收試驗(yàn)

采用加樣回收法，取已知含量的生品6份各0.1g，精密稱(chēng)定，精密加人對(duì)照品適量，按供試品制備項(xiàng)下方法操作，測(cè)定樣品含量，計(jì)算回收率，結(jié)果士的寧的平均回收率為101.79%，RSD=3.51%;馬錢(qián)子堿的平均回收率為99.86%，RSD=3.86%。

2.8 樣品測(cè)定

精密吸取砂燙馬錢(qián)子供試品溶液、烘烤馬錢(qián)子供試品溶液10μL，注入高效液相色譜儀，測(cè)定士的寧、馬錢(qián)子堿含量。結(jié)果見(jiàn)表1。

表1 士的寧、馬錢(qián)子堿含量測(cè)定結(jié)果

3 小結(jié)與討論

馬錢(qián)子生物堿類(lèi)抗炎鎮(zhèn)痛效果顯著。[1]魏世超等[2]研究發(fā)現(xiàn)馬錢(qián)子總生物堿部分能明顯地抑制大鼠足跖脹，并且還可明顯抑制大鼠肉芽組織增生，抑制率達(dá)37.60%，而士的寧及非生物堿部分對(duì)上述炎癥無(wú)明顯影響。馬錢(qián)子加熱過(guò)程中，士的寧既可以氧化為士的寧的氮氧化合物，也可以開(kāi)環(huán)轉(zhuǎn)化為異士的寧，后兩者也可以進(jìn)一步氧化或開(kāi)環(huán)轉(zhuǎn)化為異士的寧的氮氧化合物，導(dǎo)致士的寧的含量降低，達(dá)到減低馬錢(qián)子毒性的作用。

然而在砂燙過(guò)程中，溫度高低、火力的大小及加熱時(shí)間對(duì)士的寧含量影響很大。因此經(jīng)驗(yàn)不足的實(shí)驗(yàn)者在操作時(shí)，如掌握不好溫度和時(shí)間，會(huì)對(duì)炮制品的質(zhì)量產(chǎn)生很大影響。與砂燙法相比，烘箱加熱的優(yōu)點(diǎn)是受熱均勻，溫度易控制，加熱時(shí)間相對(duì)較長(zhǎng)，士的寧含量變化緩慢，因此炮制品的質(zhì)量容易控制。

[1]易炳學(xué)，周道根，龔千鋒，等.馬錢(qián)子醋制品對(duì)小鼠抗炎作用的實(shí)驗(yàn)研究[J].時(shí)珍國(guó)醫(yī)國(guó)藥,2009,20(12)：3 054-3 055.

[2]魏世超，徐麗君，張秀橋.馬錢(qián)子總生物堿對(duì)大鼠佐劑性關(guān)節(jié)炎的作用[J].中國(guó)藥理學(xué)通報(bào)，2001,17(4)：479-480.

DifferentInfluencebySandScaldingorElectricBakingtoAnti-inflammatoryandAnalgesicIngredientinNuxvomica*

GONGFei-peng1,2,YUHuan2,3,ZHULong-tao2,GONGQian-feng2**

1.JiangxiProvincialPeople'sHospital,Nanchang330000;2.Collegeofpharmacy&JiangxiUniversityofTraditionalChineseMedicine,Nanchang330004;3.CollegeofTraditionalChineseMedicine&BeijingUniversityofChineseMedicine,Beijing100102

Objective: A HPLC based method was established for strychnine and brucine of Nuxvomica, to find the difference between Nuxvomica of stir-frying with sand and baking Nuxvomica. Methods: Make two different kinds of Nuxvomica decoction pieces. The analysis was carried out on C18column by HPLC with acetonitrile(A):water-acetic acid-triethylamine(230:2.4:0.4)(B)=11:89 as mobile phase, the detection wavelength was 254 nm.Results: The result shows that the level of strychnine and brucine in sand scalding Nuxvomica, equal to baking ones.Conclusion: As temperature and time is difficult to control for sand scalding Nuxvomica, baking Nuxvomica can be easily controled during processing in actual production

High-performance Liquid Chromatography, Strychnine, Brucine, Content Determination

國(guó)家中醫(yī)藥行業(yè)專(zhuān)項(xiàng)“中藥飲片調(diào)劑規(guī)范化研究”(項(xiàng)目編號(hào)：201007011)。

**通訊作者：龔千鋒(1952-)，男，教授，博士研究生導(dǎo)師，主要從事中藥炮制研究，E-mail:gongqf2002@163.com。

R283.1

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2013-10-10)