★ 任建鋒 龔千鋒* 鐘凌云 易炳學(xué) 王丕明 朱龍濤 余香

（江西中醫(yī)學(xué)院 南昌 330004）

雄黃（Realgar）為單斜晶系雄黃的礦石，主要成分為二硫化二砷（As2S2），具有解毒、殺蟲、燥濕、祛痰、截瘧等功效[1]。因生品含砷的氧化物，毒性較大，臨床應(yīng)用受到限制。為了對雄黃進行系統(tǒng)的品質(zhì)評價，對雄黃飲片進行改變傳統(tǒng)入藥形式制成雄黃粗顆粒和水飛雄黃進行藥效學(xué)比較研究，旨在為雄黃藥材的臨床應(yīng)用提供科學(xué)依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 實驗動物

昆明小鼠，體重（22±2）g，雌雄各半，由江西中醫(yī)學(xué)院實驗動物中心提供（合格證號：SCXK（贛）2011-0001）。

1.2 實驗材料

雄黃藥材購于江西樟樹天齊堂飲片有限公司，產(chǎn)地湖南，經(jīng)江西中醫(yī)學(xué)院葛菲教授鑒定為硫化物類礦物雄黃族雄黃。

水飛雄黃的制備：取雄黃粉10g樣品至研缽中，加水3mL，研磨5 min至糊狀，再加水適量攪拌1 min，靜置2 min，傾取混懸液，下沉的粗粉繼續(xù)研磨，如此反復(fù)操作數(shù)次，除去雜質(zhì)，共加水3 000mL，合并各次混懸液，靜置2 h，傾去上清液，抽濾，烘箱40℃，干燥2 h，研散，即得。

粗顆粒雄黃的制備：取塊狀雄黃至冰箱中冷藏，取出置研缽研磨粉碎，粉碎成粒徑20目左右的顆粒（粗粉），即得。

分別取上2種藥品過100目篩以4%的淀粉漿助懸，配置成0.013，0.0065，0.0033 g/mL的混懸液。

吲哚美辛腸溶片（山西云鵬制藥有限公司，批號：A110801）；醋酸地塞米松片（浙江仙琚制藥股份有限公司，批號：110603）；烏拉坦（國藥集團化學(xué)試劑有限公司，批號：T20110214）。

酸棗仁水煎液的制作方法：稱取干燥的酸棗仁20 g，加10倍量的水浸泡30 min，然后在電熱套上煮沸，文火煎煮30 min，把水煎液過濾，再藥渣里再加8倍量的水，用同樣的方法煎煮，合并兩次濾液，最后濃縮溶液的濃度至1g/mL，置4℃冰箱保存。

1.3 儀器與試劑

AB104-N萬分之一電子分析天平（梅特勒-托利多儀器（上海）有限公司）；6mm打孔器；移液槍（eppendorf Reference 100μL）；冰醋酸；二甲苯；XZ-4小鼠自主活動儀（中國醫(yī)學(xué)科學(xué)院藥物研究所研制）

1.4 數(shù)據(jù)的處理

所得數(shù)據(jù)用SPSS16.0版統(tǒng)計軟件統(tǒng)計分析。

1.5 實驗方法[3]

1.5.1 鎮(zhèn)痛實驗

取昆明小鼠64只，雌雄各半，隨機分成8組，給藥組分別按高、中、低三個劑量組灌胃給藥，對照組分別灌胃吲哚美辛和等體積的4%的淀粉漿。連續(xù)給藥3天，末次給藥后30 min，每只小鼠腹腔注射0.6%醋酸0.2mL，觀察每只小鼠腹腔注射醋酸后20 min內(nèi)出現(xiàn)扭體反應(yīng)（腹部內(nèi)凹，伸展后肢，臀部抬高作為觀察項）的次數(shù)，計算鎮(zhèn)痛百分率[2]。結(jié)果見表1。

表1 對小鼠醋酸所致扭體反應(yīng)的影響（±s，n=8）

表1 對小鼠醋酸所致扭體反應(yīng)的影響（±s，n=8）

注：與空白組比較，**P＜0.01有極顯著差異。

鎮(zhèn)痛率(%)31.754 13.507 6.398 53.318 41.232 17.536 90.521 0粗顆粒高劑量組粗顆粒中劑量組粗顆粒低劑量組水飛高劑量組水飛中劑量組水飛低劑量組吲哚美辛對照組空白組0.130 0.065 0.033 0.130 0.065 0.033 0.250等體積36.000±5.319**45.625±11.722 49.375±9.927 24.625±5.927**31.000±9.502**43.500±22.672 5.000±5.014**52.750±17.351組別 劑量/g?kg-1扭體數(shù)

1.5.2 抗炎實驗

取健康昆明小鼠64只，雌雄各半，隨機分成8組，給藥組分別按高、中、低三個劑量組灌胃給藥，對照組分別灌胃醋酸地塞米松和等體積的4%的淀粉漿。給藥方法與劑量同1.4.1。末次給藥后30 min，于小鼠左耳兩面涂二甲苯每只20μL致腫，右耳不涂為正常耳。1 h后脫頸處死，用6mm的打孔器沖下左耳和右耳同一部位的圓片，用萬分之一電子天平稱量，計算腫脹度[2]，結(jié)果見表2。

表2 對二甲苯致小鼠耳腫脹的影響（±s，n=8）

表2 對二甲苯致小鼠耳腫脹的影響（±s，n=8）

注：與空白組比較，*P＜0.05有顯著性差異；**P＜0.01有極顯著性差異。

組別粗顆粒高劑量組粗顆粒中劑量組粗顆粒低劑量組水飛高劑量組水飛中劑量組水飛低劑量組醋酸地塞米松對照組空白組劑量/g?kg-1 0.130 0.065 0.033 0.130 0.065 0.033 0.0013等體積腫脹度/mg 4.163±2.455*8.775±1.391 8.738±3.421 3.538±3.320**5.325±2.864 7.675±2.520 3.388±3.040**7.738±6.780腫脹率(%)28.222 41.698 41.176 19.391 26.916 39.120 21.332 41.991抑制率(%)47.011-13.409-12.924 54.281 31.179 0.808 56.219

1.5.3 鎮(zhèn)靜實驗

取健康昆明種小鼠64只，雌雄各半，按體重隨機分成8組，然后給藥組分別灌胃2種藥品，對照組分別灌胃酸棗仁水煎液和4%淀粉漿。連續(xù)給藥5天，給藥體積為0.2mL/10g，給藥后30 min，將各組小鼠分別放入XZ-4小鼠自主活動儀中使其適應(yīng)5 min后，測定各組小鼠5 min內(nèi)的自發(fā)活動次數(shù)[2]。結(jié)果見表3。

表3 對小鼠自主活動的影響（±s，n=8）

表3 對小鼠自主活動的影響（±s，n=8）

注：與空白組比較，*P＜0.05有顯著性差異；**P＜0.01有極顯著性差異。

自發(fā)活動抑制率%0.57 0.50 0.08-4.12-3.05-3.25 43.80 0組別粗顆粒高劑量組粗顆粒中劑量組粗顆粒低劑量組水飛高劑量組水飛中劑量組水飛低劑量組酸棗仁對照組空白組劑量/g?kg-1 0.130 0.065 0.033 0.130 0.065 0.033 10.000等體積活動次數(shù)155.035±9.561 155.140±6.250 155.791±5.886 162.361±4.736*160.690±4.781 160.995±6.701 87.625±4.838**159

1.5.4 中樞抑制作用比較

取健康昆明種小鼠64只，雌雄各半，按體重隨機分成8組，給藥方法同1.5.3，連續(xù)給藥5天，末次給藥后30 min，各鼠分別腹腔注射20%烏拉坦溶液閾下劑量37.8mg/kg，即刻記錄給藥后15 min內(nèi)各組小鼠翻正反射消失1 min以上的小鼠只數(shù)[2]，結(jié)果見表4。

表4 對小鼠入睡個數(shù)的影響（±s，n=8）

表4 對小鼠入睡個數(shù)的影響（±s，n=8）

注：與空白組比較，*P＜0.05有顯著性差異。

睡眠發(fā)生率%37.5 25 25 25 25 12.5 62.5*12.5組別粗顆粒高劑量組粗顆粒中劑量組粗顆粒低劑量組水飛高劑量組水飛中劑量組水飛低劑量組酸棗仁對照組空白組劑量/g?kg-1 0.130 0.065 0.033 0.130 0.065 0.033 10.000等體積入睡數(shù)3 2 2 2 2 1 5 1

2 討論

實驗均采用灌胃方式給藥，發(fā)現(xiàn)水飛雄黃高、中劑量組和粗顆粒雄黃高劑量組小鼠扭體次數(shù)均比空白對照組少，兩者間均有極顯著性差異（P＜0.01），說明水飛雄黃高、中劑量組和粗顆粒雄黃高劑量具有很好的鎮(zhèn)痛作用，并且水飛雄黃中劑量組和粗顆粒雄黃中劑量組比較有顯著性差異（P＜0.05），水飛雄黃中劑量組比粗顆粒雄黃中劑量組鎮(zhèn)痛效果好。

粗顆粒雄黃高劑量組與空白對照組比較有顯著性差異（P＜0.05），水飛雄黃高劑量組與空白對照組比較有極顯著性差異（P＜0.01），均具有抗炎效果，但藥效沒有明顯改變。

水飛雄黃高劑量組與空白組對照組比較，有顯著性差異（P＜0.05），有鎮(zhèn)靜作用，酸棗仁對照組與空白組比較有極顯著性差異（P＜0.01）。

中樞抑制作用比較酸棗仁對照組與空白組比較有顯著性差異，給藥后可使閾下劑量烏拉坦誘導(dǎo)的小鼠入睡率達(dá)62.5%，粗顆粒雄黃與水飛雄黃之間相同劑量組之間比較無統(tǒng)計學(xué)意義。

[1]國家藥典委員會.中華人民共和國藥典[S].北京：中國醫(yī)藥科技出版社，2010：316.

[2]紀(jì)淑芳，張亞敏，謝福全，等.雄黃生品與酸奶飛炮制品的藥效學(xué)比較[J].長春中醫(yī)學(xué)院學(xué)報，2000，（16）1：3.

[3]李儀奎.中藥藥理實驗方法學(xué)[M].上海：上?？茖W(xué)技術(shù)出版社，2006.10.