盧 建 王克華* 曲 亮 竇套存 童海兵 李尚民

(1.中國農(nóng)業(yè)科學院家禽科學研究所，揚州 225125;2.揚州翔龍禽業(yè)發(fā)展有限公司，江都 225261)

蛋黃顏色及著色劑的安全性受到消費者的廣泛關注，化學合成色素可致癌、致畸，影響消費者健康，而天然色素主要從水果、蔬菜或植物中提取，安全無毒，深受消費者青睞。在家禽飼糧中添加天然色素，可以沉積到家禽產(chǎn)品中，這類產(chǎn)品不僅色澤美觀，而且具有藥用或保健功能，因此，這種天然色素被稱為“營養(yǎng)型”著色劑。近年來，“營養(yǎng)型”著色劑在家禽飼糧中的應用成為蛋品質營養(yǎng)調(diào)控的重要研究方向。萬壽菊提取物是有效的天然著色劑，具有抗氧化、增強機體免疫力和抑制癌癥等功能。有研究發(fā)現(xiàn)，飼糧中添加萬壽菊提取物能夠改善產(chǎn)蛋性能、提高飼料利用率、哈氏單位和蛋黃顏色及降低血液和雞蛋中膽固醇含量［1－3］;也有研究發(fā)現(xiàn)，萬壽菊提取物降低產(chǎn)蛋率或對產(chǎn)蛋率、采食量和蛋品質無顯著影響［4－5］;此外，調(diào)控不同品種或周齡蛋雞蛋黃顏色變化所需的色素添加量差異較大［1－2］。因此，本研究以28周齡蘇禽青殼蛋雞為試驗動物，在飼糧中添加不同水平萬壽菊提取物，分別測定產(chǎn)蛋性能、蛋品質以及蛋黃膽固醇含量，旨在確定萬壽菊提取物在蘇禽青殼蛋雞飼糧中的適宜添加水平。

1 材料與方法

1.1 試驗材料

萬壽菊提取物是由從萬壽菊中提取的葉黃素樹脂經(jīng)過皂化處理，添加載體混合而成，有效成分葉黃素含量為2.5%。

1.2 試驗動物及設計

試驗選用28周齡體況良好、產(chǎn)蛋率接近的蘇禽青殼蛋雞160只，隨機分成4個組，每個組4個重復，每個重復10只雞。對照組飼糧不含萬壽菊提取物，試驗組飼糧分別含有0.05%、0.10%和0.20%的萬壽菊提取物(有效成分葉黃素的含量分別為 12.5、25.0 和 50.0 mg/kg)。參照 NRC(1994)蛋雞營養(yǎng)需要配制飼糧，飼糧組成及營養(yǎng)水平見表1。試驗雞籠養(yǎng)，每籠2只，自由采食和飲水，常規(guī)飼養(yǎng)管理。試驗分預試期和試驗期，其中預試期1周，試驗期6周(29～34周齡)。

表1 飼糧組成及營養(yǎng)水平(風干基礎)Table 1 Composition and nutrient levels of diets(air-dry basis) %

1.3 測定指標及方法

1.3.1 產(chǎn)蛋性能

每天09:00準時收蛋，以重復為單位準確記錄產(chǎn)蛋數(shù)和蛋重。每周末定時結料、稱重，并統(tǒng)計各重復的實際耗料量。根據(jù)飼養(yǎng)試驗記錄，整理統(tǒng)計各組產(chǎn)蛋率、平均蛋重(各重復所有雞蛋的平均重量)、平均日產(chǎn)蛋重(平均每只雞每日的產(chǎn)蛋重)、平均日采食量(平均每只雞每日的采食量)和料蛋比。

1.3.2 蛋品質

試驗期第14、28和42天，每個重復取6枚蛋，每個組共24枚，測量縱徑、橫徑、蛋殼厚度(為雞蛋大頭、小頭和中間的平均值)和蛋殼強度后，測定并計算蛋白高度、哈氏單位、蛋黃顏色、蛋殼重、蛋黃重、蛋形指數(shù)及蛋比重。測定儀器包括電子數(shù)顯卡尺(廣陸數(shù)字測控股份有限公司)、蛋殼厚度測定儀(以色列ORKA公司)、蛋殼強度測定儀(以色列ORKA公司)和多功能蛋品質測定儀(以色列ORKA公司)。哈氏單位計算公式為:

哈氏單位 =100 × lg(H －1.7W0.37+7.6)。

式中:H為蛋白高度(mm);W為蛋重(g)。

1.3.3 蛋黃膽固醇含量

試驗期第42天，蛋品質測定后，每個重復留2個蛋黃樣品(隨機取3個蛋黃，攪拌、混勻后為1個樣品)，測定蛋黃膽固醇含量。樣品處理方法:準確吸取蛋黃稀釋液1.0 mL于10 mL離心管中，加入1.0 mL 95%乙醇，用漩渦振蕩器混勻后，加入2.5 mL乙醚，再次混勻后加入2.5 mL石油醚，振蕩混勻，用離心機3 000 r/min離心5 min，將上層萃取液取出，在低于45℃條件下用氮氣吹干，加2.0 mL無水乙醇溶解，用0.22μm有機微孔濾膜過濾后，色譜柱測定。

1.4 統(tǒng)計分析

試驗數(shù)據(jù)組間差異采用SPSS 15.0軟件中的one-way ANOVA進行方差分析，采用LSD法進行多重比較，結果以平均值±標準差表示。

2 結果與分析

2.1 不同水平萬壽菊提取物對蛋雞產(chǎn)蛋性能的影響

由表2可知，各試驗組產(chǎn)蛋率、平均蛋重、平均日產(chǎn)蛋重、平均日采食量和料蛋比與對照組相比差異均不顯著(P＞0.05)。

表2 不同水平萬壽菊提取物對蛋雞產(chǎn)蛋性能的影響Table 2 Effects of different marigold extract levels on laying performance of laying hens

2.2 不同水平萬壽菊提取物對蛋雞蛋品質的影響

由表 3可知，試驗期第 14天，0.10%和0.20%萬壽菊提取物組的哈氏單位顯著高于對照組(P＜0.05)，0.20%萬壽菊提取物組的哈氏單位顯著高于0.05%萬壽菊提取物組(P＜0.05)，各試驗組蛋黃顏色顯著高于對照組(P＜0.05)。試驗期第28天，0.10%和0.20%萬壽菊提取物組的哈氏單位顯著高于對照組(P＜0.05)，0.20%萬壽菊提取物組的蛋黃顏色顯著高于其他各組(P＜0.05)。試驗期第42天，0.20%萬壽菊提取物組的哈氏單位顯著高于對照組(P＜0.05)，0.20%萬壽菊提取物組的蛋黃顏色顯著高于其他各組(P＜0.05)。試驗期第14、28和42天的其他蛋品質指標與對照組相比差異均不顯著(P＞0.05)。

2.3 不同水平萬壽菊提取物對蛋雞蛋黃膽固醇含量的影響

由表4可知，各試驗組蛋黃膽固醇含量與對照組相比較差異均不顯著(P＞0.05)。

3 討論

3.1 不同水平萬壽菊提取物對蛋雞產(chǎn)蛋性能的影響

萬壽菊提取物的有效成分是葉黃素，葉黃素具有著色、抗氧化和增強機體免疫力等功能。元娜［1］飼喂海蘭灰商品蛋雞分別含有 0、60、120 和240 mg/kg萬壽菊提取物的玉米－豆粕型飼糧，發(fā)現(xiàn)60、120和240 mg/kg萬壽菊提取物組產(chǎn)蛋率較對照組分別提高了1.42%、0.55%和2.12%，料蛋比下降了 2.16%、2.60% 和 3.30%，但均未達到顯著水平。曲湘勇等［6］在鵪鶉飼糧中分別添加花粉和紅辣椒粉(兩者富含葉黃素)，發(fā)現(xiàn)試驗組產(chǎn)蛋率提高了3.78%，料蛋比下降了3.90%，但未達到顯著水平。而梁遠東等［4］研究角黃素和阿卜酯對母雞產(chǎn)蛋性能和蛋黃顏色的影響時發(fā)現(xiàn)，阿卜酯對產(chǎn)蛋性能無顯著影響，角黃素明顯降低產(chǎn)蛋率，認為產(chǎn)蛋率隨總色素含量的升高而逐漸減少。黃小春［2］飼喂綠殼商品蛋雞分別含有0、75、150、225、300 和 375 mg/kg 有效葉黃素的玉米－豆粕型飼糧，發(fā)現(xiàn)試驗期內(nèi)各試驗組蛋雞的產(chǎn)蛋率、蛋重、采食量、飼料轉化率等與對照組相比差異均不顯著。本研究發(fā)現(xiàn)，0.05%、0.10%和0.20%萬壽菊提取物組產(chǎn)蛋率、平均蛋重、平均日產(chǎn)蛋重、平均日采食量和料蛋比與對照組相比差異均不顯著，且未發(fā)現(xiàn)降低或升高趨勢。有研究者認為，采食量和料蛋比的下降主要是由于萬壽菊提取物有特殊的氣味，影響蛋雞采食量［1］。本研究者認為，由于蛋雞嗅覺不發(fā)達，萬壽菊提取物的特殊氣味不是采食量降低的主要原因，而蛋雞的品種、日齡、基礎飼糧中葉黃素含量、萬壽菊提取物的加工工藝、純度及添加水平是影響蛋雞產(chǎn)蛋性能的主要因素。本研究表明，各試驗組添加的萬壽菊提取物中葉黃素含量分別為12.5、25.0和50.0 mg/kg，在試驗期內(nèi)未影響蘇禽青殼蛋雞的產(chǎn)蛋性能。

表3 不同水平萬壽菊提取物對蛋雞蛋品質的影響Table 3 Effects of different marigold extract levels on egg quality of laying hens

表4 不同水平萬壽菊提取物對蛋黃膽固醇含量的影響Table 4 Effects of different marigold extract levels on yolk cholesterol content of laying hens

3.2 不同水平萬壽菊提取物對蛋雞蛋品質的影響

在本研究條件下，除哈氏單位和蛋黃顏色外，試驗期第14、28和42天的其他蛋品質指標與對照組相比差異均不顯著。哈氏單位大小與蛋白高度正相關，與蛋重負相關，本研究中添加萬壽菊提取物組的哈氏單位與對照組相比均有提高，說明萬壽菊提取物能提高蛋白高度。蛋白的分泌主要在輸卵管膨大部，分泌腺依次分泌內(nèi)稀蛋白、濃蛋白和外稀蛋白包裹在卵黃外。因此，飼糧中的萬壽菊提取物很可能能夠到達分泌部，說明萬壽菊提取物對分泌部細胞膜結構及分泌功能是有益的，這可能與葉黃素的抗氧化作用有關。元娜［1］研究發(fā)現(xiàn)，120和240 mg/kg萬壽菊提取物組哈氏單位比對照組分別提高了1.41%和1.72%。而付靜［5］在小麥型飼糧中添加辣椒紅色素或沙棘黃色素發(fā)現(xiàn)對蛋品質無顯著影響。這可能與蛋雞的品種、日齡、基礎飼糧中葉黃素含量及添加水平有關。

劉清等［7］研究類胡蘿卜素的吸收過程時發(fā)現(xiàn)，離體蛋雞小腸細胞通過被動擴散方式吸收類胡蘿卜素。據(jù)推斷葉黃素的吸收是在小腸中進行的，葉黃素與攝入的脂肪結合形成以甘油三酯為中心的脂肪乳粒，當膽鹽達到一定濃度時，脂肪乳粒轉變?yōu)榧毿〉哪扄}微粒，進入小腸黏膜表面凈水層，以被動擴散方式而被機體吸收。吸收后的葉黃素以脂蛋白為載體，通過淋巴途徑進入血液，在血液中主要與低密度脂蛋白結合，通過主動轉運沉積到各個靶組織。陳波等［8］研究膽鹽和游離脂肪酸對離體小腸細胞吸收類胡蘿卜素時也得出相同結論。Fletcher等［9］研究蛋雞體內(nèi)葉黃素的沉積過程時發(fā)現(xiàn)，色素被吸收后幾乎未經(jīng)任何變化直接沉積到正在形成的卵中。本研究發(fā)現(xiàn)，飼糧中添加0.20%萬壽菊提取物能顯著改善蛋黃顏色。李曉雙［10］研究也發(fā)現(xiàn)添加葉黃素可改善蛋黃顏色。牛竹葉等［11］在小麥飼糧中添加1.5%的葉黃素可顯著改善蛋黃顏色。元娜［1］研究發(fā)現(xiàn)，萬壽菊提取物極顯著提高蛋黃顏色，240 mg/kg萬壽菊提取物組蛋黃顏色由9～10增加至12～13。黃小春［2］飼喂蛋雞葉黃素7 d后，發(fā)現(xiàn)蛋黃顏色由5～7上升至9～12，并維持相對穩(wěn)定。以上2試驗均飼喂玉米－豆粕型飼糧，但由于蛋雞日齡不同，飼喂基礎飼糧組蛋雞的蛋黃顏色差異較大。

3.3 不同水平萬壽菊提取物對蛋雞蛋黃膽固醇含量的影響

95%以上的蛋黃膽固醇來自蛋黃前體，主要是極低密度脂蛋白，蛋黃膽固醇的沉積過程是極低密度脂蛋白沉積到卵母細胞的過程，極低密度脂蛋白通過卵黃生成素受體介導的內(nèi)吞作用完整地轉運進入生長中的卵母細胞，在溶酶體的作用下分解為游離膽固醇，從而實現(xiàn)色素沉積，并一直以游離的形式伴隨卵母細胞的生長，最終形成蛋黃［12］。本研究在蛋雞飼糧中添加 0.05%、0.10%和0.20%的萬壽菊提取物，發(fā)現(xiàn)其對蛋黃膽固醇含量無顯著影響。而元娜［1］研究發(fā)現(xiàn)，240 mg/kg萬壽菊提取物(有效成分葉黃素含量為200 mg/kg)組的蛋黃膽固醇含量比對照組降低了6.02%，達到顯著水平，而60和120 mg/kg萬壽菊提取物(有效成分葉黃素含量分別為50和100 mg/kg)組蛋黃膽固醇含量與對照組相比，無顯著影響。此試驗在飼糧中添加的葉黃素量遠高于本試驗添加量，葉黃素的抗氧化作用與膽固醇的沉積是否有關，適量葉黃素能否影響膽固醇的合成，有待于進一步的研究。

4 結論

① 飼糧中添加0.05%、0.10%和0.20%的萬壽菊提取物對蛋雞產(chǎn)蛋性能和蛋黃膽固醇含量無不良影響。

② 飼糧中添加0.20%萬壽菊提取物時能顯著提高雞蛋哈氏單位和蛋黃顏色。

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