袁海英 羅德福 黎 蕓

（1.四川大學(xué)華西藥學(xué)院，四川 雅安 625000；2.四川武警雅安支隊(duì)衛(wèi)生隊(duì)，四川 雅安 625000；3.重慶市中醫(yī)院，重慶 400021）

金關(guān)片是含有雷公藤的復(fù)方制劑，具有補(bǔ)益肝腎，祛寒止痛，活血通絡(luò)，增強(qiáng)腎上腺皮質(zhì)功能，免疫調(diào)整等作用，適用于治療類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎，強(qiáng)直性脊柱炎，增生性關(guān)節(jié)炎等病證［1］。筆者采用HPLC 法對(duì)金關(guān)片中起主要藥理作用的雷公藤甲素進(jìn)行了含量分析。結(jié)果表明雷公藤甲素在此條件下分離較好，檢測(cè)靈敏度高。

1 材 料

1.1 儀器AE-240電子天平（METTLER），Agilent 1260 高效液相色譜儀，UPT-1-40L 優(yōu)普超純水器，AS20500 超聲儀（SCIENCE）。

1.2 試藥 金關(guān)片（批號(hào)：110501、120501、121001，雅安三九藥業(yè)有限公司）；雷公藤甲素（批號(hào)：1566-200201，中國(guó)藥品生物制品檢定所）；乙腈（色譜純，批號(hào)：1633930 215，Merck，）；水為超純水；其他試劑均為分析純。

1.3 溶液制備［2-6］（1）對(duì)照品溶液的制備。精密稱取雷公藤甲素對(duì)照品2.50 mg 于25 mL 量瓶中，用甲醇溶解并稀釋至刻度，搖勻即得質(zhì)量濃度為0.10 mg/mL的對(duì)照品貯備液。再精密吸取此貯備液5 mL 于25 mL 容量瓶中，加甲醇定容到刻度搖勻即得濃度為0.02 mg/mL的對(duì)照品溶液。（2）供試品溶液的制備。取金關(guān)片30片，除去包衣，研細(xì)，精密稱定重量，稱取細(xì)粉約3 g，精密稱定后置具塞錐形瓶中，精密加入甲醇-氯仿（1∶1）50 mL，密塞，稱定質(zhì)量，放置過(guò)夜，超聲處理30 min，再稱定質(zhì)量，用甲醇-氯仿（1∶1）補(bǔ)足減失的質(zhì)量，濾過(guò)，精密量取續(xù)濾液25 mL 蒸干，殘?jiān)蛹状?氯仿（1∶1）3～5 mL 使溶解，加于中性氧化鋁柱（12 g，內(nèi)徑1.5 cm，濕法裝柱）上，用甲醇-氯仿（1∶3）洗脫，收集洗脫液50 mL 蒸干，殘?jiān)眉状既芙獠⒍ㄈ葜? mL，搖勻，濾過(guò)即得供試品溶液。

2 方法與結(jié)果

2.1 系統(tǒng)適應(yīng)性試驗(yàn) 色譜柱：Waters Symmetry Shield RP18（4.6 mm×250 mm，5 μm）。流動(dòng)相：乙腈-0.3%磷酸二氫鉀（23∶77）。檢測(cè)波長(zhǎng)：220 nm；流速：1.0 mL/min。柱溫：25℃。進(jìn)樣量：10 μL。在此色譜條件下，雷公藤甲素達(dá)到基線分離，理論塔板數(shù)按雷公藤甲素計(jì)不低于5000，樣品中其他成分對(duì)雷公藤甲素的測(cè)試無(wú)干擾。色譜圖見圖1。

圖1 HPLC 色譜圖

2.2 線性關(guān)系考察 分別吸取對(duì)照品貯備液0.2、0.4、0.8、1.6、2.4、3.2 mL，分別置10 mL 量瓶中，加甲醇稀釋至刻度搖勻，分別吸取10uL，注入液相色譜儀，按上述色譜條件測(cè)定峰面積，以對(duì)照品的進(jìn)樣量X（μg）為橫坐標(biāo)，峰面積Y 為縱坐標(biāo)，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，并計(jì)算得線性回歸方程為：Y=2056.8898X+0.1878，r=0.9999。結(jié)果表明雷公藤甲素在0.02～0.32 μg 范圍內(nèi)呈良好的線性關(guān)系。

2.3 精密度試驗(yàn) 分別精密吸取同一對(duì)照品溶液10 μL，連續(xù)進(jìn)樣6次，記錄雷公藤甲素的峰面積，以峰面積計(jì)算RSD 為0.46%。

2.4 穩(wěn)定性試驗(yàn) 精密吸取新配制的對(duì)照品溶液和新制備的供試品溶液，分別于0、2、4、6、8、12 h 進(jìn)樣10 μL 測(cè)定，記錄每次測(cè)定的雷公藤甲素的峰面積，以峰面積計(jì)算對(duì)照品RSD 為1.70%，供試品RSD 為1.60%，結(jié)果表明對(duì)照品和供試品溶液在12 h 內(nèi)基本穩(wěn)定。

2.5 重復(fù)性試驗(yàn) 取同一批樣品，按1.3 項(xiàng)下方法制備5 份供試品溶液，按上述色譜條件測(cè)定。結(jié)果樣品中雷公藤甲素含量的平均值4.7 μg/片，RSD 為1.89%。

2.6 加樣回收試驗(yàn) 精密稱取已知含量的樣品共6份，分別精密加入雷公藤甲素對(duì)照品溶液（20.0 μg/mL）2 mL，按“2.3”項(xiàng)下方法制備供試品溶液，按上述色譜條件測(cè)定，計(jì)算雷公藤甲素的平均加樣回收率為97.92%，RSD=1.81%，結(jié)果見表1。

表1 回收率試驗(yàn)結(jié)果（n=6）

2.7 樣品含量測(cè)定 取3 批金關(guān)片樣品，按“2.3”項(xiàng)下方法制備供試品溶液，對(duì)照品溶液與供試品溶液分別進(jìn)樣10 μL，按上述色譜條件測(cè)定，采用外標(biāo)法計(jì)算樣品中雷公藤甲素的含量。結(jié)果樣品批號(hào)為110501、120501、121001的 雷 公 藤 甲 素 含 量 分 別 為4.7、6.1、4.7 μg/片。

3 討論

金關(guān)片為雷公藤?gòu)?fù)方制劑，其療效明顯，不良反應(yīng)少，是一個(gè)不可多得具有很高價(jià)值的治療RA的藥物，本試驗(yàn)采用HPLC 法，對(duì)金關(guān)片中起主要藥理作用的雷公藤甲素進(jìn)行了含量測(cè)定。參照文獻(xiàn)［7］先將雷公藤甲素對(duì)照品溶液進(jìn)行光譜檢測(cè)，其最大吸收峰在220 nm 處出現(xiàn)，故選擇220 nm 作為測(cè)定雷公藤甲素的檢測(cè)波長(zhǎng)；再分別對(duì)流動(dòng)相、色譜柱進(jìn)行了篩選，本實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明：采用Waters Symmetry Shield RP18（4.6 mm×250 mm，5 μm）色譜柱；乙腈-0.3%磷酸二氫鉀溶液（23∶77）作流動(dòng)相；檢測(cè)波長(zhǎng)為220 nm時(shí)，供試品色譜中雷公藤甲素能得到較好的分離測(cè)定。

［1］接紅宇，吳啟富.金關(guān)片治療類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎47例［J］.中醫(yī)臨床研究，2012，24（4）：58-60.

［2］高麗，聶中標(biāo).不同產(chǎn)地雷公藤藥材中雷公藤甲素含量測(cè)定［J］.山西中醫(yī)，2012，28（8）：42-44.

［3］王艷芝.HPLC 法測(cè)定雷公藤片中雷公藤甲素的含量［J］.藥品鑒定，2012，7（4）：44-45.

［4］王賢英，謝香菊.中藥材火把花中雷公藤甲素及表兒茶素的含量測(cè)定［J］.重慶中草藥研究，2012，65（1）：17-19.

［5］劉建群，劉一文.HPLC 法測(cè)定江西雷公藤各部位雷公藤甲素的含量［J］.江西中醫(yī)藥，2012，43（6）：52-54.

［6］張濤，金描真.HPLC 法測(cè)定抗哮喘滴丸中雷公藤甲素的含量［J］.安徽醫(yī)藥，2011，15（7）：830-831.

［7］鄧海英，康四和.高效液相色譜法測(cè)定雷公藤片中雷公藤甲素含量［J］.醫(yī)藥導(dǎo)報(bào)，2008，27（10）：1256-1257.