覃惠洵 劉琳琳 郝洪軍 劉鳳君 高 楓

北京大學(xué)第一醫(yī)院神經(jīng)內(nèi)科 北京 100034

MS是一種以中樞神經(jīng)系統(tǒng)炎性多灶性脫髓鞘為特征的自身免疫性疾病，其臨床表現(xiàn)復(fù)雜多變，可表現(xiàn)為運(yùn)動無力、肢體輕癱、感覺異常、視力障礙、復(fù)視、眼球震顫、構(gòu)音障礙、意向性震顫、癲、共濟(jì)失調(diào)、深感覺障礙和括約肌功能障礙等，主要特征為空間多發(fā)性和時間多發(fā)性［1］。因為該病有較高的發(fā)病率、慢性病程及青壯年易感性，目前越來越受到臨床的重視。本研究通過回顧性分析MS患者與對照組患者OCB、腦脊液及血清抗AQP4 抗體的差異，以觀察MS患者的OCB、腦脊液及血清抗AQP4抗體陽性率。

1 資料與方法

1.1 臨床資料 30例MS組患者為2011-04—2012-02北京大學(xué)第一醫(yī)院門診或住院確診為MS患者，均符合2010 版MS McDonald 診 斷 標(biāo) 準(zhǔn)［2］，男11 例，女19 例，平 均 年 齡（33.5±10.5）歲；48例NND 組患者為同期北京大學(xué)第一醫(yī)院門診就診或住院收治的診斷為NND 的患者（診斷包括中樞神經(jīng)系統(tǒng)腫瘤、動脈硬化性腦梗死、癲、運(yùn)動神經(jīng)元病、線粒體病等），男21例，女27例，平均年齡（36.5±13.4）歲；50例外科手術(shù)組患者為同期北京大學(xué)第一醫(yī)院住院收治的采用腰麻作為麻醉方式的外科手術(shù)患者（診斷包括泌尿系結(jié)石、前列腺增生或外傷性骨折等非神經(jīng)系統(tǒng)疾?。?，男30例，女20例，平均年齡（39.1±12.0）歲。3組患者性別與年齡差異均無統(tǒng)計學(xué)意義（P＞0.05），具有可比性。所有研究對象均就診后送檢血清及腦脊液標(biāo)本至北京大學(xué)第一醫(yī)院神經(jīng)免疫室行OCB及抗AQP4抗體檢測。所有研究對象就診前均未使用過任何激素或其他免疫抑制劑類藥物治療。

1.2 方法

1.2.1 研究方法：采用回顧性分析法，對比分析MS 組、NND 組及外科手術(shù)組OCB、腦脊液及血清抗AQP4抗體陽性率的差異，以評價OCB 及抗AQP4 抗體在MS診斷中的意義。

1.2.2 實驗方法

1.2.2.1 OCB測定：使用sebia HYDRASYS 2系列儀器進(jìn)行檢測。采用等電聚焦電泳的分離方法，在PH 值3.0～10.0范圍內(nèi)將腦脊液及對照血清標(biāo)本進(jìn)行電泳分離，將分離的蛋白條帶用堿性磷酸酶標(biāo)記的人IgG 抗體再進(jìn)行免疫固定，然后進(jìn)行蛋白區(qū)帶酸性二甲基甲酰胺（TTF3）染色，觀察結(jié)果。根據(jù)患者腦脊液及對照血清檢測結(jié)果的對比情況，國際上分為以下5種表現(xiàn)類型：Ⅰ型，腦脊液及血清均未見不連續(xù)的蛋白條帶；Ⅱ型，腦脊液出現(xiàn)兩條或兩條以上不連續(xù)的蛋白條帶，而血清未出現(xiàn)蛋白條帶；Ⅲ型，腦脊液及血清均出現(xiàn)兩條或兩條以上不連續(xù)的蛋白條帶，但腦脊液存在不同于血清的蛋白條帶；Ⅳ型，腦脊液及血清均出現(xiàn)兩條或兩條以上不連續(xù)的蛋白條帶，且腦脊液的蛋白條帶與血清的蛋白條帶完全相同；Ⅴ型，腦脊液及血清均出現(xiàn)相同區(qū)域的數(shù)條蛋白條帶。根據(jù)OCB的判定標(biāo)準(zhǔn)，Ⅱ型及Ⅲ型定為OCB陽性。

1.2.2.2 抗AQP4抗體的測定：用純化的AQP4全肽段作為包被抗原，制成固相載體，往包被微孔板依次加入樣本，再加入陽性對照及陰性對照，37℃孵育120 min后洗板，再加入生物素化的AQP4抗體，37℃孵育60min后再洗板，再加入生物素化的蠟根過氧化物酶，37℃孵育60min后洗板，加入顯色底物液，加入終止液，在伯樂680酶標(biāo)儀450nm 波長讀取光密度值。

1.3 統(tǒng)計學(xué)方法 采用SPSS 13.0軟件進(jìn)行統(tǒng)計學(xué)分析，多組計量資料比較采用方差分析，計數(shù)資料比較采用χ2檢驗，P＜0.05為差異有統(tǒng)計學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 NND 組與外科手術(shù)組OCB、腦脊液及血清抗AQP4抗體陽性率的比較 48 例NND 組患者中，OCB、腦脊液抗AQP4抗體及血清抗AQP4抗體陽性者各2例；50例外科手術(shù)組患者中，OCB陽性者0例，腦脊液及血清抗AQP4抗體陽性者各1例。經(jīng)比較，2組患者OCB、腦脊液抗AQP4抗體及血清抗AQP4抗體的陽性率差異均無統(tǒng)計學(xué)意義（P＞0.05），見表1。

表1 NND 組與外科手術(shù)組OCB、腦脊液及血清抗AQP4抗體陽性率比較

表2 MS組與對照組OCB、腦脊液及血清抗AQP4抗體陽性率的比較

2.2 MS組與對照組 （NND 組＋外科手術(shù)組）OCB、腦脊液及血清抗AQP4抗體陽性率的比較 因NND 組與外科手術(shù)組各項研究指標(biāo)的陽性率均無統(tǒng)計學(xué)差異，將NND 組與外科手術(shù)組合并為對照組，與MS組作進(jìn)一步對比分析。30例MS組患者中，OCB陽性者14例，腦脊液抗AQP4抗體陽性4例，血清抗AQP4抗體陽性10例；98例對照組患者中，OCB陽性者2例，腦脊液及血清抗AQP4抗體陽性各3例。MS組與對照組比較，OCB及血清抗AQP4抗體陽性率差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P＜0.01），腦脊液抗AQP4抗體陽性率差異無統(tǒng)計學(xué)意義（P＞0.05）。見表2。

3 討論

本研究NND 組患者診斷包括中樞神經(jīng)系統(tǒng)腫瘤、動脈硬化性腦梗死、癲、運(yùn)動神經(jīng)元病、線粒體病等，外科手術(shù)組患者則均為泌尿系結(jié)石、前列腺增生或外傷性骨折等外科手術(shù)的患者，NND 組與外科手術(shù)組患者均不存在神經(jīng)系統(tǒng)或其他系統(tǒng)炎性疾病，且NND 組與外科手術(shù)組在OCB、腦脊液抗AQP4抗體及血清抗AQP4抗體陽性率上差異均無統(tǒng)計學(xué)意義，因此本研究將該2組患者合并為對照組，與MS組進(jìn)行進(jìn)一步的對比分析，較能反應(yīng)MS患者與正常人群在各項研究指標(biāo)上的差異。同時本研究入組的30例MS患者為臨床已經(jīng)明確診斷的患者，在留取血清及腦脊液標(biāo)本前均未曾使用過激素及其他免疫抑制類藥物，排除了該類藥物對患者血清及腦脊液相關(guān)指標(biāo)的影響，提高了研究結(jié)果的準(zhǔn)確性。

鞘內(nèi)IgG 抗體的自身合成是MS的重要免疫學(xué)異常，腦脊液IgG OCB常作為判定鞘內(nèi)IgG 自身合成的定性指標(biāo)。本研究MS組30例患者中有14例OCB 陽性，其陽性率為46.7%。而對照組OCB陽性僅有2例，其中1例為16歲的女性癲患者，癲原因尚不明確，另1例為25歲的女性腦血管疾病患者，其病因不能除外血管炎可能。MS組OCB陽性率較對照組明顯偏高，其差異有統(tǒng)計學(xué)意義。國內(nèi)陳紅媛等［3］的研究中，21例MS患者的腦脊液OCB 陽性率也達(dá)到了47.6%，與本研究結(jié)果相近。因為種族差異的原因，西方國家報道MS的OCB陽性率較國內(nèi)更高，Bourahoui等［4］的研究就顯示MS患者的OCB陽性率高達(dá)95%。國內(nèi)外研究均提示MS患者存在特異性抗體鞘內(nèi)合成，OCB 對于鑒別MS與其他神經(jīng)系統(tǒng)疾病具有重要意義。

水通道蛋白（aquaporins，AQPs）是一組具有高度選擇性的水跨膜轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白通道家族，目前已被克隆和鑒定出來的水通道蛋白有13種（AQP0～AQP12）。AQP4 是中樞神經(jīng)系統(tǒng)主要的水通道蛋白，在跨膜水轉(zhuǎn)運(yùn)、維持血-腦屏障完整性和中樞神經(jīng)系統(tǒng)內(nèi)環(huán)境穩(wěn)定性方面發(fā)揮重要作用［5］。隨著2004年抗AQP4抗體的發(fā)現(xiàn)［6］，其相關(guān)研究成為近年來神經(jīng)免疫領(lǐng)域關(guān)注的熱點。本研究對比觀察了30例MS患者腦脊液及血清抗AQP4 抗體的陽性率，MS 組血清抗AQP4抗體陽性率為33.3%，明顯高于對照組（3.1%），差異有統(tǒng)計學(xué)意義。雖然MS組腦脊液抗AQP4抗體陽性率與對照組比較其差異無統(tǒng)計學(xué)意義，但是其13.3%的陽性率仍然明顯高于對照組（3.1%）。早期的研究認(rèn)為抗AQP4抗體是視神經(jīng)脊髓炎（neuromyelitis optica，NMO）的重要的生物學(xué)標(biāo)記物，NMO 也因此而區(qū)別于MS被認(rèn)為是一種獨立的自身免疫性水通道病，并且在2006年修訂的NMO 診斷標(biāo)準(zhǔn)［7］中，增加了抗AQP4抗體作為NMO 的診斷支持條件之一。陳瑤等［8］研究的37例MS患者血清抗AQP4抗體檢測無1例陽性，但35 例NMO 患者的血清抗AQP4 抗體陽性率就高達(dá)88.6%。但是近年來其他的一些研究提示，部分MS患者血清同樣也可以出現(xiàn)抗AQP4 抗體的陽性表達(dá)。2011年楊揚(yáng)等［9］的研究中，86 例MS患者血清抗AQP4 抗體的陽性率為4.7%。趙忙所等［10］的研究中，32例MS患者的血清抗AQP4抗體陽性率為9.4%。邵文君等［11］的研究顯示MS患者血清抗AQP4抗體陽性率則達(dá)到20%。本研究33.3%的MS患者血清抗AQP4抗體陽性率略高于上述其他研究，分析其原因可能與相關(guān)藥物降低了其他各項研究抗AQP4抗體陽性率有關(guān)。有研究［12］顯示免疫抑制劑能夠降低NMO 患者血清抗AQP4抗體滴度并發(fā)揮治療作用，推測此類藥物對于MS 患者也可能發(fā)揮相似作用，從而降低MS患者血清或腦脊液抗AQP4 抗體的陽性率。而本研究入組的30例MS患者在行血清及腦脊液標(biāo)本檢測之前均未使用過激素或其他免疫抑制類藥物，避免了此類藥物對檢測結(jié)果的影響。由此可見，臨床上對于中樞神經(jīng)系統(tǒng)脫髓鞘疾病的患者，并不能僅憑血清或腦脊液抗AQP4抗體陽性而除外MS的診斷，還需要結(jié)合患者的病史、臨床體征及影像學(xué)表現(xiàn)等各項資料進(jìn)行綜合分析。

總而言之，MS是中樞神經(jīng)系統(tǒng)脫髓鞘疾病中發(fā)病率較高的常見疾病。MS患者具有較高的腦脊液OCB 陽性率及血清抗AQP4抗體陽性率，提示體液免疫在MS的發(fā)病過程中也發(fā)揮著一定作用。腦脊液OCB陽性對MS輔助診斷具有重要意義。部分MS患者可表現(xiàn)為血清或腦脊液抗AQP4抗體陽性，在診斷方面需要結(jié)合患者的病史、臨床體征及影像學(xué)表現(xiàn)等各項資料進(jìn)行綜合分析，以避免誤診為NMO。

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