王保慶,張世強(qiáng),陳衛(wèi)花,陳冬波,薛青萍

(徐州醫(yī)學(xué)院第二附屬醫(yī)院腫瘤內(nèi)科,江蘇徐州 221006)

膜聯(lián)蛋白A1(Annexin A1)是鈣磷脂結(jié)合蛋白Anx超家族的成員之一，在信號傳導(dǎo)、DNA復(fù)制、細(xì)胞周期調(diào)控、細(xì)胞轉(zhuǎn)化、細(xì)胞凋亡、鈣離子通道的形成等眾多的生理過程中發(fā)揮重要作用[1-3]。眾多的研究己經(jīng)證實了Annexin A1與多種腫瘤的發(fā)生關(guān)系密切，其表達(dá)在多個系統(tǒng)的腫瘤中明顯異常，直接或間接參與腫瘤的發(fā)生[4-7]。在體外實驗中，Annexin A1對腫瘤細(xì)胞系亦有不同的影響，Annexin A1抑制喉癌Hep-2細(xì)胞的生長而促進(jìn)結(jié)直腸癌細(xì)胞的生長和轉(zhuǎn)移[8-9]，本研究通過免疫組織化學(xué)檢測大腸癌組織、癌旁組織及腺瘤性息肉組織(管狀絨毛狀腺瘤)中Annexin A1的表達(dá)，探討其在大腸癌發(fā)生、發(fā)展過程中的臨床意義。

1 資料與方法

1.1一般資料 選取2009～2013年本院病理科存檔大腸癌組織蠟塊的患者48例，其中男26例，女22例，年齡29～72歲，中位年齡56歲；癌旁組織(均與大腸癌標(biāo)本是同一患者，但其中12例大腸癌標(biāo)本無癌旁組織)36例，其中男24例，女12例；腺瘤性息肉組織15例，其中，男8例，女7例。所有病例術(shù)前均未進(jìn)行放射治療和化學(xué)治療。標(biāo)本分為大腸癌組、癌旁組織組及腺瘤性息肉組織組。

1.2方法

1.2.1主要試劑 Annexin鼠抗人單克隆抗體購自美國Abcam公司，免疫組織化學(xué)EnVisionTM染色試劑盒購自上?；蚬?。

1.2.2實驗方法 免疫組織化學(xué)技術(shù)采用EnVision二步法。免疫組織化學(xué)過程：組織切片經(jīng)脫蠟、水化后，用檸檬酸緩沖液(pH=6.0)微波熱修復(fù)抗原5 min，30 g/L A2O2封閉內(nèi)源性的過氧化物酶，山羊血清封閉非特異性反應(yīng)。PBS替代一抗作陰性對照。參照文獻(xiàn)對染色結(jié)果進(jìn)行判斷。以大于或等于5%細(xì)胞質(zhì)染色為陽性。

1.3統(tǒng)計學(xué)處理 采用SPSS13.0統(tǒng)計軟件進(jìn)行數(shù)據(jù)分析，應(yīng)用χ2檢驗分析Annexin A1表達(dá)與大腸癌臨床病理因素的相互關(guān)系，以P<0.05為差異有統(tǒng)計學(xué)意義。

2 結(jié) 果

2.1Annexin A1在大腸癌組織、癌旁組織及腺瘤性息肉組織的表達(dá) Annexin A1免疫組織化學(xué)陽性產(chǎn)物主要定位于細(xì)胞膜和細(xì)胞質(zhì)，部分患者可見胞核著色(圖1)。48例患者大腸癌組織中，Annexin A1陽性表達(dá)31例(64.6%)；36例患者癌旁組織中，Annexin A1陽性表達(dá)14例(38.8%)；15例患者腺瘤性息肉組織中，Annexin A1陽性表達(dá)6例(40.0%)；大腸癌組織中，Annexin A1的陽性表達(dá)率高于癌旁組織、腺瘤性息肉組織(P<0.05)。而Annexin A1陽性表達(dá)的癌旁組織、腺瘤性息肉組織均呈輕至重度不典型增生，且兩組間差異無統(tǒng)計學(xué)意義(P>0.05)。

圖1 Annexin A1蛋白在大腸癌組織中的表達(dá)(免疫組織化學(xué)×400)

2.2Annexin A1的表達(dá)與大腸癌臨床病理特征之間的關(guān)系 Annexin A1的表達(dá)與大腸癌的病理類型、腫瘤最大徑、有無淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移和周圍組織侵犯有關(guān)，其中高分化腺癌、腫瘤最大徑小于5 cm、淋巴結(jié)未轉(zhuǎn)移及未侵犯周圍組織器官的患者Annexin A1的陽性表達(dá)率均明顯低于中或低分化腺癌、腫瘤最大徑大于或等于5 cm、有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移及伴周圍組織器官侵犯的患者(P<0.05)；Annexin A1的表達(dá)與大腸癌患者的性別差異無統(tǒng)計學(xué)意義(P>0.05)。見表1。

表1 Annexin A1的表達(dá)與大腸癌臨床病理特征之間的關(guān)系(n)

3 討 論

大腸癌是常見的消化道惡性腫瘤，具有高復(fù)發(fā)和高轉(zhuǎn)移的特點。其5年總體生存率在60%左右，近年來發(fā)病率逐步上升，嚴(yán)重危害人民生活健康。目前對于大腸癌的發(fā)病及其轉(zhuǎn)移尚無有效的防治手段，其發(fā)病機(jī)制和防治依然是這一領(lǐng)域中的研究熱點。

Annexin家族是一類鈣依賴的磷脂結(jié)合蛋白，細(xì)胞中含量較高，參與細(xì)胞多種重要生理功能。Annexin A1是Anx家族的成員之一，是多種受體和酶的底物，如EGF受體、蛋白激酶C、酪氨酸蛋白激酶等[2]。Annexin A1參與了包括細(xì)胞信號傳導(dǎo)、炎性反應(yīng)、DNA修復(fù)和細(xì)胞凋亡等多種細(xì)胞生理病理過程[10]。腫瘤的發(fā)生和發(fā)展是一個多因素作用、多基因參與、經(jīng)過多階段形成的、極其復(fù)雜的生物學(xué)現(xiàn)象，信號傳導(dǎo)異常是腫瘤形成過程中的頻發(fā)事件，而Annexin A1在胞內(nèi)信號傳導(dǎo)中發(fā)揮重要作用，故其在腫瘤形成及發(fā)展中的作用日益受到人們的關(guān)注。

本研究利用免疫組織化學(xué)對癌旁組織、腺瘤性息肉組織及大腸癌組織中Annexin A1的表達(dá)水平進(jìn)行檢測，探討其在大腸癌發(fā)生、發(fā)展機(jī)制中的可能作用。研究結(jié)果顯示，大腸癌組織中Annexin A1的陽性表達(dá)率明顯高于癌旁組織、腺瘤性息肉組織；Annexin A1陽性表達(dá)的良性病變的黏膜上皮呈不同程度的不典型增生。高分化腺癌、腫瘤最大徑小于5 cm、無淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移及未侵犯周圍組織器官患者的Annexin A1陽性表達(dá)率均明顯低于中或低分化腺癌、腫瘤最大徑大于或等于5 cm、有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移及伴周圍組織器官侵犯患者。上述結(jié)果提示，大腸癌變過程中Annexin A1表達(dá)水平明顯上調(diào)，且其表達(dá)水平與大腸癌的發(fā)展、轉(zhuǎn)移及侵襲能力密切相關(guān)，陽性表達(dá)者進(jìn)展快，易發(fā)生轉(zhuǎn)移，侵襲能力強(qiáng)，說明Annexin A1表達(dá)水平可能是反映大腸癌發(fā)生、發(fā)展及臨床生物學(xué)行為的重要標(biāo)志物。同時檢測大腸良性病變組織中Annexin A1的表達(dá)水平可能對預(yù)防和早期發(fā)現(xiàn)大腸癌有重要臨床價值，但仍有待積累更多的病例進(jìn)行更深入的研究。

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