王志勇，顧桂蘭，李友建，姚揚美，金燦燦（揚州大學(xué)附屬泰興醫(yī)院檢驗科，江蘇泰興 225400）

胱抑素C存在于人體大多數(shù)體液中。由于它相對分子質(zhì)量低（13.3×103）和在生理pH值中帶正電的特性，可以自由地從腎小球完全濾過，在近端腎小管幾乎完全再吸收及分解，其濃度亦不受感染、肝臟疾病或免疫因素等影響，血液中胱抑素C濃度完全取決于腎小球濾過能力[1]。因此，許多研究認(rèn)為其可作為新的腎小球濾過率（GFR）評估指標(biāo)[2－3]。本研究參考美國臨床和實驗室標(biāo)準(zhǔn)委員會（CLSI）的EP－5A2（臨床化學(xué)設(shè)備精密度性能的評價）[4]，EP－6A（定量分析方法線性的評價）[5]，EP－9A2（用患者標(biāo)本的方法比較和偏差的估計）[6]評價方案對國產(chǎn)試劑結(jié)合日立7600全自動生化分析儀建立的檢測系統(tǒng)的分析性能進行了評價，并將其與進口檢測系統(tǒng)進行比對，現(xiàn)報道如下。

1 材料與方法

1.1 儀器與試劑 日立7600－020全自動生化分析儀購自日本日立公司；寧波美康胱抑素C檢測試劑盒（批號：20130312）及配套校準(zhǔn)品（批號：20130312）購自寧波美康公司；西門子BN PROSPEC全自動特定蛋白儀，西門子胱抑素C檢測試劑盒（批號：167845）及配套校準(zhǔn)品（批號：049858）均購自西門子公司。

1.2 方法 參照美國臨床與實驗室標(biāo)準(zhǔn)委員會系列評估方案EP－10A、EP－5A2、EP－6A，對試劑的不精密度、線性、檢測限進行評估，參照EP－9A2方案與西門子檢測系統(tǒng)進行比對。

1.2.1 不精密度 參考EP－5A2文件，采用國產(chǎn)試劑對低、中、高3份混合血漿，連續(xù)測定10d，每天測定兩批，批間間隔的時間不少于2h，每批對樣品做雙份測定，取均值，計算批內(nèi)、批間、天間及總不精密度。

1.2.2 線性分析 取異常高值混合血漿1份，正常值混合血漿1份，分別按1∶9、2∶8、3∶7、4∶6、5∶5、6∶4、7∶3、8∶2和9∶1混合，加上未混合的兩份標(biāo)本，共計11份，隨機排列，各檢測兩次。

1.2.3 最低檢測限 連續(xù)10d測定空白標(biāo)本，每天測定2次，測定結(jié)果的均值加3倍標(biāo)準(zhǔn)差即為最低檢測限。

1.2.4 穩(wěn)定性試驗 將試劑開瓶后放入4℃冰箱，每日取出進行標(biāo)本檢測，觀察其試劑穩(wěn)定性。

1.2.5 方法學(xué)比對 采用EP－9A2文件，西門子檢測系統(tǒng)和美康試劑－日立7600檢測系統(tǒng)分別作為比較方法和試驗方法，測定40例高、中、低值臨床標(biāo)本。每天測定8個標(biāo)本，連續(xù)5d。每個標(biāo)本重復(fù)測定2次，前后兩次按照相反的順序測定。每個標(biāo)本在2h內(nèi)完成試驗方法和比較方法的測定。

1.3 數(shù)據(jù)處理與統(tǒng)計學(xué)分析 數(shù)據(jù)處理采用Microsoft Excel2003及SPSS12.0統(tǒng)計分析軟件包處理。

1.3.1 不精密度 分別計算高、中、低濃度樣品測定結(jié)果的均值、標(biāo)準(zhǔn)差與變異系數(shù)（CV）及批內(nèi)、批間、天間及總不精密度，測量結(jié)果應(yīng)符合CLIA′88的規(guī)定。

1.3.2 線性 以理論濃度為縱坐標(biāo)，以測量均值為橫坐標(biāo)，計算兩組數(shù)據(jù)之間的相關(guān)性和線性方程的斜率和截距，相關(guān)系數(shù)應(yīng)r≥0.99，得到的線性回歸Y＝aX＋b中，若a接近于1，b接近于0，說明試劑的線性范圍較好，能滿足臨床要求，在線性范圍內(nèi)測定值和預(yù)期值相關(guān)性良好。

1.3.3 方法學(xué)比對 以待檢測系統(tǒng)測量數(shù)據(jù)（xi）為自變量，比較檢測系統(tǒng)測量數(shù)據(jù)（yi）為因變量求出線性回歸方程，計算線性相關(guān)系數(shù)（r）：

如果r≥0.975（或r2≥0.95），則認(rèn)為X范圍適合，數(shù)據(jù)滿足要求。在醫(yī)學(xué)決定水平，利用回歸方程計算預(yù)計偏差，預(yù)期偏差Bx＝a＋（b－1）X，相對偏差＝Bx／X，判斷相對偏差是否在規(guī)定范圍內(nèi)。

1.3.4 統(tǒng)計學(xué)處理 所有數(shù)據(jù)處理采用SPSS12.0統(tǒng)計分析軟件包處理。兩組數(shù)據(jù)之間比較采用t檢驗，以P＜0.05為差異有統(tǒng)計學(xué)意義。

2 結(jié) 果

2.1 不精密度 結(jié)果見表1。美康－日立7600檢測系統(tǒng)的批內(nèi)、批間、天間及總不精密度均小于8%。

表1 美康－日立7600檢測系統(tǒng)不精密度

2.2 線性分析 線性分析結(jié)果見圖1，美康－日立7600檢測系統(tǒng)在胱抑素C濃度為0.5～8.0mg／L時，檢測結(jié)果具有較為良好的線性關(guān)系。

2.3 最低檢測限 最低檢測限試驗結(jié)果0.02mg／L，SD 0.03mg／L，故其最低檢測限為0.11mg／L。

2.4 穩(wěn)定性試驗 將試劑開瓶后放置于4℃冰箱中每日取出檢測儲存的混合血漿1次，連做30d，結(jié)果表明30d內(nèi)，試劑穩(wěn)定性沒有發(fā)生明顯改變。

2.5 比對試驗 比對試驗結(jié)果見圖2，美康－日立檢測系統(tǒng)結(jié)果與西門子BN PRO SPEC系統(tǒng)檢測結(jié)果表明美康－日立檢測系統(tǒng)與進口檢測系統(tǒng)相關(guān)性較好，但美康－日立檢測系統(tǒng)檢測結(jié)果則比西門子檢測系統(tǒng)檢測結(jié)果偏高，比臨界值1.10mg／L處約高0.18mg／L，差異無統(tǒng)計學(xué)意義（P＞0.05）。相關(guān)方程為Y＝0.829 1X＋0.007 5，回歸系數(shù)r為0.9969，r2＝0.993 8。

圖1 美康－日立7600檢測系統(tǒng)線性分析結(jié)果

圖2 美康－日立檢測系統(tǒng)結(jié)果與西門子檢測系統(tǒng)結(jié)果間比對

3 討 論

血清胱抑素C檢測具有重要的臨床意義，越來越多的循證醫(yī)學(xué)證據(jù)證明，其在腎臟疾病的早期診斷、治療、預(yù)后判斷等諸多方面有較為廣泛的應(yīng)用[7－8]。目前，胱抑素C檢測進口試劑價格昂貴，限制了其在臨床的廣泛應(yīng)用，故胱抑素C檢測試劑的國產(chǎn)化顯得尤為必要，從而降低其檢測成本，適用于臨床推廣使用[9]。

胱抑素C檢測方法主要為顆粒增強免疫比濁法[10]，包括免疫透射比濁法（PETIA）和免疫散射比濁法（PENIA），PENIA需要特殊的儀器設(shè)備，而PETIA則可以直接在自動生化分析儀上進行。然而，膠乳增強透射比濁法有一定的缺陷：在自然條件下聚丙乙烯膠乳顆粒能夠自身凝集，而且膠乳球直徑越大，趨勢越明顯。由此帶來的共性問題是精密度相對較差，日間穩(wěn)定性不好，此外各種方法間的檢測偏差缺乏試驗證據(jù)[11]。對自建系統(tǒng)應(yīng)進行詳細(xì)論證與評估，以保障臨床檢驗結(jié)果的準(zhǔn)確性及各實驗室結(jié)果間的可比性[12]。因此，本研究對國產(chǎn)胱抑素C檢測試劑盒結(jié)合日立7600生化分析儀建立的檢測系統(tǒng)進行了標(biāo)準(zhǔn)化的檢驗性能評估。評估結(jié)果表明，以該國產(chǎn)胱抑素C檢測試劑盒建立的自建檢測系統(tǒng)、精密度、檢測限、線性和準(zhǔn)確度均與其說明書標(biāo)明的各指標(biāo)數(shù)據(jù)相符。比對結(jié)果表明，與進口檢測系統(tǒng)相關(guān)性較好，但檢測結(jié)果則比西門子檢測系統(tǒng)檢測結(jié)果偏高，比臨界值1.10mg／L處約高0.18 mg／L，盡管這種差異無統(tǒng)計學(xué)意義（P＞0.05），但這提示在臨床應(yīng)用該試劑盒結(jié)果例如估算GFR時應(yīng)注意這種差異，是否可以利用二者的相關(guān)方程進行結(jié)果間的換算，則需大標(biāo)本量研究?？傮w而言，該試劑盒結(jié)合日立7600生化分析儀建立的檢測系統(tǒng)檢驗性能良好，可以滿足臨床需要。

[1]農(nóng)世澤，班副植.胱抑素C在臨床各種腎病中的應(yīng)用價值[J].檢驗醫(yī)學(xué)與臨床，2013，10（7）：858－859.

[2]Zaffanello M，Brugnara M，F(xiàn)ranchini M，et al.Is serum procalcitonin able to predict long－term kidney morbidity from urinary tract infections in children[J].Clin Chem Lab Med，2008，46（10）：1358－1363.

[3]李平，蔡偉娟，張麗翠.胱抑素C尿素和肌酐在不同程度腎病中的臨床價值[J].檢驗醫(yī)學(xué)與臨床，2012，9（18）：2292－2293.

[4]CLSI.Evaluation of Precision Performance of Quantitative MeasurementMethods；Approved Guideline－Second.CLSI deeumont EP5－A2[S].Wayne，Pennsylvania，USA：CLSI，2002.

[5]CLSI.Evaluation of the Lineatity of Quantitative Analytical Methods：AStatistical Approach；Approved Guideline.CLSI document EP6－A[S].Wayne，Pennsylvania，USA：CLSI，2003.

[6]CLSI.Method Comparison and Bias Estimation Using Patient Samples；Approved Guideline.CLSl document EP9－A2[S].Wayne，Pennsylvania，USA：CLSI，2002.

[7]Spanaus KS，Kollerits B，Ritz E，et al.Serum creatinine，cystatin C，and beta－trace protein in diagnostic staging and predicting progression of primary nondiabetic chronic kidney disease[J].Clin Chem，2010，56（5）：740－749.

[8]Peralta CA，Shlipak MG，Judd S，et al.Detection of chronic kidney disease with creatinine，cystatin C，and urine albumin－to－creatinine ratio and association with progression to end－stage renal disease and mortality[J].JAMA，2011，305（15）：1545－1552.

[9]張勇建，朱瑞宗，楊占良，等.國內(nèi)廠家胱抑素C試劑的評價方法研究和結(jié)果分析[J].檢驗醫(yī)學(xué)與臨床，2012，9（11）：1293－1294.

[10]朱應(yīng)紅，陳敏，歐陽家樂.乳膠增強比濁法胱抑素C測定試劑的臨床應(yīng)用評價[J].檢驗醫(yī)學(xué)與臨床，2012，9（21）：2753－2754.

[11]李海霞，王學(xué)晶，徐國賓，等.兩種不同檢測系統(tǒng)測定半胱氨酸蛋白酶抑制劑C的方法學(xué)評價[J].中華檢驗醫(yī)學(xué)雜志，2009，30（11）：1284－1287.

[12]肖華勇，聶濱.不同廠家試劑盒檢測血清胱抑素C的性能比較[J].實用醫(yī)技雜志，2011，18（9）：905－907.