汪雪峰，董利陽(yáng)，王 鈞，倪鴻昌，蘇 川

（1.江蘇大學(xué)附屬人民醫(yī)院中心實(shí)驗(yàn)室，江蘇 鎮(zhèn)江 212002；2.南京醫(yī)科大學(xué)江蘇省現(xiàn)代病原生物學(xué)重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室，江蘇南京 210029）

目前的自身免疫病治療藥物大多是通過(guò)干擾固有和獲得性免疫反應(yīng)的非特異性免疫抑制劑，具有很強(qiáng)的毒副反應(yīng)［1］。因而，靶向于特定的分子途徑和細(xì)胞，特異地調(diào)節(jié)免疫系統(tǒng)，重建機(jī)體的免疫耐受機(jī)制是治療自身免疫病發(fā)展的新趨勢(shì)。盡管應(yīng)用特異性抗原誘導(dǎo)免疫耐受治療自身免疫病，可高度選擇性抑制特定抗原的淋巴細(xì)胞克隆，而不影響機(jī)體正常的免疫功能，克服了傳統(tǒng)化學(xué)藥物的毒副反應(yīng)，并在一些疾病的動(dòng)物模型上獲得了成功。但完整的抗原或蛋白免疫可能交叉連接IgE，從而活化過(guò)敏性個(gè)體體內(nèi)的肥大細(xì)胞和嗜堿性粒細(xì)胞，引發(fā)嚴(yán)重的過(guò)敏反應(yīng)；或活化自身免疫病患者體內(nèi)的致病性B、T細(xì)胞，加劇病情惡化［2］。因而，鑒定具有治療作用的表位肽（僅是全長(zhǎng)抗原的一個(gè)小片段），既能起到免疫治療作用，又可減少不良反應(yīng)，將是一種新的、很有前景的治療策略，成為自身免疫病防治研究的熱點(diǎn)。在多種自身免疫病的動(dòng)物模型中，多肽免疫顯示出很好的治療效果［3－4］。本文就治療自身免疫病多肽藥物的研究進(jìn)展作一綜述。

1 抑制自身免疫反應(yīng)的候選多肽

1.1 自身抗原、抗體來(lái)源多肽 來(lái)自于自身抗原的多肽可用于治療自身免疫和炎癥性疾病，并在誘導(dǎo)或自發(fā)的自身免疫病小鼠模型中顯示出較好的治療效果。胰島素B鏈9－23氨基酸的多肽 （B：9－23；SHLVEALYLVCGERG）能保護(hù)非肥胖型糖尿病（nonobese diabetic，NOD）小鼠避免糖尿病的發(fā)生［5］。NOD小鼠鼻內(nèi)給予B：9－23多肽治療，可明顯減少自發(fā)性胰島素自身抗體的產(chǎn)生，抑制胰島炎癥的發(fā)生，減輕高糖血癥，預(yù)防糖尿病的發(fā)生［6］。來(lái)自于人熱休克蛋白60（heatshock protein，Hsp60）437－460氨基酸的多肽P277（也稱作diaPep277），可抑制NOD小鼠胰島素依賴的糖尿病的發(fā)生，減少 IFN-γ的產(chǎn)生［7］。Hsp60的 diaPep277肽在1型糖尿病患者中分別進(jìn)行了隨機(jī)、雙盲的I、II期臨床實(shí)驗(yàn)，結(jié)果表明，diaPep277肽是安全的，且能顯著地預(yù)防成人1型糖尿病患者胰島β細(xì)胞功能的破壞。但與安慰劑組相比，diaPep277肽治療患者的糖基化血紅蛋白水平和每日胰島素的攝取量無(wú)顯著性差異。目前正在進(jìn)行更大樣本量的III期臨床實(shí)驗(yàn)［8］。

除了上述的自身抗原來(lái)源多肽外，自身抗體重鏈可變區(qū)（heavy chain variable region，VH）的互補(bǔ)決定區(qū) （complementary determining regions，CDRs）來(lái)源多肽，在狼瘡小鼠中也顯示出很好的治療效果。如15肽的pCons（FIEWNKLRFRQGLEW），是與多種不同DNA反應(yīng)的自身抗體VH區(qū)共有序列；pCons靜脈注射，可通過(guò)上調(diào)調(diào)節(jié)性T細(xì)胞 （regulatory T cells，Treg）的數(shù)量誘導(dǎo)耐受，系統(tǒng)性紅斑狼瘡 （systemic lupus erythematosus，SLE）－敏感小鼠口服 100μg pCons肽，可明顯減少蛋白尿和血清抗雙鏈DNA（anti-dsDNA）的抗體水平，延長(zhǎng)小鼠存活時(shí)間，增加血清中轉(zhuǎn)化生長(zhǎng)因子β（transforming growth factor，TGF-β）的水平，結(jié)果表明，口服pCons肽是一種安全、有效的治療SLE傾向小鼠的方法，為人類SLE的治療提供了一種新的治療靶標(biāo)［9］。

1.2 細(xì)胞因子來(lái)源多肽 細(xì)胞因子來(lái)源多肽可中和炎癥性細(xì)胞因子與其受體的相互作用，抑制自身免疫反應(yīng)的發(fā)生。Bertin-Maghit等［10］報(bào) 道，來(lái) 自 于 IL-1β的 多 肽 （YCYISTSQAEHKPVFLGC）免疫小鼠，可保護(hù)小鼠避免膠原誘導(dǎo)的關(guān)節(jié)炎的發(fā)生。來(lái)自于IL-2／IL-23 P40亞單位的9肽結(jié)合乙型肝炎病毒核心抗原（hepatitis B core antigen，HBcAg）組成異聚體，治療大腸炎小鼠，可減少小鼠急、慢性大腸炎的發(fā)生，減輕腸道炎癥，增加小鼠體重［11］。來(lái)自于IL-23p19亞單位的多肽與鑰孔血藍(lán)蛋白（keyhole limpet hemocyanin，KLH）結(jié)合，組成異聚體，治療關(guān)節(jié)炎小鼠，可明顯減輕小鼠膠原誘導(dǎo)的關(guān)節(jié)炎發(fā)生［12］。細(xì)胞因子來(lái)源多肽與KLH結(jié)合物正在進(jìn)行類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎、SLE、克羅恩病（Crohn′s disease）及1型糖尿病的臨床實(shí)驗(yàn)［13］。

1．3 T細(xì)胞受體的變異性肽配體（altered peptide ligands，APLs） 一些T細(xì)胞受體（T cell receptor，TCR）的變異性肽配體（altered peptide ligands，APLs）可抑制自身免疫反應(yīng)。APLs來(lái)自于自身抗原序列，通過(guò)氨基酸替代或骨架修飾，改變TCR作用的殘基。APLs結(jié)合于MHC分子和TCR作用后，能特異地拮抗或抑制T細(xì)胞的活化，削弱T細(xì)胞的功能；或改變T細(xì)胞極化信號(hào)，改變其Th1／Th2表型和細(xì)胞因子分泌等。APLs已用于治療不同的自身免疫病動(dòng)物模型。其氨基酸羧基端與氨基端（CO-NH2）反向變異的多肽能拮抗蛋白酶的降解，具有較高的穩(wěn)定性和治療價(jià)值，已成功用于實(shí)驗(yàn)性腦脊髓膜炎（experimental autoimmune encephalomyelitis，EAE）、糖尿病和關(guān)節(jié)炎小鼠的治療?？诜履X炎的髓磷脂堿基蛋白（myelin basic protein，MBP）87－99氨基酸的反向變型模擬物多肽，能明顯減輕小鼠自身免疫性腦脊髓炎的癥狀，延遲疾病發(fā)生［14］。MBP 83－99的APL治療多發(fā)性硬化癥 （multiple sclerosis，MS）的II期臨床實(shí)驗(yàn)表明，APL治療可使MBP特異的T細(xì)胞從Th1向Th2方向分化，但低劑量的APL可減輕大腦損傷，高劑量APL加速M(fèi)S進(jìn)展，APL存在安全隱患［15］。免疫調(diào)節(jié)性的十肽菌素RDP58（delmitide acetate），是一種來(lái)自于HLA I類分子的十個(gè)氨基酸短肽，其CO-NH2的反向序列多肽口服，可有效減輕潰瘍性大腸炎患者的臨床癥狀［16］。而且，RDP58已被成功用于EAE、間質(zhì)性膀胱炎（interstitial cystitis）小鼠的治療，它可以通過(guò)干擾pre-MAPK MyD88-IRAK4-TRAF6信號(hào)，抑制 TNF-α、IFN-γ、IL-12及IL-2致炎性細(xì)胞因子的合成［17］。迄今為止，大約有400名患者和志愿者接受了RDP58治療，證明RDP58是安全的、且耐受性較好。

格拉默的醋酸鹽（Glatiramer acetate，GA），也稱作Cop-1，一個(gè)由谷氨酸（Glu）、賴氨酸（Lys）、酪氨酸（Tyr）和丙氨酸（Ala）組成的隨機(jī)多肽（GLAT），可與MBP交叉反應(yīng)，抑制多種動(dòng)物模型EAE的發(fā)生。GA可延緩MS患者的疾病進(jìn)程，減少疾病復(fù)發(fā)，而且無(wú)免疫抑制性和其它毒性，已在1995年被美國(guó)FDA授權(quán)，用于成千上萬(wàn)MS患者的治療［18］。GA也能預(yù)防移植物抗宿主?。╣raft-vs-host disease，GVHD）的移植排斥反應(yīng)，能有效預(yù)防實(shí)驗(yàn)葡萄膜視網(wǎng)膜炎和炎癥性腸病等其它自身免疫病的發(fā)生，但GA對(duì)NZB／W的狼瘡小鼠無(wú)效［19］。

2 多肽藥物抑制自身免疫反應(yīng)的作用機(jī)制

2.1 促進(jìn)活化細(xì)胞的凋亡 據(jù)報(bào)道，U1-70K snRNP（U1-70K）蛋白剪接體的131－151氨基酸識(shí)別狼瘡患者和狼瘡小鼠CD4＋T細(xì)胞表位。其140位絲氨酸（Ser140）磷酸化的多肽類似物（稱作P140）識(shí)別MRL／lpr狼瘡小鼠CD4＋T細(xì)胞的作用更強(qiáng)［20］。P140能同時(shí)識(shí)別小鼠的MHC分子和人HLA分子，是一種泛宿主表位多肽，靜脈注射后，能明顯延長(zhǎng)MRL／lpr小鼠的存活時(shí)間，減少小鼠蛋白尿，減輕皮炎、脈管炎癥狀及血清中抗DNA的抗體水平。并且以顆粒酶B及caspase依賴的凋亡方式減少 αβTCR＋／CD3＋／CD4－／CD8－／B220＋雙陰性 T細(xì)胞、活化的 T、B細(xì)胞的數(shù)量［21］。而且，P140結(jié)合于細(xì)胞表面受體，即組成性地表達(dá)伴侶分子HSC70／Hsp73／HSP70－8蛋白。這種伴侶分子高度保守，表達(dá)于多種組織，尤其在MRL／lpr小鼠的免疫細(xì)胞表面表達(dá)豐富。HSC70或作為MHC分子的伴侶分子，或在伴侶分子介導(dǎo)的自噬過(guò)程中改變MHC分子提呈的抗原肽至CD4＋T細(xì)胞，導(dǎo)致MRL／lpr小鼠內(nèi)源性的自身抗原提呈過(guò)程終止，減少T細(xì)胞的致敏和反應(yīng)，最終影響其自身免疫反應(yīng)過(guò)程［22］。

2．2 誘導(dǎo)調(diào)節(jié)性T細(xì)胞（regulatory T cells，Treg）的產(chǎn)生

具免疫抑制作用的Treg細(xì)胞是形成外周免疫耐受的重要方式，在自身免疫病的致病機(jī)制中發(fā)揮重要的調(diào)節(jié)作用。研究表明，多種抑制自身免疫反應(yīng)的多肽，其抑制機(jī)制與誘導(dǎo)Treg細(xì)胞有關(guān)。Sundstedt等［23］報(bào)道，MBP氨基端乙?；?肽治療EAE小鼠，可抑制抗原特異性CD4＋T細(xì)胞的增殖反應(yīng)，減少IL-2、IL-4、IFN-γ的產(chǎn)生，增加IL-10的產(chǎn)生，增加的IL-10可誘導(dǎo)Treg細(xì)胞，介導(dǎo)旁抑制，抑制EAE小鼠的炎癥反應(yīng)。已進(jìn)入1型糖尿?、笃谂R床治療的P277，以及被FDA批準(zhǔn)用于MS治療的GA，均被證明可通過(guò)誘導(dǎo)Treg細(xì)胞，抑制自身免疫病理反應(yīng)［24－25］。來(lái)自于自身抗體的pCons多肽，以p38 MAPK依賴的方式誘導(dǎo)Treg細(xì)胞，抑制抗DNA抗體 （anti-DNA）的產(chǎn)生，促進(jìn)Treg細(xì)胞對(duì)效應(yīng)T細(xì)胞的抑制，從而保護(hù) NZB／W狼瘡小鼠避免 SLE的發(fā)生［26］。人抗DNA抗體的互補(bǔ)決定區(qū)hCDR1肽可通過(guò)誘導(dǎo)Treg細(xì)胞，抑制小鼠及SLE患者IFN-α的表達(dá)，減少疾病的活動(dòng)狀態(tài)［27］。

2．3 誘導(dǎo)調(diào)節(jié)性的Ⅱ型抗原遞呈細(xì)胞（antigen presenting cells，APCs） 多肽治療抑制自身免疫的另一個(gè)作用機(jī)制是影響APCs的功能，改變APCs使其成為非致炎作用的II型調(diào)節(jié)性APCs。與未治療的MS患者相比，GA治療的MS患者其樹突狀細(xì)胞 （dendritic cells，DCs）產(chǎn)生更多的IL-10，分泌更少的TNF-α和IL-12；GA抑制單核細(xì)胞的活性，促進(jìn)抗炎的Ⅱ型單核細(xì)胞產(chǎn)生，Ⅱ型單核細(xì)胞增加IL-10、TGF-β的分泌，減少IL-12和TNF-α的產(chǎn)生，過(guò)繼轉(zhuǎn)移這種Ⅱ型單核細(xì)胞可保護(hù)小鼠避免 EAE的發(fā)生［28］。血管活性腸肽（vasoactive intestinal peptide，VIP）處理的小鼠骨髓來(lái)源的樹突狀細(xì)胞 （bonemarrow-derived DC，BMDC）呈耐受表型，低表達(dá)CD40、CD80、CD86及 MHCII分子；與未處理的 DCs相比，VIP處理的DCs產(chǎn)生低水平的TNF-α和IL-12，分泌高水平的IL-10，小鼠靜脈注射VIP處理的DCs后，可抑制膠原誘導(dǎo)的關(guān)節(jié)炎及MOG35－55肽誘導(dǎo)的EAE的發(fā)生［29］。

3 結(jié)語(yǔ)

合成多肽可干預(yù)多種自身免疫反應(yīng)越來(lái)越受到廣泛關(guān)注，成為自身免疫病治療的潛在藥物候選。多肽氨基酸序列中引入假肽鍵或氨基端羧基端反向修飾等，可增加多肽藥物的穩(wěn)定性，提高其生物活性；多肽治療可避免全長(zhǎng)蛋白免疫原性引起的過(guò)敏反應(yīng)，安全性較好，在自身免疫及慢性炎癥性疾病中具有廣闊的應(yīng)用前景，但其作用機(jī)制仍未完全闡明。因而，在未來(lái)的研究中，需要進(jìn)一步研究其作用機(jī)制及其治療過(guò)程中的毒副反應(yīng)，提高自身免疫病多肽類藥物的安全性及其治療效應(yīng)，為自身免疫病抗炎藥物的發(fā)展提供新的作用靶標(biāo)。

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