張炳團(tuán) 張洪濤 張靜宇 王 錚

胰腺癌是1種較為常見(jiàn)的惡性腫瘤，近年來(lái)發(fā)病率有逐年上升的趨勢(shì)。胰腺癌由于位置深且隱蔽，早期缺少特異性癥狀，極易侵犯周?chē)K器和發(fā)生轉(zhuǎn)移，故大多數(shù)患者就診已屬晚期，手術(shù)切除不足20%[1]；化學(xué)治療暫時(shí)緩解率為20%～48%[2]。BC369具有抑制腫瘤細(xì)胞生長(zhǎng)、殺傷腫瘤細(xì)胞和提高機(jī)體免疫力的雙重作用，我們采用無(wú)免疫功能的裸鼠研究BC369對(duì)人源胰腺癌(PANC-1)的直接殺瘤實(shí)驗(yàn)，現(xiàn)將觀察結(jié)果報(bào)告如下。

1 材料與方法

1.1 材料

1.1.1 藥物 BC369試劑由天津澤世德生物醫(yī)藥有限公司生產(chǎn)，1 mg/瓶，凍干粉劑，-20℃保存，注射時(shí)用1 ml無(wú)菌生理鹽水溶解。吉西他濱注射液，200 mg/瓶，由美國(guó)禮來(lái)公司生產(chǎn)。

1.1.2 瘤株 人源胰腺癌(PANC-1),由中國(guó)醫(yī)學(xué)科學(xué)院腫瘤研究所提供。

1.1.3 動(dòng)物 Baib/c-nu裸鼠，由中國(guó)醫(yī)學(xué)科學(xué)院實(shí)驗(yàn)動(dòng)物研究所購(gòu)進(jìn)，二級(jí)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物，合格證為SCXK京2009-0004；實(shí)驗(yàn)動(dòng)物使用許可證號(hào)SYXK(京)2008-0016；Baib/c-nu裸鼠雄性，體重(17±2)g。

1.2 方法

1.2.1 腫瘤移植 胰腺癌(pancreatic cancer,PANC-1)瘤株氮復(fù)蘇后，經(jīng)3～4次傳代，實(shí)體腫瘤生長(zhǎng)良好，接種3周后形成1 cm大小實(shí)體腫瘤，斷頸處死小鼠，70%酒精浸泡1 min,無(wú)菌條件下剝離腫瘤，剪切成1 mm3大小組織塊，選擇新鮮無(wú)壞死的腫瘤組織，接種于健康裸鼠皮下。

1.2.2 給藥方法 30只裸鼠隨機(jī)分為3組，陰性對(duì)照組(NS)10只，陽(yáng)性對(duì)照組(吉西他濱)10只，創(chuàng)新藥組(BC369)10只。給藥途徑均為瘤種接種21天后，人源胰腺癌(PANC-1)實(shí)體瘤生長(zhǎng)達(dá)100 mm3時(shí)開(kāi)始瘤內(nèi)或瘤床多點(diǎn)注射,每天1次，療程21天。NS組：10 ml/kg,即每只小鼠瘤內(nèi)注射N(xiāo)S 0.2 ml/次。吉西他濱組：10 mg/Kg,即每只小鼠瘤內(nèi)注射吉西他濱0.2 ml(0.2 mg)/次。BC369組：10 mg/Kg，即每只小鼠瘤內(nèi)注射BC3690.2 ml(0.2 mg)/次。

1.2.3 檢測(cè)指標(biāo) 終止治療后次日，各組動(dòng)物斷頸處死，剝離腫瘤體稱(chēng)重。按以下公式計(jì)算腫瘤殺傷率[3]。腫瘤殺傷率%=(C-T)÷C×100%，式中T為給藥組平均瘤重，C為陰性對(duì)照組平均瘤重。

1.3 療效判定指標(biāo)

根據(jù)腫瘤大小變化的判定標(biāo)準(zhǔn)[4]，腫瘤的大小以2個(gè)最大互相垂直的直徑的乘積表示。該實(shí)驗(yàn)用藥前3組小鼠腫瘤體積均為100 mm3，用藥21天后用卡尺測(cè)量各小鼠腫瘤2個(gè)最大互相垂直直徑，計(jì)算治療后腫瘤體積。腫瘤完全消失(CR)，腫瘤縮小50%以上(PR)，腫瘤縮小50%以下或增大在25%以?xún)?nèi)(NC)，腫瘤增大25%以上(PD)。

1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法

采用SPSS13.0軟件進(jìn)行數(shù)據(jù)分析，計(jì)數(shù)資料采用χ2檢驗(yàn)[5]。

2 結(jié)果

統(tǒng)計(jì)學(xué)處理結(jié)果證明治療后BC369組和吉西他濱組平均瘤重分別與NS組比較，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，P<0.001。吉西他濱組治療后與BC369組治療后瘤重比較相差不顯著，P>0.05。BC369對(duì)裸鼠人源胰腺癌(PANC-1)具有一定的殺傷作用，直接療效吉西他濱組為30.0%，BC369組為40.0%,2組比較差異明顯,見(jiàn)表1,2。

表1 BC369對(duì)人源胰腺癌(PANC-1)生長(zhǎng)的影響

表2 BC369對(duì)人源胰腺癌(PANC-1)的直接療效(只)

3 討論

原發(fā)性人胰腺癌移植于裸鼠體內(nèi)的治療實(shí)驗(yàn)更接近于人體

內(nèi)胰腺癌治療實(shí)驗(yàn)的結(jié)果。

實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)表明，BC369對(duì)人源胰腺癌(PANC-1)的生長(zhǎng)具有較強(qiáng)的殺傷作用，其結(jié)果與美國(guó)生產(chǎn)的治療胰腺癌新化學(xué)藥吉西他濱對(duì)荷瘤小鼠抗腫瘤實(shí)驗(yàn)結(jié)果基本相近，無(wú)明顯差異(P>0.05)。

BC369對(duì)人源胰腺癌(PANC-1)的直接療效(40%)略高于吉西他濱(30%)。本次對(duì)人胰腺癌移植于裸鼠體內(nèi)治療的初步實(shí)驗(yàn)，更接近于人體內(nèi)胰腺癌的治療實(shí)驗(yàn)，但不是臨床試驗(yàn)，其最終結(jié)果有待于進(jìn)一步研究。

BC369具有雙重作用，殺傷和免疫，此實(shí)驗(yàn)對(duì)無(wú)免疫力的裸鼠移植性人源胰腺癌抑瘤實(shí)驗(yàn)，它只起殺癌效應(yīng)，而提高機(jī)體免疫的功效尚未發(fā)揮。

對(duì)裸鼠移植性人胰腺癌(PANC-1)經(jīng)過(guò)BC369瘤內(nèi)局部注射后腫瘤完全消退部位的組織做切片，顯微鏡下觀察發(fā)現(xiàn)BC369治療后組織只有輕度炎癥，表現(xiàn)出肉芽組織及多核粒細(xì)胞浸潤(rùn)，未見(jiàn)癌細(xì)胞；對(duì)生理鹽水(NS)陰性對(duì)照組腫瘤組織做切片，顯微鏡下觀察組織上仍有高度分化的癌細(xì)胞。

[1] Alfieris,Morganti A G,Di Giorgio A,et al.Improved survival and Iocal after intaoperative radiation therapy and postoperative radiotherapy:a multivariate analysis of 46 patients undergoing surgery for pancreatic head cancer〔J〕.Arch Surg,2001,136(3):343.

[2] 李振主編.惡性腫瘤的化學(xué)治療與免疫治療〔M〕.第1版.北京：人民衛(wèi)生出版社,1990:4.

[3] 張炳團(tuán),張靜宇，張洪燕.BC369對(duì)鼠源腸癌(C26)的療效分析〔J〕.實(shí)用癌癥雜志，2012，27(3)：224.

[4] 孫 燕，石遠(yuǎn)凱.臨床腫瘤內(nèi)科手冊(cè)〔M〕.第5版.北京:人民衛(wèi)生出版社,2007:147～1481.

[5] 涂 亮,邱寶安.復(fù)方苦參注射液聯(lián)合體部伽瑪?shù)吨委熗砥谝认侔┑呐R床觀察〔J〕.實(shí)用癌癥雜志,2012,27(3):298.