周小航，王喜軍

(黑龍江中醫(yī)藥大學中藥血清藥物化學國家中醫(yī)藥管理局重點實驗室，黑龍江 哈爾濱 150040)

“證候”是中醫(yī)學的專業(yè)術(shù)語，概括為一系列互有關(guān)聯(lián)的癥狀總稱，通過望、聞、問、切來獲知疾病過程中在整體層面上機體的變化，簡稱證或候。為推進中醫(yī)證候研究的客觀化和規(guī)范化，對于其相對應的動物模型的建立和研究勢在必行。自上世紀60年代，鄺安堃［1］等就較早開展了相關(guān)研究。

1 證候動物模型的分類

1.1 西醫(yī)病理模型

在臨床實踐中?？砂l(fā)現(xiàn)某些化合物的毒副作用可造成器質(zhì)性病變。該類病理生理學變化與某些中醫(yī)典型證候病理特征相似。

例如趙寧［2］等腹腔注射利血平造成大鼠脾虛證模型，并用四君子湯和理中丸反證該模型，后經(jīng)指標檢測，給藥組和模型組有顯著性差異。王喜軍［3］等先對給藥組大鼠連續(xù)7日灌胃給予茵陳蒿湯，第8日給藥組和模型組同時灌胃給予CCl4(四氯化碳)油溶液，最后對一系列生化指標進行檢測，模型組與空白組的差異存在統(tǒng)計學意義，給藥組也能對CCl4引起各項指標的差異進行回調(diào)，由此證明此模型被成功復制。劉源才［4］等通過連續(xù)14天皮下注射外源性皮質(zhì)酮，制備腎陽虛模型，給予中國勁酒進行干預。通過對相應指標進行檢測，其空白組與腎陽虛模型組比較差異有統(tǒng)計學意義，此藥物能改善腎陽虛模型大鼠HPA軸的功能。

1.2 中醫(yī)病因模型

此類模型是基于傳統(tǒng)中醫(yī)理論，在動物上施以病因，使此模型的表現(xiàn)與臨床主要表現(xiàn)一致，再對模型的體征等指標進行觀察，并用與病因相關(guān)的治療藥物進行反證，若動物理化指標相應發(fā)生改變，則證明該造模方法有效。

徐惠仁［5］通過激怒刺激法復制大鼠肝郁模型，通過血流變學相關(guān)指標檢測，發(fā)現(xiàn)模型組與對照組差異顯著，同時大鼠出現(xiàn)撕咬、不思飲食等癥狀。這與臨床中情志不遂以致肝郁，且肝氣機失常以致血瘀等描述相符，并用疏肝理氣藥對此模型進行反證，表明此模型與大鼠肝郁模型相符合。孫福立［6］利用睡眠剝奪法復制大鼠心氣虛模型，發(fā)現(xiàn)模型組大鼠心率和血壓改變明顯，證明以此方法建立的模型符合中醫(yī)心氣虛證。李麗琦［7］通過寒冷刺激法復制大鼠血瘀證模型，從血液黏度等指標進行驗證，發(fā)現(xiàn)模型組均與對照組存在差異，并且經(jīng)藥物反證，證明此模型與中醫(yī)寒凝血瘀證相吻合。

1.3 病證結(jié)合模型

此類模型是指既能體現(xiàn)中醫(yī)辨證論治的思想，又能在器官上得到明確的病理變化和診斷評價，也就是在動物模型身上同時具備證候和疾病的特征，這種模型在探討疾病病理、生理變化與中醫(yī)證候之間的關(guān)系起著不可或缺的作用。

1.3.1 多因素復合模型

多因素復合模型是基于中醫(yī)藥理論，結(jié)合現(xiàn)代醫(yī)學理論與實驗動物科學知識，分別或同時采用中醫(yī)學病因復制證候模型和現(xiàn)代醫(yī)學病因復制疾病動物模型，使模型動物同時表現(xiàn)出疾病和證候的特征［8］。

例如任建勛［9］等通過不可預知的慢性睡眠剝奪并伴隨半高脂高糖復合飲食刺激大鼠，復制了大鼠氣虛血瘀模型，發(fā)現(xiàn)模型組與空白組血流變學相關(guān)指標出現(xiàn)顯著性差異。模型大鼠在雙參通冠方干預給藥后，給藥組的各項指標與模型相比均降低。宋紅等［10］對大鼠進行大黃瀉下、游泳力竭和饑餓復合法復制脾氣虛證模型。模型組大鼠經(jīng)血清木糖濃度等指標與對照組比較存在統(tǒng)計學意義，經(jīng)健胃中藥治療，其各項指標均與對照組相比無統(tǒng)計學意義，但與模型組比較，差異有統(tǒng)計學意義。

1.3.2 從西醫(yī)病理判斷中醫(yī)的“證”

疾病的病理變化即中醫(yī)證候，醫(yī)學檢查中的生化指標和病理切片等，一些病理變化在一定程度上與中醫(yī)的證存在相關(guān)性，并能反映部分中醫(yī)證的實質(zhì)。例如佟欣［11］等人在原有黃疸模型研究的基礎(chǔ)上，多因素復合誘導大鼠陰黃證模型，治療組給予茵陳四逆湯，觀察并測定其生化指標等活性和效價，在藥物治療下，證實大鼠的上述指標恢復，故認為此模型具有良好的穩(wěn)定性，并且經(jīng)得起藥物反證，是一種切實可行的陰黃證造模方法。王喜軍［3］等人，對給藥組按高、中、低劑量分別給予大鼠茵陳蒿湯，于第10日模型組和給藥組同時灌胃給予50%(體積比)乙醇5g/kg，連續(xù)5天復制大鼠肝損傷模型。觀察生化指標的變化，發(fā)現(xiàn)模型組與給藥組相比，生化指標存在顯著性差異，同時對組織病理學進行觀察，模型組肝臟出現(xiàn)肝損傷，給藥組也出現(xiàn)肝損傷，但與模型組相比程度明顯減輕。故認為成功復制此模型，且茵陳蒿湯具有良好的保肝作用。

1.3.3 在中醫(yī)“證”的基礎(chǔ)上建立西醫(yī)“病”的模型

在傳統(tǒng)中醫(yī)理論的指導下，運用六淫、飲食、情志、勞倦等中醫(yī)特有的致病因素建立中醫(yī)病因證候模型，在此基礎(chǔ)上，通過藥物或是手術(shù)等方法，建立西醫(yī)疾病的模型。例如何軍峰［12］等人先通過喂養(yǎng)大鼠高脂飼料4周，誘發(fā)心血管的病理改變，此基礎(chǔ)上腹腔注射小劑量鏈脲佐菌素制備2型糖尿病大鼠模型，最后再給予強的松龍和腎上腺素，并對其進行心電圖檢測等觀察，模型組大鼠2型糖尿病模型的復制是成功的。王建［13］等采用老年Wistar大鼠，結(jié)合饑餓、疲勞等因素復制氣虛血瘀模型，采用雙側(cè)頸總動脈結(jié)扎復制腦缺血模型。模型組血液流變學等一系列微觀指標的變化，均與空白對照組的差異存在統(tǒng)計學意義。并對此模型用中藥復方制劑腦通絡(luò)進行反證。認為此氣虛血瘀腦缺血模型復制成功。

2 發(fā)展與前景

無論是西醫(yī)病理模型還是中醫(yī)病因模型模擬中醫(yī)證候的研究，都可單獨闡明某種病因的單獨作用，但不能體現(xiàn)現(xiàn)實生活中疾病發(fā)生的復雜性和中醫(yī)單一病因的復雜性，所以這兩種模型的發(fā)展受到了極大的制約。病證結(jié)合動物模型雖然看似全面的模擬中醫(yī)發(fā)病根源，但是由于變量多，可控性和可重復性都較難把握。因此，如何使中醫(yī)證候動物模型更加規(guī)范化、標準化以及如何提高模型的重現(xiàn)性都將成為發(fā)展趨勢。要做出理想的中醫(yī)證候動物模型，我們應闡明宏觀信息與微觀指標的聯(lián)系同時建立“以方測證”，從這兩部分入手。例如Ping Wang［14］等應用UPLC HDMS對大鼠腎陰虛模型進行代謝組學分析，對其尿液進行檢測后發(fā)現(xiàn)腎陰虛組與模型組代謝輪廓有顯著性差異，同時應用六味地黃丸后使上述代謝輪廓回調(diào)至正常水平。

中醫(yī)證候動物模型不應僅局限在單獨的局部生理的改變，還應結(jié)合系統(tǒng)生物學，聯(lián)合多種組學、譜學，借助多系統(tǒng)，研究實驗整體在證候模型中的改變，觀察整個生物系統(tǒng)在DNA、mRNA、蛋白質(zhì)、代謝物之間復雜的生物過程。方便科學工作者從整體角度印證中醫(yī)證候動物模型的科學性、有效性，推進對中醫(yī)理論的觀察，探索和研究，深入揭示“證”本質(zhì)的研究。

3 展望

20世紀中葉至今，中醫(yī)證候動物模型不斷發(fā)展成熟，思路也日漸開闊。成熟體系的建立和成功案例的不斷復制與創(chuàng)新對中醫(yī)藥的發(fā)展起了舉足輕重的作用。在此過程中，該類模型的不足之處也逐漸顯現(xiàn)。本文通過對相關(guān)問題的探討，期望能不斷改善中醫(yī)證候動物模型的評價機制，建立與傳統(tǒng)中醫(yī)理論與特色相適應的手段，并不斷完善，為提高臨床實驗的可靠性和適用性提供支持。

［1］鄺安堃，丁霆，陳家倫，等.陽虛(甲狀腺功能減退)和陰虛(甲狀腺功能亢進)病人血漿環(huán)核苷酸的對比［J］.中醫(yī)雜志，1979，20(7):21－24.

［2］趙寧，賈紅偉，張皖東，等.利血平所致脾虛大鼠脾陽虛證和脾氣虛證的證候?qū)傩裕跩］.中醫(yī)雜志，2008，49(5):449 －452.

［3］王喜軍.中藥血清藥物化學［M］.北京:科學出版社，2010.

［4］劉源才，楊躍軍，沈自尹.中國勁酒對腎陽虛模型大鼠下丘腦－垂體－腎上腺軸及免疫功能的影響［J］.中國免疫學雜志，2011，27(12):1080－1084.

［5］須惠仁，傅湘琦，向麗華，等.肝郁證的動物模型研究－激怒刺激對大鼠血液流變學的影響［J］.中醫(yī)雜志，1991，32(6):364.

［6］孫福立，李德明.試用睡眠剝奪法建立心氣虛的動物模型［J］.中西醫(yī)結(jié)合雜志，1987，7(1):35 －38.

［7］李麗琦.三種血瘀模型紅細胞膜生物學差異性及寒冷剌激血瘀模型方證相關(guān)實驗研究［D］.哈爾濱:黑龍江中醫(yī)藥大學，2012.

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［9］任建勛，林成仁，徐立，等.雙參通冠方對多因素復合刺激誘導氣虛血瘀證大鼠血液流變性影響的研究［J］.中藥藥理與臨床，2010，26(5):100 －102.

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［14］Ping Wang，Hui Sun，Haitao Lv，et al.Thyroxine and reserpine － induced changes in metabolic profiles of rat utine and the therapeutic effect of Liu Wei Di Huang Wan detected by UPLC － HDMS［J］.Journal of Pharmaceutical and Biomedical Analysis，2010，539(3):631－645.