袁釗，李新華，黃世博，夏春華，熊玉卿 （.南昌大學(xué)醫(yī)學(xué)院臨床藥理研究所，江西 南昌330006；.南昌大學(xué)校醫(yī)院，江西 南昌330006）

阿托伐他?。╝torastain，ATV）是新一代β－羥基－β－甲基戊二酰輔酶A（HMG－CoA）還原酶抑制劑，可競(jìng)爭(zhēng)性抑制膽固醇的生物合成，顯著降低血脂水平［1］。雖然ATV 已廣泛用于高膽固醇血癥的治療，但其調(diào)脂療效呈現(xiàn)明顯的個(gè)體差異［2］。有研究表明，ATV 與其他他汀類(lèi)不同之處在于，其既是攝入型轉(zhuǎn)運(yùn)體有機(jī)陰離子轉(zhuǎn)運(yùn)多肽B1（OATP1B1）的底物，又 主 要 經(jīng)CYP3A4 代 謝［3－4］。故OATP1B1及CYP3A4的基因多態(tài)很可能影響ATV 的轉(zhuǎn)運(yùn)與代謝，從而導(dǎo)致ATV 療效和不良反應(yīng)個(gè)體差異的出 現(xiàn)［5－6］。系 統(tǒng) 研 究 ATV 轉(zhuǎn) 運(yùn)、代 謝 相 關(guān) 的OATP1B1及CYP3A4基因多態(tài)性及其相互間的關(guān)聯(lián)意義重大。為此，本研究從體外分子水平，系統(tǒng)考察ATV 在不同基因型OATP1B1及CYP3A4個(gè)體中轉(zhuǎn)運(yùn)代謝過(guò)程的差異，分析 OATP1B1 及CYP3A4基因多態(tài)性對(duì)ATV 轉(zhuǎn)運(yùn)代謝影響的分子機(jī)制。為進(jìn)一步的體內(nèi)研究及正確確立ATV 的臨床合理用藥提供前期研究數(shù)據(jù)及理論依據(jù)。

1 材料

1.1 儀器 2010EV 液質(zhì)聯(lián)用儀、2010A 高效液相色譜儀為日本Shimadzu公司；550型酶標(biāo)儀（美國(guó)Bio－RAD 公 司）；XP205 型 電 子 分 析 天 平（美 國(guó)Mettler Toledo公 司）；ZHWY－2102C 雙 層 恒 溫 培養(yǎng)振蕩器（上海智誠(chéng)分析儀器制造有限公司）。

1.2 藥品與試劑 阿托伐他汀對(duì)照品（中國(guó)食品藥品檢定研究院，批號(hào)201102101，含量＞97.0%）；瑞舒伐他汀內(nèi)標(biāo)（中國(guó)食品藥品檢定研究院，批號(hào)201001002，含量＞99.7%）；二甲基亞砜（DMSO）、四甲基偶氮唑藍(lán)（MTT）均為美國(guó)Amresco公司產(chǎn)品；高糖DMEM 培養(yǎng)基、非必需氨基酸（美國(guó)Gibco公司）；胎牛血清（FBS，杭州四季青公司）；PBS緩沖液（南昌長(zhǎng)城生物科技有限公司）；6－磷酸－葡萄糖（6－P－G）、6－磷酸－葡萄糖脫氫酶（6－P－G）、氧化型輔酶Ⅱ（β－NADP）均為Sigma公司產(chǎn)品；甲醇、乙腈為色譜純；其他試劑均為分析純。

1.3 其他材料 OATP1B1質(zhì)粒模型：成功轉(zhuǎn)染慢病毒包裝后OATP1B1＊1a、＊5、＊15 質(zhì)粒的HEK293T 細(xì)胞。體外轉(zhuǎn)運(yùn)試驗(yàn)中cDNA 轉(zhuǎn)染的HEK293T 細(xì)胞（自身不表達(dá)OATP1B1，通過(guò)轉(zhuǎn)染實(shí)現(xiàn)高表達(dá)）可作為一種有效的工具，用于預(yù)測(cè)OATP1B1 SNPs對(duì)藥物體內(nèi)處置過(guò)程的影響［7］；人重組CYP3A4酶：購(gòu)自陜西北美基因有限公司，其酶蛋白含量及酶活性均已標(biāo)定。

2 方法

2.1 ATV 在不同基因型OATP1B1質(zhì)粒中轉(zhuǎn)運(yùn)差異的研究

2.1.1 溶液配制 （1）ATV 對(duì)照品貯備液：精確稱(chēng)取ATV 對(duì)照品22.02 mg，以3.035 mL DMSO 配制成6 000μmol·L－1的貯備液，－20 ℃保存，臨用前進(jìn)行稀釋?zhuān)唬?）瑞舒伐他汀標(biāo)準(zhǔn)品貯備液：精確稱(chēng)取瑞舒伐他汀標(biāo)準(zhǔn)品17.41 mg，以10 mL DMSO 配制成1 739μmol·L－1的貯備液，－20 ℃保存，臨用前進(jìn)行稀釋。

2.1.2 ATV 對(duì)HEK293T 細(xì)胞毒性試驗(yàn) 取對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期HEK293T 細(xì)胞，通過(guò)細(xì)胞計(jì)數(shù)器調(diào)整細(xì)胞密度至1.0×106／mL，每孔加200μL 細(xì)胞懸液接種于96孔培養(yǎng)板，培養(yǎng)24 h后換液，實(shí)驗(yàn)組分別加入含ATV 系列濃度的培養(yǎng)液，對(duì)照組和空白組只加培養(yǎng)液，邊緣空用PBS填充，每組設(shè)6個(gè)復(fù)孔，24 h后每孔加入5 mg·mL－1的MTT20μL，培養(yǎng)4 h后吸棄孔內(nèi)培養(yǎng)液，每孔加150μL DMSO 溶液，置于雙層空氣恒溫振蕩器中，37 ℃、50 r·min－1振蕩10 min，使甲瓚充分溶解，用酶聯(lián)免疫檢測(cè)儀于波長(zhǎng)490 nm 處測(cè)定其吸光度值，空白孔調(diào)零，記錄各孔吸光度值。計(jì)算細(xì)胞存活率：細(xì)胞存活率＝（實(shí)驗(yàn)組吸光度值／對(duì)照組吸光度值）×100%。

2.1.3 HEK293T 細(xì)胞樣品處理方法的建立 采用冰醋酸－醋酸乙酯液液萃取法提取細(xì)胞中的待測(cè)樣品。取100μL 完成攝取試驗(yàn)的HEK293T 細(xì)胞破碎液，加入20μL 內(nèi)標(biāo)瑞舒伐他汀（10μmol·L－1），加入30μL 冰醋酸，振蕩30 s，加入1 mL 醋酸乙酯，渦旋振蕩2 min，于20 000 r·min－1離心10 min，取0.8 mL 上清液于濃縮儀中揮干（60 ℃30 min），加入100μL 甲醇復(fù)溶，20 000 r·min－1離心10 min后，取10μL進(jìn)樣分析。

2.1.4 ATV LC－MS分析方法建立

（1）色譜條件 流動(dòng)相：乙腈－水（含0.1%甲酸）＝60∶40；流速：0.2 mL·min－1；色譜柱：Shimadzu Pack VP－ODS C18（5μm，150 mm×2.0mm）。

（2）質(zhì)譜條件 離子化方式：電噴霧離子化；采集方式：選擇性離子監(jiān)測(cè)；加熱塊溫度：200 ℃；CDL電壓：25 V；檢測(cè)電壓：－1.65 kV；檢測(cè)方式：正離子檢 測(cè)，檢 測(cè) 離 子［M－H］－：阿 托 伐 他 汀m／z 559.40；內(nèi)標(biāo)（瑞舒伐他?。﹎／z 482.30；霧化氣流速：1.5 L·min－1；干燥氣流速：2.0L·min－1。

2.1.5 考馬斯亮藍(lán)法［8］測(cè)定HEK293T 細(xì)胞裂解液蛋白含量 分別加入1.0 mg·min－1的蛋白質(zhì)標(biāo)準(zhǔn)溶液0，1，2，3，4，5μL，其余用純化水補(bǔ)充，使樣品總體積為5μL，加入考馬斯亮藍(lán)G－250溶液195 μL，把酶標(biāo)板放在振蕩器上振蕩30 s，充分混勻，放置2 min后再次振蕩，然后在595 nm 下比色測(cè)定（1 h內(nèi)完成）以標(biāo)準(zhǔn)曲線0號(hào)管做參比，在595 nm 波長(zhǎng)下比色，記錄吸光值，以蛋白質(zhì)含量（μg·mL－1）為橫坐標(biāo)，吸光值為縱坐標(biāo)，繪出標(biāo)準(zhǔn)曲線，用于計(jì)算蛋白濃度值。

2.1.6 ATV 在 表 達(dá) 不 同 基 因 型OATP1B1 的HEK293T 細(xì)胞中的攝取試驗(yàn) 取對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期HEK293T 細(xì) 胞（HEK293T、OATP1B1 ＊ 1a－HEK293T、OATP1B1＊5－HEK293T、OATP1B1＊15－HEK293T 細(xì)胞），將細(xì)胞懸液稀釋為1.0×106／mL，每孔0.5 mL，加于12 孔培養(yǎng)板內(nèi)，培養(yǎng)2 d。實(shí)驗(yàn)前，吸棄舊培養(yǎng)液，加入37 ℃預(yù)熱的攝取緩沖液蕩洗細(xì)胞3次，最后一次置于37 ℃培養(yǎng)箱溫孵30 min后，吸棄緩沖液，用于藥物攝取試驗(yàn)。

（1）pH 值對(duì)不同基因型OATP1B1－HEK293T攝取的影響 于上述準(zhǔn)備用于細(xì)胞攝取試驗(yàn)的12孔板中分別加入pH 值分別為6.5，7.5，8 的含10 μmol·L－1ATV 攝取緩沖液0.5 mL，每組設(shè)5個(gè)復(fù)孔，同時(shí)設(shè)置不加藥的空白孔。置37 ℃培養(yǎng)箱中孵育20 min，吸棄細(xì)胞上層培養(yǎng)液，加入37 ℃攝取緩沖液洗滌4次后加入0.2 mL 無(wú)菌水于－80 ℃超低溫冰箱反復(fù)凍融3 次。細(xì)胞破碎液移入EP 管于20 000 r·min－1離心10 min。取細(xì)胞破碎液100μL按“2.1.3”項(xiàng) 操 作 后 進(jìn) 樣 分 析，LC－MS 法 測(cè) 定HEK293T 中ATV 的含量，另取50μL細(xì)胞破碎液用于考馬斯亮藍(lán)法細(xì)胞蛋白含量測(cè)定，攝取量以pmol·min－1·mg－1protein表示。

（2）時(shí)間對(duì)不同基因型OATP1B1－HEK293T攝取的影 響 每孔加入0.5 mL 20μmol·L－1的ATV 攝取緩沖液。加完藥后，置37 ℃的培養(yǎng)箱中分別孵育5，10，20，40，60 min，每組設(shè)5個(gè)復(fù)孔，同時(shí)設(shè)不加藥物的空白孔，按時(shí)間點(diǎn)吸棄培養(yǎng)液，其余操作同前。

（3）ATV 濃 度 對(duì) 不 同 基 因 型 OATP1B1－HEK293T 攝取的影響 每孔加入150，100，50，20，10，5μmol·L－1ATV 攝取緩沖液0.5 mL，每濃度設(shè)5個(gè)復(fù)孔，同時(shí)各設(shè)5個(gè)不加藥的空白孔。置37 ℃的培養(yǎng)箱中分別孵育一定時(shí)間，吸棄上層培養(yǎng)液，其余操作同前。

2.2 ATV 在不同基因型CYP3A4重組酶系中代謝差異的研究

2.2.1 ATV 代謝孵育方法建立 孵育總體系200 μL，含 氯 化 鎂3.3 mmol·L－1、6－磷 酸－葡 萄 糖3.3 mmol·L－1、6－磷 酸－葡 萄 糖 脫 氫 酶20μg·mL－1、NADP＋1.3 mmol·L－1、系列濃度ATV10μL、重組酶1 mg·mL－1，其他體積由PBS 緩沖液（pH 7.4）補(bǔ)充。37 ℃、120 r·min－1預(yù)溫孵5 min后，加入40μL NADPH 反應(yīng)體系孵育，孵育完成后，加入100μL冰乙腈終止反應(yīng)，渦旋3 min，4 ℃、20 000 r·min－1離心10 min，取上清用于HPLC分析。

2.2.2 ATV 及其代謝產(chǎn)物HPLC 分析方法建立 色譜 條 件：色 譜 柱：Diamonsil C18柱（150 mm×4.6 mm）；流動(dòng)相：乙腈－20 mmol·L－1醋酸胺＝38∶62；進(jìn)樣量：20μL；流速：1.0 mL·min－1；檢測(cè)波長(zhǎng)：246 nm；柱溫：室溫；分析時(shí)間：14 min。

由于未能獲得ATV 代謝產(chǎn)物鄰羥基阿托伐他汀和對(duì)羥基阿托伐他汀的對(duì)照品，本實(shí)驗(yàn)以ATV作為標(biāo)準(zhǔn)，利用代謝產(chǎn)物峰面積與剩余底物峰面積的比值，對(duì)代謝產(chǎn)物進(jìn)行相對(duì)定量。

2.2.3 重組酶代謝ATV 動(dòng)力學(xué)參數(shù)測(cè)定條件的選擇

（1）ATV 在重組酶中代謝的時(shí)間曲線 按“2.2.1”項(xiàng)下方法進(jìn)行孵育，固定孵育體系中重組酶蛋白含量為1.0 mg·mL－1。孵育時(shí)間點(diǎn)設(shè)計(jì)為0，10，20，40，60，90 min。零時(shí)間點(diǎn)采用不加啟動(dòng)劑孵育90 min后，先加入200μL冰乙腈，然后再加啟動(dòng)劑。結(jié)果直接將代謝產(chǎn)物峰對(duì)孵育時(shí)間作圖，尋找在線性范圍內(nèi)的時(shí)間點(diǎn)。

（2）ATV 在重組酶中代謝的酶濃度曲線 按“2.2.1”項(xiàng)下方法進(jìn)行孵育，其中酶的濃度通過(guò)體系中總蛋白含量來(lái)控制。分別使孵育體系中總蛋白含量為0.5，1.0，1.5，2.0mg·mL－1，孵育60 min后，加入200μL冰乙腈終止反應(yīng)，處理后進(jìn)樣分析。結(jié)果直接將代謝產(chǎn)物峰對(duì)酶濃度作圖，尋找在線性范圍內(nèi)的酶濃度點(diǎn)。

2.2.4 人CYP3A4重組酶對(duì)ATV 代謝的酶動(dòng)力學(xué)參數(shù)測(cè)定 按“2.2.1”項(xiàng)下方法配置孵育體系，使ATV 濃度為10～150μmol·L－1。孵育體系中甲醇體積分?jǐn)?shù)低于0.5%。孵育60 min，蛋白質(zhì)含量為1.0mg·mL－1。酶動(dòng)力學(xué)參數(shù)Km和Vmax由產(chǎn)物生成法測(cè)定，即以底物生成的速率作為代謝速率。

3 結(jié)果

3.1 ATV 對(duì)HEK293T 細(xì)胞的毒性反應(yīng) 結(jié)果表明，ATV 在1～200μmol·L－1范圍內(nèi)對(duì)HEK293T細(xì)胞毒性小，細(xì)胞活力大于80%，超過(guò)上述藥物濃度范圍時(shí)出現(xiàn)細(xì)胞毒性，細(xì)胞形態(tài)發(fā)生變化。

圖1 ATV 對(duì)HEK293T 細(xì)胞的抑制率（n＝4±s）Fig 1 The living rate of ATV determined by MTT（n＝4±s）

3.2 HEK293T 細(xì)胞裂解液蛋白曲線 考馬斯亮藍(lán)法建立測(cè)定蛋白標(biāo)準(zhǔn)曲線，結(jié)果蛋白量在1～30 μg范圍內(nèi)線性關(guān)系良好，回歸方程為：Y＝0.017 5 X＋0.030 5，R2＝0.990 1（n＝5）。用此線性方程計(jì)算HEK293T 細(xì)胞的裂解液稀釋后的蛋白含量。

3.3 ATV 在表達(dá)不同基因型 OATP1B1 的HEK293T 細(xì)胞中的攝取參數(shù)

3.3.1 pH 值對(duì)攝取轉(zhuǎn)運(yùn)的影響 結(jié)果表明，pH 值為6.5，7.5，8 的 攝 取 緩 沖 液 對(duì)OATP1B1＊1a－HEK293T、OATP1B1＊5－HEK293T 與OATP1B1＊15－HEK293T細(xì)胞攝取ATV 的差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。3.3.2 時(shí)間對(duì)攝取轉(zhuǎn)運(yùn)的影響 考察分別表達(dá)OATP1B1＊1a、OATP1B1＊5、OATP1B1＊15 的HEK293T 細(xì) 胞 在5，10，20，40，60 min 時(shí) 對(duì)20 μmol·L－1ATV 的攝取情況。結(jié)果表明，隨著時(shí)間的延長(zhǎng)，對(duì)ATV 的攝取增加，在20 min時(shí)攝取均趨于飽和，因此，在下一步的實(shí)驗(yàn)中將攝取終止時(shí)間設(shè)置為20 min。

3.3.3 ATV 濃度對(duì)攝取轉(zhuǎn)運(yùn)的影響 表達(dá)OATP1B1＊1a、＊5、＊15 基因的HEK293T 細(xì)胞在20 min內(nèi)對(duì)系列濃度的ATV 攝取情況見(jiàn)圖2。由圖2可見(jiàn)，隨著ATV 濃度增加，3組攝取量趨于增加并逐漸飽和，呈現(xiàn)酶動(dòng)力學(xué)特征曲線。

圖2 藥物濃度對(duì)ATV 在轉(zhuǎn)染目的基因的HEK293T 細(xì)胞中攝取情況的影響Fig 2 Effect of durg concentration on the uptake of ATV in HEK293T cells transfected with target gene

由表1 可以看出，表達(dá)OATP1B1＊1a 或與OATP1B1＊5的細(xì)胞對(duì)ATV 的轉(zhuǎn)運(yùn)攝取有較大的差異，OATP1B1＊5 對(duì)ATV 的轉(zhuǎn)運(yùn)能力降低；與OATP1B1＊15相比，OATP1B1＊5轉(zhuǎn)運(yùn)活性較低，OATP1B1＊1a與OATP1B1＊5對(duì)系列濃度ATV的轉(zhuǎn)運(yùn)差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異（P＜0.05）。見(jiàn)表1。

3.4 ATV 在CYP3A4重組酶系中的代謝確證 用含有野生型CYP3A4 重組酶（＊1）或突變型CYP3A4重組酶（＊3、＊5、＊16、＊18）的孵育體系對(duì)ATV 進(jìn)行代謝，孵育后反應(yīng)液經(jīng)HPLC分析，可以觀察到分別在3.5，9.4 min處有代謝峰，兩個(gè)代謝物峰均能穩(wěn)定出現(xiàn)，且代謝物峰面積隨ATV 底物含量改變成比率增加，在含無(wú)活性重組酶的孵育體系中孵育后，在相同位置則沒(méi)有ATV 代謝峰出現(xiàn)。見(jiàn)圖3。

表1 ATV 在表達(dá)不同基因型OATP1B1－HEK293T 細(xì)胞中的吸收動(dòng)力學(xué)參數(shù)Tab 1 Kinetic parameters of uptake of ATV in different genotypes OATP1B1 expression of HEK293T cells

圖3 HPLC分析ATV 的特異性A.ATV 孵 育 樣 品（無(wú)NADPH）；B：ATV 孵 化 樣 本，峰1：ATV；peak2，peak3：ATV 代謝物Fig 3 HPLC analysis of the specificity of ATVA.ATV incubation sample－no NADPH；B.ATV incubation sample，peak1：ATV；peak2，peak3：ATV metabolite by CYP3A4 wild type

3.5 CYP3A4重組酶對(duì)ATV 代謝動(dòng)力學(xué)實(shí)驗(yàn)孵育條件摸索 如圖4A 所示，在0～90 min內(nèi)，代謝物的生成量呈線性增長(zhǎng)，說(shuō)明在此段時(shí)間內(nèi)，ATV代謝速率是恒定的。如圖4B 所示，在蛋白含量0.25～2.0mg·mL－1范圍內(nèi)，代謝物的生成量也呈線性增長(zhǎng)，說(shuō)明在2.0mg·mL－1以下，酶沒(méi)有飽和?？紤]到實(shí)驗(yàn)需要一定的代謝量以利于定量，遂選擇孵育時(shí)間60 min，酶蛋白為1.0mg·mL－1。

圖4 CYP3A4＊1中孵育條件對(duì)ATV 代謝情況的影響A.代謝量與培養(yǎng)時(shí)間的關(guān)系；B代謝量與孵育蛋白質(zhì)含量的關(guān)系Fig 4 The relationship between metabolism and incubation condition for CYP3A4＊1A.metabolic amount vs.incubation time；B metabolic amount vs.incubation protein concentration

3.6 CYP3A4重組酶對(duì)ATV 代謝的酶動(dòng)力學(xué)參數(shù)及比較 將實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)按米曼氏方程擬合，內(nèi)在清除率CLint等于Vmax／Km，CLint是比較突變重組酶與野生型重組酶代謝差異的標(biāo)準(zhǔn)，CLint值越大表明該酶對(duì)底物的代謝活性越大，比較CYP3A4重組酶對(duì)ATV 代謝的酶動(dòng)力學(xué)參數(shù)（表2）。

表2 ATV 在人重組酶CYP3A4＊1／＊3／＊5／＊16／＊18中按米曼氏方程擬合的代謝動(dòng)力學(xué)參數(shù)Tab 2 ATV metabolic kinetic parameters of Michaelis－Menten equation fitting in human Recombinase CYP3A4＊1／＊3／＊5／＊16／＊18

研究結(jié)果表明，CYP3A4＊3的Km與野生型的相近，代謝速率略高于野生型，CLint值比較看來(lái)酶活性略大于野生型。CYP3A4＊5 的Km雖略高于野生型，但顯著高于野生型的代謝速率，彌補(bǔ)了其對(duì)ATV 的低親和力，CLint值比較看來(lái)酶活性顯著大于野生型。CYP3A4＊16 的Km顯著高于野生型，代謝速率與野生型的相近，CLint值比較看來(lái)酶活性顯著低于野生型。CYP3A4＊18的Km與代謝速率均略高于野生型，CLint值比較看來(lái)酶代謝ATV 的活性與野生型相近。

4 討論

本文通過(guò)分子學(xué)水平探明OATP1B1多態(tài)性對(duì)ATV 轉(zhuǎn)運(yùn)影響的機(jī)制及CYP3A4 多態(tài)性對(duì)ATV代謝影響的機(jī)制。

自Ieiri等［9］研究發(fā)現(xiàn)口服同等劑量ATV 的高血脂患者中，攜帶c.521CC等位基因的患者相比c.521TT AUC增高144%的報(bào)道以來(lái)，Yoshio Kameyama等［10］利用感染表達(dá)OATP1B1的HEK293T細(xì)胞，證實(shí)ATV 為OATP1B1 的底物。諸多圍繞攝入型轉(zhuǎn)運(yùn)體OATP1B1對(duì)藥物轉(zhuǎn)運(yùn)影響的研究進(jìn)一步證明，體外轉(zhuǎn)運(yùn)試驗(yàn)中cDNA 轉(zhuǎn)染的HEK293T 細(xì)胞可作為一種有效的工具，用于預(yù)測(cè)OATP1B1 SNPs對(duì)藥物體內(nèi)處置過(guò)程的影響［7］。本研究室亦通過(guò)構(gòu)建OATP1B1重組質(zhì)粒模型，證實(shí)ATV 在不同基因型HEK293T 細(xì)胞的攝取率OATP1B1＊5明顯小于OATP1B1＊1a。本次研究表明OATP1B1 521 位點(diǎn)（亞洲人群的突變率為16%［11］）可能是ATV 轉(zhuǎn)運(yùn)的分子作用點(diǎn)，也是影響OATP1B1對(duì)ATV 轉(zhuǎn)運(yùn)能力的關(guān)鍵位點(diǎn)，該位點(diǎn)發(fā)生突變會(huì)導(dǎo)致轉(zhuǎn)運(yùn)入肝至靶點(diǎn)的ATV 量減少，難以達(dá)到相應(yīng)的降脂療效，故臨床上應(yīng)關(guān)注患者OATP1B1 521位點(diǎn)的突變情況，指導(dǎo)ATV 臨床合理用藥。

CYP3A4是參與他汀類(lèi)藥物Ⅰ相代謝過(guò)程中最主要的酶類(lèi)［12］，國(guó)內(nèi)外研究顯示CYP3A4酶活性具有明顯的個(gè)體差異（可達(dá)60倍），會(huì)導(dǎo)致治療失敗或難以預(yù)料的毒副作用的發(fā)生［13］。而90% 的CYP3A4代謝活性個(gè)體差異均由基因多態(tài)引起。CYP3A4多態(tài)性會(huì)導(dǎo)致患者間出現(xiàn)顯著的個(gè)體差異，影響他汀類(lèi)藥物治療降脂療效，甚至出現(xiàn)橫紋肌溶解等不良反應(yīng)［14］。迄今為止，在中國(guó)人體中已發(fā)現(xiàn)的CYP3A4編碼區(qū)突變基因型主要為CYP3A4＊3、＊5、＊16 和＊18，其發(fā)生率雖然不高，其中CYP3A4＊3最早在32名中國(guó)人中發(fā)現(xiàn)1例突變，而CYP3A4＊5、＊16 和＊18 突變發(fā)生率均在1%左右［15］。而有關(guān)這些位點(diǎn)突變后酶活性的變化文獻(xiàn)報(bào)道并不一致，酶活性可能會(huì)因底物不同而存在差異［16］。不同基因型CYP3A4 酶對(duì)ATV 代謝過(guò)程影響有何差異尚未見(jiàn)展開(kāi)研究。我們這次研究表明CYP3A4 酶這些位點(diǎn)的突變會(huì)不同程度影響CYP3A4對(duì)ATV 的代謝活性，故ATV 在臨床用藥時(shí)也應(yīng)關(guān)注患者CYP3A4不同位點(diǎn)的突變情況。

總之，藥物轉(zhuǎn)運(yùn)體 OATP1B1 及代謝酶CYP3A4基因多態(tài)性會(huì)對(duì)ATV 的轉(zhuǎn)運(yùn)代謝過(guò)程產(chǎn)生影響，從而導(dǎo)致巨大個(gè)體差異，這些差異將會(huì)引起毒副作用或無(wú)效治療的發(fā)生。臨床用藥過(guò)程中，應(yīng)密切關(guān)注個(gè)體差異與基因多態(tài)的關(guān)聯(lián)，并針對(duì)不同患者通過(guò)減少劑量避免不良事件的發(fā)生，或更換藥物避免無(wú)效治療，以免延誤最佳治療期。

目前，大部分有關(guān)基因多態(tài)性對(duì)他汀類(lèi)藥物影響的研究，都只考慮某一種多態(tài)性對(duì)他汀類(lèi)藥物的影響，而他汀類(lèi)藥物在體內(nèi)的代謝、轉(zhuǎn)運(yùn)、產(chǎn)生藥效的過(guò)程十分復(fù)雜，影響因素眾多，單個(gè)遺傳決定因素難以全面反應(yīng)多態(tài)性所致影響，同時(shí)考慮多個(gè)基因聯(lián)合 效 應(yīng) 更 具 現(xiàn) 實(shí) 意 義。如OATP、P－gp［17］、CYPs、LDL－受 體［18］、CETP［19］、ApoE［20］及HMGCoA 還原酶［21］等多態(tài)性均不同程度影響他汀類(lèi)藥物代謝、轉(zhuǎn)運(yùn)及藥效的改變。因此，研究在基因多態(tài)“網(wǎng)絡(luò)”對(duì)他汀類(lèi)藥物轉(zhuǎn)運(yùn)、代謝及藥效的影響，為臨床上個(gè)體化用藥提供實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)和理論依據(jù)，確保用藥的安全性和有效性，意義重大。

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