趙國楨，嵇 波

(1.首都醫(yī)科大學(xué)，北京100064;2.北京中醫(yī)藥大學(xué)，北京100029)

支氣管哮喘是一種以嗜酸粒細(xì)胞和肥大細(xì)胞反應(yīng) 為主的氣道變應(yīng)性炎癥和氣道高反應(yīng)性為特征的疾病，易感者對此類炎癥表現(xiàn)為不同程度的可逆性氣道阻塞癥狀。哮喘是全球最常見的，且嚴(yán)重危害人類健康的慢性肺部疾病，其發(fā)病率和病死率均有上升趨勢。目前使用糖皮質(zhì)激素已成為治療本病的主要用藥方式，但是長期、大劑量服用本品有諸多不良反應(yīng)。中藥貼敷療法可以通過穴位刺激和藥物滲透吸收的雙重作用，達(dá)到調(diào)整人體臟腑功能、消除炎癥的治療目的。根據(jù)“緩則治其本”的理論，在緩解期中藥穴位貼敷治療哮喘取得了滿意的效果。本文通過對近年來穴位貼敷防治支氣管哮喘的基礎(chǔ)研究文獻(xiàn)進(jìn)行系統(tǒng)整理、分析，以期明確以往基礎(chǔ)研究的方法、水平、途徑和靶點，旨在為未來基礎(chǔ)研究提供指導(dǎo)，為穴位貼敷法臨床治療支氣管哮喘提供科學(xué)依據(jù)。筆者查閱CNKI網(wǎng)站，檢索項“關(guān)鍵詞”，檢索詞“穴位貼敷”和“哮喘”，共搜集動物實驗文獻(xiàn)22篇，其中大鼠8篇、豚鼠13篇和小鼠1篇。本文分別依據(jù)3種動物，對不同的研究方法和結(jié)果進(jìn)行總結(jié)整理。

1 研究方法分析

1.1 大鼠

(1)選用大鼠的條件:8篇使用大鼠進(jìn)行研究的文章中，用Wistar大鼠3次，平均體質(zhì)量在250g左右;SD大鼠5次，平均體質(zhì)量在170 g左右，僅有一篇提到月齡，為6～9個月，見表1。(2)大鼠哮喘造模方法:見表1，模型制備方法主要有兩方面內(nèi)容。第一，致敏方法各有不同，8篇大鼠哮喘模型中，有五種配比方案，包括10%卵蛋白、0.5%卵蛋白和氫氧化鋁配成凝膠、10 g/L卵蛋白和100 g/L氫氧化鋁溶液、100 g/L卵蛋白(內(nèi)含百日咳桿菌)和100 g/L卵蛋白和氫氧化鋁溶液。致敏注射部位多數(shù)為腹腔注射;也有胸和腹股溝等處注射后，腹腔注射百日咳桿菌菌苗1 ml;還有1篇以100 g/L卵蛋白(內(nèi)含百日咳桿菌)對腹股溝、腹、前足跖皮下注射，并且腹腔注射。第二，誘發(fā)哮喘方法多數(shù)一致，2%卵蛋白霧化吸入;也有學(xué)者以1%或5%的卵蛋白霧化吸入，各有1篇文獻(xiàn)報道。(3)模型評價方法:多以大鼠出現(xiàn)煩躁、呼吸頻率加快、腹式呼吸明顯和點頭運動等癥狀為造模成功;也有以大鼠頭、面部瘙癢，呼吸加深、加快，少動，弓背，前肢縮抬，點頭呼吸，咳嗽，重者可聞及哮鳴音，呈哮喘樣表現(xiàn)者，提示造模成功。(4)貼敷藥物:種類繁多，8篇文章中有6種藥物組成方案，且8篇文章中有5篇介紹了貼敷藥物的規(guī)格。(5)貼敷部位:選用部位各異，8篇文章中有6類選擇貼敷部位的方案。(6)貼敷時間:8篇文章中共有7個治療方案，都采用每日治療1次，每次貼敷的時間分別為1.5 h、2 h、3 h、4 h 和 6 h;治療的天數(shù)分別為 7 d、9 d、14 d 和21 d。

表1 大鼠為受試對象的研究方法

1.2 豚鼠

(1)選用豚鼠的條件:多選用體重為250 g左右的豚鼠。(2)哮喘模型制備方法:13篇文章中，有11篇先以10%卵蛋白腹腔注射致敏，后1%卵蛋白霧化誘發(fā)哮喘;1篇以10%卵蛋白腹腔注射致敏，1%卵蛋白霧化誘發(fā)哮喘;1篇以1%卵蛋白3 min霧化致敏，1%卵蛋白霧化誘發(fā)哮喘。(3)模型評價方法:以腹式呼吸明顯、呼吸頻率加快且節(jié)律不整、活動減少等癥狀提示誘喘成功。(4)貼敷藥物:種類繁多，13篇文章中有4種藥物組成方案，其中有7篇采用麻黃、細(xì)辛、白芥子、甘遂和生姜等組成;有5篇介紹了貼敷藥物的規(guī)格。(5)貼敷部位:選用部位各異，13篇文章中有6類選擇貼敷部位的方案，其中有5篇選用相當(dāng)于人體大椎穴、雙肺俞和腎俞部位進(jìn)行貼敷治療。(6)貼敷時間:13篇文章中共有7個治療方案，都采用每日治療1次，每次貼敷的時間分別為 0.5 h、1 h、3 h、4 h 和 6 h;治療的天數(shù)分別為 1 d、7 d、8 d、10 d、13 d、14 d 和 21 d。見表2。

表2 豚鼠為受試對象的研究方法

1.3 小鼠

(1)選用小鼠條件:選用BALB/c小鼠，體質(zhì)量30 g左右。(2)造模方法:于第1、7、15天腹腔注射OVA 溶液(OVA20 μg 和氫氧化鋁 1 mg)0.2 ml，于實驗第21天起將小鼠置于密閉容器內(nèi)，予以20 g/LOVA生理鹽水霧化激發(fā)，1次/d，每次30 min，連續(xù)7 d。(3)模型評價:以呼吸急促深快、煩躁嗆咳及點頭運動等癥狀的出現(xiàn)為激發(fā)成功。(4)貼服藥物、部位和時間見表3。

表3 小鼠為受試對象的研究方法

2 動物實驗用藥情況分析

本文收錄的22篇文章中，有3篇未提使用藥物成分。其余19篇中，白芥子提到19次，細(xì)辛提到17次，甘遂提到14次，延胡索提到12次，麻黃提到9次，黃岑提到5次，白芷提到4次，皂角提到3次，胡椒、半楓荷、蘇子、丁香、肉桂、海螵蛸、輕粉、元胡都只提到1次。準(zhǔn)備時將藥物粉碎成細(xì)粉，混勻。臨用前取藥粉10 g，以生姜汁10 ml調(diào)和成藥餅。

3 穴位選取

本文收錄的22篇文章中，有3篇未提貼敷的穴位。其余19篇中，肺俞提到17次，大椎穴提到10次，腎俞提到9次，定喘穴提到7次，脾俞提到5次，風(fēng)門穴、膈俞提到2次，貼敷于督脈和膀胱經(jīng)提到2次，厥陰俞、心俞提到1次。

4 穴位貼敷治療哮喘的機制研究

4.1 大鼠的基礎(chǔ)研究

4.1.1 對體液免疫的影響 穴位貼敷可以通過減輕免疫炎性反應(yīng)，對哮喘有較好的防治作用。司小兵等［2］觀察穴位貼敷“咳喘寧”貼膏對支氣管哮喘模型大鼠血清IgE的影響，發(fā)現(xiàn)“咳喘寧”貼膏能降低哮喘大鼠血清IgE水平;陳玉等［8］發(fā)現(xiàn)三九貼穴位貼敷能降低哮喘大鼠血清IgE水平。

4.1.2 對炎癥因子的影響 穴位貼敷可以通過調(diào)節(jié)炎癥因子的變化以改善Th1和Th2細(xì)胞的失衡狀態(tài)，緩解哮喘病情。姚紅等［1］發(fā)現(xiàn)中藥穴位敷貼療法對哮喘大鼠肺組織中的白細(xì)胞介素－4(IL－4)、γ干擾素(IFN－γ)表達(dá)的影響表達(dá)具有明確的影響，并對哮喘大鼠肺組織中嗜酸性粒細(xì)胞的浸潤有明顯的抑制作用;張玉英等［4］發(fā)現(xiàn)止喘貼可以升高血清中IFN－γ，降低血清中IL－4，同時張氏等［5］研究亦發(fā)現(xiàn)止喘貼可以升高血清中IL－12含量、降低血清中IL－5含量;喻曉等［6］研究發(fā)現(xiàn)咳喘散穴位敷貼可以降低血清中IL－4和ECP含量，升高血清中IFN－C含量;向希雄等［3］發(fā)現(xiàn)喘敷靈巴布劑能抑制哮喘大鼠PBMC中IL－4基因的轉(zhuǎn)錄及氣道內(nèi)EOS釋放炎癥介質(zhì)、細(xì)胞因子，減輕氣道上皮損傷和氣道高反應(yīng)性。

樹突細(xì)胞(dendritic cells，DC)是全身最強大的抗原遞呈細(xì)胞(APC)。DC具有獨特的刺激初始型T細(xì)胞增殖的功能，還能直接影響Th0細(xì)胞的分化方向，決定Th1/Th2的偏移類型，并在啟動免疫反應(yīng)和決定免疫走向方面起著關(guān)鍵的作用。王麗新等［7］用免疫組化方法觀察大鼠肺組織樹突狀細(xì)胞表達(dá)水平，發(fā)現(xiàn)穴位敷貼療法可下調(diào)哮喘大鼠樹突狀細(xì)胞的表達(dá)，從而抑制肺內(nèi)炎癥。

4.2 豚鼠的基礎(chǔ)研究

4.2.1 對哮喘效應(yīng)的影響 王茵萍等［9］研究“白芥子涂方”巴布劑敷貼哮喘豚鼠的背部，發(fā)現(xiàn)其可明顯延長豚鼠誘導(dǎo)后哮喘潛伏期，明顯減輕其哮喘發(fā)作程度，縮短哮喘持續(xù)時間，并改善肺組織病理狀態(tài)。同時，王茵萍等［18］“白芥子涂法”復(fù)方對豚鼠誘導(dǎo)后哮喘潛伏期及哮喘發(fā)作程度的效應(yīng)優(yōu)于單方，并且藥物中白芥子預(yù)防與控制實驗性哮喘的作用最強。

4.2.2 對炎癥因子的影響 穴位貼敷治療可以通過調(diào)節(jié)炎癥因子水平，以減輕哮喘時氣道的炎性反應(yīng)及氣道高反應(yīng)性。王艷杰等［12］發(fā)現(xiàn)穴位貼敷天灸透皮吸收劑藥貼與地塞米松均能降低哮喘豚鼠血清腫瘤壞死因子α水平(TNF－α);何麗等［13］發(fā)現(xiàn)喘敷靈穴位敷貼能降低哮喘豚鼠血清IL－8、TNF－α水平;廖韓波等［14］發(fā)現(xiàn)TDD藥貼可降低哮喘豚鼠血清中IL－4的水平;王平平等［17］發(fā)現(xiàn)穴位貼敷經(jīng)皮給藥藥貼可通過降低MMP－9水平，對支氣管哮喘產(chǎn)生治療作用;李建保等［19，21］發(fā)現(xiàn)小兒防哮敷貼粉可以有效延長哮喘豚鼠引喘潛伏期，對哮喘豚鼠IFN－γ分泌有促進(jìn)作用，且早期敷貼治療對哮喘豚鼠LXA4釋放有較強的促進(jìn)作用，在哮喘的發(fā)病中起保護(hù)作用;王平平等［16］發(fā)現(xiàn)穴位貼敷經(jīng)皮給藥藥貼可能通過降低血清中COX－2水平，從而對哮喘產(chǎn)生治療作用。

4.2.3 對尿液標(biāo)記物的影響 劉莉等［15，20］通過檢測大鼠尿液的UPLC－Q－TOF色譜，初步確認(rèn)氮4－乙?；铡?－甲基腺苷以及未確定化合物(荷質(zhì)比為365.14)為哮喘發(fā)作潛在的生物標(biāo)志物，認(rèn)為甲基戊二酸、1－甲基次黃苷為冬病夏治方治療哮喘潛在的生物標(biāo)志物。

4.2.4 對氣管痙攣的影響 沈惠風(fēng)等［11］觀察敷貼后含藥血清對抗由氯化乙酰膽堿引起的豚鼠體外螺旋氣管條的收縮作用，發(fā)現(xiàn)對抗Ach而起到解痙作用是中藥循經(jīng)敷貼法治療哮喘的機制之一，并有一定的時效關(guān)系;同時，中藥循經(jīng)敷貼法可能具有預(yù)防哮喘的作用。

4.2.5 對生物活性因子的影響 內(nèi)源性一氧化氮(NO)具有廣泛的生物學(xué)作用，能擴張血管，引起支氣管黏膜充血、水腫，氣道高反應(yīng)性和氣道炎癥，血漿NO水平與哮喘病情密切相關(guān)。何麗等［10］發(fā)現(xiàn)中藥喘敷靈穴位敷貼可降低哮喘豚鼠肺組織NO、NOS水平，對哮喘有一定的防治作用。

4.3 小鼠的基礎(chǔ)研究

血清中總IgE水平和特異性IgE水平的增高是支氣管哮喘的主要特征;IL－4是Th2細(xì)胞分泌的細(xì)胞因子，對啟動B淋巴細(xì)胞合成IgE起關(guān)鍵作用;轉(zhuǎn)錄因子T－bet和GATA－3在Th細(xì)胞的分化調(diào)控中發(fā)揮著關(guān)鍵性的作用。李月梅等［22］發(fā)現(xiàn)中藥貼劑穴位敷貼可顯著降低哮喘小鼠IgE、IL－4水平，抑制轉(zhuǎn)錄因子GATA－3的基因表達(dá)，同時增強轉(zhuǎn)錄因子T－bet的基因表達(dá)，從而達(dá)到治療哮喘的目的。

5 討論

穴位敷貼在中國的應(yīng)用已有數(shù)千年的歷史。早在《內(nèi)經(jīng)》中有:“從內(nèi)之外者，調(diào)其內(nèi)，從外之內(nèi)者，治其外;從內(nèi)之外，而盛于外者，先調(diào)其內(nèi)而后治其外，從外之內(nèi)而盛于內(nèi)者，先治其外而后調(diào)其內(nèi)，內(nèi)外不相及則治主病之旨?！庇种赋鏊幬锏淖饔眠^程為“切于皮膚，徹于肉理，攝于吸氣，融于滲液?！彼幬镔N敷于體表皮膚腧穴之上，一方面可透達(dá)皮膚粘膜，直接吸收入血脈而起作用;另一方面通過藥物對腧穴的刺激和經(jīng)絡(luò)的傳導(dǎo)，使中藥發(fā)揮治療相關(guān)臟腑疾病的作用。此外，藥物通過經(jīng)絡(luò)系統(tǒng)調(diào)節(jié)全身臟腑氣血的功能［23］。

目前穴位貼敷在臨床上應(yīng)用日益廣泛，臨床和實驗研究表明，穴位敷貼療法對各系統(tǒng)、器官組織有廣泛的調(diào)節(jié)作用，涉及神經(jīng)、心血管、呼吸、消化、免疫、腫瘤、骨科等，且在各類疾病治療中發(fā)揮著獨特的治療優(yōu)勢，尤其穴位敷貼在治療哮喘方面得到人們關(guān)注。本文僅對近5年來穴位敷貼調(diào)治哮喘的基礎(chǔ)研究進(jìn)行了系統(tǒng)整理和分析，有以下幾個方面特點:第一，種類不同、體重各異，而同種動物的體重也各不相同。近5年穴位貼敷治療哮喘的基礎(chǔ)研究，實驗動物多用大鼠(SD大鼠、Wistar大鼠)、豚鼠和小鼠。Wistar大鼠較SD大鼠體重偏大，多在250 g左右，大于200 g，而SD大鼠體重偏小，多在160 g左右，一般不超過200 g;豚鼠體重多在250 g左右;小鼠體重30 g左右。第二，哮喘模型制備多采用卵蛋白注射致敏和卵蛋白霧化吸入誘發(fā)哮喘，但致敏和誘發(fā)哮喘發(fā)作的卵蛋白注射部位、濃度和劑量各有差異。第三，貼敷藥物組成多樣，收錄的22篇文章中有19篇詳細(xì)說明藥物的組成，被提到10次以上的藥物包括白芥子提到19次，細(xì)辛提到17次，甘遂提到14次，延胡索提到12次等。第四，穴位使用各異，收錄的22篇文章中有19篇給出穴位組選，被提到10次以上的穴位包括肺俞提到17次、大椎穴提到10次。第五，治療方案種類繁多，涉及每日治療的次數(shù)、每次治療的時間、共治療的次數(shù)等。第六，在基礎(chǔ)研究方面，近五年應(yīng)用大鼠的研究主要側(cè)重于體液免疫(血清IgE)、炎癥因子(肺組織IL－4和IFN－γ表達(dá)、PBMC中 IL－4表達(dá)、血清中 IFN－γ、IL－4、IL－5、ECP、IFN－C 和 IL－12含量)，尤其發(fā)現(xiàn)穴位敷貼療法可下調(diào)哮喘大鼠樹突狀細(xì)胞的表達(dá)，從而抑制肺內(nèi)炎癥;應(yīng)用豚鼠研究主要包括對哮喘效應(yīng)(哮喘潛伏期及哮喘發(fā)作程度)、炎癥因子(血清TNF－α、IL－8、IL－4、IFN －γ 和COX －2含量)、尿液標(biāo)記物(甲基戊二酸、1－甲基次黃苷)、氣管痙攣和生物活性因子(肺組織NO、NOS水平);應(yīng)用小鼠的研究包括體液因子(血清IgE含量)、炎癥因子(血清IL－4水平)，尤其穴位貼敷可以抑制轉(zhuǎn)錄因子GATA－3的基因表達(dá)，同時增強轉(zhuǎn)錄因子T－bet的基因表達(dá)，從而達(dá)到治療哮喘的目的。

通過對近5年來的穴位敷貼基礎(chǔ)研究文獻(xiàn)分析，發(fā)現(xiàn)穴位貼敷治療哮喘的實驗研究開展的較少，使用的動物、模型制備方法、貼敷的藥物組成、穴位的選取、貼敷的部位、貼敷部位的尺寸和治療方案等尚需規(guī)范和商榷，以利于后續(xù)研究的連續(xù)性、借鑒性和實用性。中藥透皮給藥盡管在臨床上顯示了良好的療效，但還需要進(jìn)行大量系統(tǒng)的實驗研究工作，在基礎(chǔ)研究方面，很多領(lǐng)域，例如黏附分子、細(xì)胞因子受體、氣道高反應(yīng)性、基因和蛋白水平等類似的研究很少涉足，且研究的深度也不夠，尚需加強效應(yīng)、效應(yīng)規(guī)律和機制等方面的研究。

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