葛 鵬 宋敬敬 蘭杰 蘇桂新 李曉亮 丁紅梅 孫續(xù)國(guó)

分析多發(fā)性骨髓瘤伴發(fā)淀粉樣變患者實(shí)驗(yàn)室檢查指標(biāo)的變化特征*

葛 鵬 宋敬敬 蘭杰 蘇桂新 李曉亮 丁紅梅 孫續(xù)國(guó)

目的：報(bào)道多發(fā)性骨髓瘤（multiple myeloma，MM）伴發(fā)骨髓淀粉樣變實(shí)驗(yàn)室指標(biāo)特征，進(jìn)一步分析MM伴發(fā)淀粉樣變患者實(shí)驗(yàn)室檢查指標(biāo)的變化。方法：臨床診斷MM患者44例，骨髓涂片剛果紅染色結(jié)合偏振光確定淀粉樣變，將MM劃分為淀粉樣變陽(yáng)性和陰性兩組。分別對(duì)兩組進(jìn)行全血細(xì)胞、血清酶及免疫球蛋白含量測(cè)定。同時(shí)依據(jù)細(xì)胞形態(tài)學(xué)分析兩組骨髓各系幼稚與成熟細(xì)胞及骨髓瘤細(xì)胞數(shù)量。結(jié)果：MM發(fā)現(xiàn)骨髓淀粉樣變陽(yáng)性患者免疫標(biāo)志物IgG含量明顯低于陰性組，κ和λ含量均值有降低趨勢(shì)，但是未見統(tǒng)計(jì)學(xué)差異。淀粉樣變陽(yáng)性患者血清LDH和LDH1活性明顯高于陰性組，而PT、Alb、PA、Glo、血液RBC、WBC和PLT數(shù)量等指標(biāo)無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)差異。結(jié)論：MM患者免疫球蛋白IgG含量降低及LHD和LDH1增高有可能作為輔助檢查MM骨髓淀粉樣變的標(biāo)志物。

多發(fā)性骨髓瘤 淀粉樣變 骨髓涂片

多發(fā)性骨髓瘤（multiple myeloma，MM）患者逐年呈現(xiàn)上升趨勢(shì)，大約占所有血液系統(tǒng)惡性腫瘤的10%，在50歲以上的人群中占3%以上，并以每年1%的惡化率轉(zhuǎn)變?yōu)镸M［1］。另外，隨著醫(yī)療技術(shù)的進(jìn)步MM患者生存時(shí)間逐漸延長(zhǎng)，根據(jù)其他類型相關(guān)淀粉樣變的形成特點(diǎn)，推測(cè)MM伴發(fā)淀粉樣變發(fā)生率也將會(huì)增高。綜合MM伴發(fā)淀粉樣變的研究報(bào)道，淀粉樣變沉積涉及的器官有骨髓淀粉樣變、腎臟淀粉樣變、肝臟淀粉樣變、肌肉血管淀粉樣變和舌組織淀粉樣變［2-6］。分析MM伴發(fā)淀粉樣變可以發(fā)生沉積的器官可直接影響輔助診斷伴發(fā)淀粉樣變，具有臨床價(jià)值。

目前對(duì)于MM形成淀粉樣變的機(jī)制還未完全明了，但是大量研究報(bào)道MM患者組織內(nèi)沉積淀粉樣變具有免疫球蛋白抗原性［7-8］，說(shuō)明其前蛋白為免疫球蛋白。另外，MM患者血液中IgM蛋白輕鏈二聚體含量明顯增多［9-12］。但是伴發(fā)淀粉樣變患者是否存在其他生物標(biāo)志物的特征性改變?nèi)鄙傧到y(tǒng)研究。

淀粉樣變前蛋白形成淀粉樣變纖維可沉積于組織器官，導(dǎo)致患者淀粉樣變綜合征［13］。臨床判定組織淀粉樣變的經(jīng)典方法，主要依靠病理組織剛果紅染色結(jié)合偏振光顯微鏡檢查進(jìn)行診斷。MM患者臨床骨髓檢查有兩種基本方法，一種為骨髓涂片檢查，另一種為骨髓病理檢查［14］，兩種方法各有檢查適應(yīng)癥，但臨床實(shí)驗(yàn)檢查MM骨髓涂片檢查法應(yīng)用比較廣泛［15］。

本研究系統(tǒng)探討MM患者是否伴發(fā)骨髓淀粉樣變，其造血細(xì)胞及血清實(shí)驗(yàn)室檢查指標(biāo)的變化特征，為臨床篩選試驗(yàn)檢查志物。

1 材料與方法

1.1 一般資料

選取天津醫(yī)科大學(xué)腫瘤醫(yī)院2012年3月至12月臨床診斷多發(fā)性骨髓瘤（MM）患者44例，采集骨髓用于多發(fā)性骨髓瘤細(xì)胞檢查和骨髓淀粉樣變檢查。同時(shí)采集靜脈血液用于細(xì)胞學(xué)、血清蛋白及血清酶學(xué)檢查。

1.2 方法

1.2.1 血清細(xì)胞學(xué)檢測(cè) SysmexXE-5100血細(xì)胞分析儀（日本，Sysmex公司）分別測(cè)定靜脈血血紅蛋白（Hemoglobulin，Hb）、紅細(xì)胞計(jì)數(shù)（red blood cell，RBC）、白細(xì)胞計(jì)數(shù)（white blood cell，WBC）、血小板計(jì)數(shù)（Platelets，PLT）數(shù)量和白細(xì)胞各類型絕對(duì)值。

1.2.2 骨髓涂片制備 制備厚薄均勻細(xì)胞分布良好的骨髓膜涂片，骨髓膜面積為35 mm×65 mm，無(wú)水甲醇固定1 min，瑞氏染色3 min，加入pH 7.4 PBS緩沖液染色30 min，顯微鏡觀察。

1.2.3 骨髓淀粉樣變檢測(cè) 骨髓涂片采用剛果紅染色，涂片厚度與骨髓膜大小與上述相同，無(wú)水甲醇固定5 min，剛果紅溶液染色30 min，蘇木素溶液染色10 min，阿拉伯樹膠封片，顯微鏡觀察淀粉樣變。

1.2.4 血清免疫學(xué)檢測(cè) 西門子BNⅡ特種蛋白儀（德國(guó)，西門子公司）及配套試劑分別測(cè)定血清IgA、IgG、IgM、κ和λ5項(xiàng)免疫標(biāo)志物含量。

1.2.5 血清酶學(xué)檢測(cè) HITACHI 7600全自動(dòng)生化分析儀（日本，日立公司）及配套試劑，測(cè)定ALD、ALP、AST、ADA、mAST、LDH、LDH1等16項(xiàng)生化指標(biāo)。

1.3 統(tǒng)計(jì)學(xué)分析

采用SPSS 19.0軟件進(jìn)行分析，組間正態(tài)分布采用t檢驗(yàn)，率檢驗(yàn)采用χ2檢驗(yàn)，P＜0.05為有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 MM患者骨髓伴發(fā)淀粉樣變檢測(cè)

所有臨床診斷MM患者骨髓涂片進(jìn)行剛果紅染色并結(jié)合偏振光顯微鏡檢查淀粉樣變沉積，結(jié)果發(fā)現(xiàn)44例中有10例患者骨髓中出現(xiàn)剛果紅陽(yáng)性及偏振光出現(xiàn)藍(lán)綠色熒光，確定為骨髓淀粉樣變沉積（圖1）。

2.2 淀粉樣變陽(yáng)性患者血液細(xì)胞學(xué)特征

分析MM患者伴發(fā)淀粉樣變陽(yáng)性及陰性兩組患者靜脈血中WBC、RBC、Hb、PLT數(shù)量，發(fā)現(xiàn)骨髓伴發(fā)淀粉樣變患者WBC和單核細(xì)胞絕對(duì)值明顯高于淀粉樣變陰性組（P＜0.05），而RBC、Hb、中性粒細(xì)胞絕對(duì)值、PLT和淋巴細(xì)胞絕對(duì)值無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)差異（表1）。

2.3 伴發(fā)淀粉樣變患者血清生物標(biāo)志物變化

骨髓淀粉樣變陽(yáng)性與陰性MM患者血清中能夠指示骨代謝相關(guān)的ALP、5-NT等酶活性未發(fā)現(xiàn)具有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異，而LDH和LDH1活性伴發(fā)淀粉樣變組明顯高于淀粉樣變陰性組（表2）。

2.4 伴發(fā)淀粉樣變患者血清免疫標(biāo)志物特征

比較淀粉樣變陰性與陽(yáng)性兩組之間血清中免疫標(biāo)志物含量，發(fā)現(xiàn)兩組在蛋白含量、白蛋白及系統(tǒng)性淀粉樣變前蛋白PA含量均未發(fā)現(xiàn)具有顯著性差異。免疫球蛋白單鏈κ和λ在淀粉樣變陽(yáng)性組均值低于陰性組，但是無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)差異。免疫球蛋白類型只有IgG含量淀粉樣陽(yáng)性組低于陰性組（表3），其他均無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)差異。

2.5 分析伴發(fā)淀粉樣變患者骨髓細(xì)胞類型和比例

分析所有MM患者骨髓各種血細(xì)胞及骨髓瘤細(xì)胞的形態(tài)學(xué)特征和比例，發(fā)現(xiàn)伴發(fā)淀粉樣變患者在原始漿細(xì)胞的比例明顯增高，而幼稚漿細(xì)胞和成熟漿細(xì)胞的比例無(wú)明顯增高（P＜0.05），其他幼稚粒細(xì)胞、幼稚紅細(xì)胞的比例無(wú)顯著性差異。

3 討論

最近報(bào)道MM患者可以伴發(fā)組織器官淀粉樣變沉積，可涉及肝臟、腎臟、骨髓、舌和血管淀粉樣變［2-6］。因此選擇何種組織器官用于檢查淀粉樣變，直接關(guān)系到臨床MM患者伴發(fā)淀粉樣變檢出率。目前MM伴發(fā)淀粉樣變?nèi)鄙倥R床特征性輔助檢查方法。本組先前建立了檢查骨髓淀粉樣變的方法，有助于輔助檢查骨髓淀粉樣變。

根據(jù)骨髓淀粉樣變檢查結(jié)果發(fā)現(xiàn)MM患者骨髓中淀粉樣變可呈陽(yáng)性，由此確定骨髓可用于檢出MM患者伴發(fā)淀粉樣變，并且大量研究報(bào)道MM淀粉樣變的前蛋白為免疫球蛋白（Immunoglobulin，Ig）［7-8］。

將MM患者劃分為淀粉樣變陽(yáng)性與陰性兩組［11］，由于這兩組患者血液細(xì)胞學(xué)特征未見有明顯差異，提示血液細(xì)胞學(xué)指標(biāo)用于輔助檢查MM伴發(fā)骨髓淀粉樣變意義不大。進(jìn)一步分析參與骨代謝相關(guān)酶類，結(jié)果LDH和LDH1活性明顯高于陰性組，可能淀粉樣變沉積導(dǎo)致細(xì)胞酶活性增加或通透性增加所致。

在伴發(fā)骨髓淀粉樣變陽(yáng)性組IgG含量明顯低于對(duì)照組，而免疫球蛋白κ和λ雖然未見有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異，但是均數(shù)低于陰性組，這一現(xiàn)象與FAP淀粉樣變患者血清中淀粉樣變前蛋白TTR水平有降低趨勢(shì)現(xiàn)象相似。上述兩項(xiàng)指標(biāo)可能難以成為預(yù)測(cè)MM伴發(fā)淀粉樣變的指標(biāo)，但是有可能成為MM淀粉樣變的參考指標(biāo)。

MM骨髓典型的診斷特征為出現(xiàn)多發(fā)性骨髓瘤細(xì)胞，血漿中出現(xiàn)大量免疫球蛋白M。分析兩組人群各類型骨髓細(xì)胞比例未見明顯差異，因此單純骨髓細(xì)胞分析難以成為預(yù)測(cè)MM伴發(fā)淀粉樣變的指標(biāo)。

本文報(bào)道MM伴發(fā)骨髓淀粉樣變患者免疫球蛋白IgG含量降低及LDH、LDH1增高具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，提示測(cè)定上述標(biāo)志物可能有助于輔助檢查MM伴發(fā)骨髓淀粉樣變形成。

1 Therneau TM,Kyle RA,Melton LJ,et al.Incidence of monoclonal gammopathy of undetermined significance and estimation of duration before first clinical recognition[J].Mayo Clin Proc,2012,87 (11):1071-1079.

2 Wang XH,Zhang YL.1 case of multiple myeloma tongue amyloidosis misdiagnosed cases were analyzed[J].J Chinese PLA Postgrad Med Sch,2011,32(5):526-528.[王新花,張?zhí)N莉.1例多發(fā)性骨髓瘤舌淀粉樣變誤診病例分析[J].軍醫(yī)進(jìn)修學(xué)院學(xué)報(bào),2011,32(5): 526-528.]

3 Wang CY,Wang H,Liao YH,et al.Clinical Features of Multiple Myeloma Patients with Kidney Lesion and the Correlative Factors [J].Chinese General Practice,2011,14(10):3235-3237.[王成玉,王涵,廖蘊(yùn)華,等.多發(fā)性骨髓瘤合并腎損害患者的臨床特征及相關(guān)危險(xiǎn)因素分析[J].中國(guó)全科醫(yī)學(xué),2011,14(10):3235-3237.]

4 Ikezawa Y,Oka K,Nagayama R,et al.Bence-Jones Protein-Type Myeloma With Amyloid Myopathy Presenting as Amyloidomas and Extensive Amyloid Deposits in the Propria Muscularis:A Rapidly Fatal Autopsy Case[J].Int J Surg Pathol,2012,20(1): 83-88.

5 Lee HJ,Chang SE,Lee MW,et al.Systemic amyloidosis associated with multiple myeloma presenting as periorbital purpura[J].J Der-matol,2008,35(6):371-372.

6 Mehta AA,Venkatakrishnan R,Jose W,et al.Multiple myeloma presenting as eosinophilic pleural effusion[J].Asia Pac J Clin Oncol, 2010,6(4):256-259.

7 Nagano S,Mori M,Kato A,et al.Therapeutic Effects of Lenalidomide on Hemorrhagic Intestinal Myeloma-associated AL Amyloidosis[J].Intern Med,2013,52(10):1101-1105.

8 Tosi P,Tomassetti S,Merli A,et al.Serum free light-chain assay for the detection and monitoring of multiple myeloma and related conditions[J].Ther Adv Hematol,2013,4(1):37-41.

9 Higeta D,Yokohama A,Osaki Y,et al.IgM-lambda multiple myeloma presenting with systemic amyloidosis[J].Rinsho Ketsueki, 2009,50(12):1711-1714.

10 Fernandez-Aguilar S,Sourtzis S,Chaikh A.IgM plasma cell myeloma with amyloidosis presenting as mammary microcalcifications[J]. APMIS,2008,116(9):846-849.

11 Gertz MA.Immunoglobulin light chain amyloidosis:2011 update on diagnosis,risk stratifi cation,and management[J].Am J Hematol,2011,86(2):180-186.

12 Siragusa S,Morice W,Gertz MA,et al.Asymptomatic immunoglobulin light chain amyloidosis(AL)at the time of diagnostic bone marrow biopsy in newly diagnosed patients with multiple myeloma and smouldering multiple myeloma[J].Ann Hematol,2011,90(1): 101-106.

13 Kyle RA,Gertz MA(1995)Primary systemic amyloidosis:clinical and laboratory features in 474 cases[J].Semin Hematol,1995,32(1): 45-59.

14 Petruzziello F,Zeppa P,Ciancia G,et al.Cytological and histological detection of amyloid deposits in bone marrow of patients aff ected by multiple myeloma[J].Leukemia&Lymphoma,2011,52(12): 2304-2307.

15 Petruzziello F,Zeppa P,Catalano L,et al.Amyloid in bone marrow smears of patients aff ected by multiple myeloma[J].Ann Hematol, 2010,89(5):469-474.

（2013-09-30收稿）

（2014-01-10修回）

（本文編輯∶周曉穎）

Variation in the characteristics of multiple myeloma with amyloidosis

Peng GE,Jingjing SONG,Jie LAN,Guixin SU,Xiaoliang LI,Hongmei DING,Xuguo SUN
Correspondence to:Xuguo SUN;E-mail:sunxuguo3@hotmail.com

Tianjin Medical University School of Medical Laboratory,Tianjin 300203,China

This work was supported by the National Natural Science Foundation of China(No.30973157)

Objective:Multiple myeloma(MM)complicated with bone marrow amyloidosis was previously reported.In this study,patients with MM complicated with amyloidosis were further analyzed using biochemical markers.Methods:A total of 44 patients diagnosed with MM were included in this study.Bone marrow smears stained with Congo red were used and polarized light was utilized to detect MM with amyloidosis.These smears were then divided into two groups:amyloidosis positive and amyloidosis negative.In these groups,blood cell,serum enzyme,and immunoglobulin content were determined.The morphological characteristics of bone marrow cells and the number of immature,mature,and myeloma cells were analyzed.Results:The immune marker IgG of the amyloidosis-positive patients with MM was significantly higher than that of the amyloidosis-negative group.Mean kappa and lambda contents decreased.Serum lactate dehydrogenase(LDH)and lactate dehydrogenase 1(LDH1)activities in the amyloidosis-positive group were significantly higher than those in the amyloidosis-negative group.Significant differences were also observed in several biochemical markers,including PT,Alb,PA,and Glo.Likewise,the index numbers of peripheral blood RBC,WBC,and PLT were significantly different.Conclusion:Immunoglobulin content was not correlated with amyloid deposition in patients with MM complicated with bone marrow amyloidosis.

multiple myeloma,amyloidosis,bone marrow

10.3969/j.issn.1000-8179.20131861

葛鵬 主管技師，碩生在讀研究生，研究方向?yàn)榕R床檢驗(yàn)診斷學(xué)。

天津醫(yī)科大學(xué)醫(yī)學(xué)檢驗(yàn)學(xué)院（天津市300203）

*本文課題受國(guó)家自然科學(xué)基金項(xiàng)目（編號(hào)：30973157）資助

孫續(xù)國(guó) sunxuguo3@hotmail.com

E-mail∶dreamskyer_2003@163.com