高小文，孔花娟，李 筱，李雄海，柏 瑩，陳文華（陜西省漢中市中心醫(yī)院檢驗(yàn)科 723000）

目前血清葡萄糖臨床實(shí)驗(yàn)室測定有3種方法[1]：己糖激酶法、葡萄糖氧化酶法和葡萄糖氧電極法。另外還有床邊式血糖儀[2]，在臨床科室血糖監(jiān)控中普遍應(yīng)用。己糖激酶法是葡萄糖測定的參考方法[3]，但成本較高，臨床實(shí)驗(yàn)室實(shí)際應(yīng)用較少。葡萄糖氧電極法是近年來應(yīng)用于臨床的快速檢測方法，自動化程度高，結(jié)果快速，需要特殊電極，成本較高，適合用于急診項(xiàng)目，是未來血糖檢測發(fā)展的方向，但實(shí)際應(yīng)用不多。葡萄糖氧化酶法特異性不高，但在臨床廣泛應(yīng)用于各診斷實(shí)驗(yàn)室，血清葡萄糖氧化酶法在終點(diǎn)法中具有鮮明的特點(diǎn)，能充分體現(xiàn)終點(diǎn)法全自動生化分析不同測量模式下的表現(xiàn)形式。然而各試劑供應(yīng)商給各級醫(yī)院提供的不同型號的全自動生化分析儀參數(shù)，普遍存在一些不合理的地方，加之設(shè)備廠家工程師對不同型號儀器參數(shù)設(shè)置也認(rèn)識不夠，導(dǎo)致儀器的某些參數(shù)設(shè)置形同虛設(shè)，起不到應(yīng)有的作用，給臨床個別標(biāo)本的分析帶來很大的誤差，目前這一方面的問題報(bào)道較少[4]。本文以參數(shù)設(shè)置具有合理性和代表性的島津CL－8000全自動生化分析儀為例，系統(tǒng)地分析了血清葡萄糖氧化酶雙試劑終點(diǎn)法各種參數(shù)設(shè)置模式的優(yōu)缺點(diǎn)，供臨床實(shí)驗(yàn)室人員參考。

1 材料與方法

1.1 樣品來源 選用當(dāng)天門診患者血糖值在7.0、19.2、24.2 mmol／L的樣品3份，在高值血清中加純品葡萄糖粉自制1份特高值樣品。

1.2 儀器與試劑 日本島津CL－8000全自動生化分析儀。上海科華公司生產(chǎn)的雙試劑葡萄糖氧化酶法試劑盒。

1.3 方法

1.3.1 設(shè)置島津CL－8000 5種模式相同的儀器參數(shù) 見表1。按表1所要求的不同條件，以每一個模式為一個測試項(xiàng)目，設(shè)置島津CL－8000生化分析儀的相關(guān)參數(shù)，5種模式相同的參數(shù)設(shè)置是：在Ready狀態(tài)下，進(jìn)入Environment中將Automatic Rerun／Adding選為On，即打開自動重做功能。在Ready狀態(tài)下，進(jìn)入Request將Automatic Rerun／Adding選中，此時(shí)凡符合自動重做條件的實(shí)驗(yàn)項(xiàng)目即執(zhí)行自動重做功能。在Ready狀態(tài)下，按照Parameter Test Master photometry選中項(xiàng)目GLU，進(jìn)入Detail設(shè)置好樣品類型，單位，小數(shù)點(diǎn)，方法類型，波長；再進(jìn)入Reagent Condition頁面進(jìn)行試劑量的設(shè)定；進(jìn)入Calibration頁面進(jìn)行標(biāo)準(zhǔn)位置，定標(biāo)類型等參數(shù)相關(guān)設(shè)定。然后進(jìn)入Sampling Condition頁面進(jìn)行樣品參數(shù)設(shè)定，在Sample vol 1中輸入4μL，2中輸入2μL；在Condition一欄中選中First Run，執(zhí)行1；選中Above V－Range執(zhí)行2；選中Super High執(zhí)行2；選中Over Absortance執(zhí)行2。再進(jìn)入Range：Limit Condition頁面進(jìn)行正常范圍，線性范圍，反應(yīng)方向等參數(shù)的設(shè)定，尤其在Technical Limit選項(xiàng)中先選中Above再在Limit輸入限定的最高吸光度值。

表1 島津CL－8000對葡萄糖的不同標(biāo)本處理分析

1.3.2 設(shè)置島津CL－8000 5種模式不同的儀器參數(shù) 模式1在Limit Condition頁面進(jìn)行線性范圍設(shè)置時(shí)，設(shè)為0～24；在Technical Limit選項(xiàng)中在Limit項(xiàng)中輸入限定的最高吸光度值為1 100mAbs。模式2僅在模式1的基礎(chǔ)上將反應(yīng)終點(diǎn)從33點(diǎn)延長到50點(diǎn)，使反應(yīng)達(dá)到充分完全。模式3在Limit Condition頁面進(jìn)行線性范圍設(shè)置時(shí)，設(shè)為試劑說明書提供的0～27.8的數(shù)據(jù)；在Technical Limit選項(xiàng)中在Limit項(xiàng)中輸入限定的最高吸光度值為2 500mAbs。另外在Sampling Condition頁面進(jìn)行樣品參數(shù)設(shè)定時(shí)，在Sample vol 1中輸入4μL，在Condition一欄中選中First Run，執(zhí)行1，其余不設(shè)置。模式4僅在模式1的基礎(chǔ)上在Technical Limit選項(xiàng)的Limit項(xiàng)中輸入限定的最高吸光度值為2 500mAbs，使線性范圍最高值24成為有效的限制參數(shù)。模式5在模式1的基礎(chǔ)上在Limit Condition頁面進(jìn)行線性范圍設(shè)置時(shí)，設(shè)為試劑說明書提供的0～27.8；使Limit項(xiàng)中輸入限定的最高吸光度值1 100mAbs為有效的限制參數(shù)。

1.3.3 用5種模式對4種不同的樣品進(jìn)行分析 將4種不同的樣品放置在樣品盤上，對每一份樣品均采用以上5種模式進(jìn)行分析，直到樣品狀態(tài)顯示完成為止。每一份樣品重復(fù)測3次，結(jié)果取均值。

2 結(jié) 果

2.1 對自制特高值血清標(biāo)本，觀察和評價(jià)5種模式具體的數(shù)據(jù)和反應(yīng)曲線，結(jié)果見表2。模式1、4、5的限制參數(shù)均發(fā)揮作用，提示出超限，并執(zhí)行2的減量測定，結(jié)果理想，同時(shí)各種模式對此標(biāo)本均表現(xiàn)出底物耗盡現(xiàn)象，但模式2和模式3未發(fā)現(xiàn)和提示出此種現(xiàn)象，存在參數(shù)缺陷，實(shí)際測定數(shù)據(jù)誤差也較大。

表2 不同模式對特高濃度血糖測定的結(jié)果（mmol／L）

2.2 選出血糖值在7.0、19.2、24.2mmol／L水平的樣品3份，每一份樣品重復(fù)測3次，測試結(jié)果取均值見表3。數(shù)據(jù)顯示7.0mmol／L和19.2mmol／L的標(biāo)本5種模式均能準(zhǔn)確測定。24.2mmol／L標(biāo)本模式3存在參數(shù)缺陷，導(dǎo)致結(jié)果誤差較大。

表3 不同模式對不同濃度血糖測定的結(jié)果（mmol／L）

3 討 論

目前臨床生化檢驗(yàn)自動化程度越來越高，幾乎全部采用各試劑廠家的成品試劑，但是我國體外診斷試劑的現(xiàn)狀與國際上相比，無論質(zhì)量還是監(jiān)管都有一定的差距[5]，提供的實(shí)驗(yàn)參數(shù)缺乏科學(xué)性，如焦連亭[6]報(bào)道的如果對分析化學(xué)、酶動力學(xué)和對儀器性能沒有一定的掌握，是很難設(shè)置好參數(shù)的。要根據(jù)各實(shí)驗(yàn)項(xiàng)目在臨床上的具體情況，各種儀器的性能特點(diǎn)，合理設(shè)置。這就要求設(shè)備廠家工程師對設(shè)備的各種參數(shù)和性能必須熟悉，并得到恰當(dāng)?shù)膽?yīng)用。同時(shí)試劑廠家對所生產(chǎn)的試劑一定要作出科學(xué)的評價(jià)，尤其是試劑吸光度A值的最低和最高檢測限額以及空白A值、線性范圍等限制參數(shù)必須與實(shí)際情況相符。

在儀器方面，有些儀器為了提高檢測速度，樣品在第一次加樣后即退出軌道，僅對結(jié)果的高值和超限提出報(bào)警，由實(shí)驗(yàn)人員對標(biāo)本進(jìn)行稀釋重測。有些儀器考慮到標(biāo)本的稀釋重做，采用圓盤式樣品加樣，同時(shí)增設(shè)自動稀釋重做功能，能很好地完成對每一份樣品的測定，具有代表性的就是日立和島津系列。

在終點(diǎn)法的設(shè)置時(shí)，有些項(xiàng)目反應(yīng)很快達(dá)到終點(diǎn)，顯色穩(wěn)定。比如三酰甘油、總膽固醇、尿酸等，可以縮短讀點(diǎn)。但有的項(xiàng)目反應(yīng)慢，在儀器的一般設(shè)定時(shí)間內(nèi)，達(dá)不到終點(diǎn)，特高值樣品顯色后又不穩(wěn)定，表現(xiàn)出底物耗盡現(xiàn)象。對此類試驗(yàn)一方面除盡可能地延長反應(yīng)時(shí)間，讓反應(yīng)達(dá)到完全外[7]，還應(yīng)注意到底物耗盡的現(xiàn)象，尤其以葡萄糖氧化酶法測定最具代表性。越是特高值的樣品，底物耗盡現(xiàn)象引入的誤差越大，此種情況在糖耐量實(shí)驗(yàn)中表現(xiàn)最為突出。也有對葡萄糖氧化酶法一點(diǎn)終點(diǎn)法進(jìn)行改良的報(bào)道[8]，即在不改變樣品與試劑比例的前提下，將樣品與試劑各減半混合，在儀器測光前（終點(diǎn)前）加入等量的水稀釋混勻，再測定其吸光度。測定線性范圍較寬，一般不需對高濃度標(biāo)本進(jìn)行稀釋。還有將終點(diǎn)法改良為兩點(diǎn)法的報(bào)道[9]。

本組研究設(shè)置模式2，以實(shí)現(xiàn)延長反應(yīng)時(shí)間，使反應(yīng)達(dá)到終點(diǎn)的目的，同時(shí)對線性高值和吸光度A值最高限額進(jìn)行了有效限制。對正常標(biāo)本和稍高值的標(biāo)本效果很好，但在對特高值樣品測定時(shí)，發(fā)現(xiàn)反應(yīng)曲線呈拋物線狀降低，表現(xiàn)出底物耗盡的現(xiàn)象，并引入較大的誤差，應(yīng)引起同行的重視。在本研究設(shè)置的模式4中單獨(dú)對線性高值進(jìn)行了有效限制，使超出線性范圍的標(biāo)本均起到了報(bào)警和自動減量重做的作用，結(jié)果的準(zhǔn)確性得到了保證。在設(shè)置的模式5中單獨(dú)對吸光度A值最高限額進(jìn)行了有效限制，同樣對超限標(biāo)本均起到了報(bào)警和自動減量重做，進(jìn)一步驗(yàn)證了在日常工作中采用的模式1的科學(xué)性和正確性。模式1也是目前作者認(rèn)為在實(shí)際應(yīng)用中最為理想的分析模式，它充分利用了有效的線性限制和吸光度A值最高限額，對不同濃度的標(biāo)本均能實(shí)現(xiàn)準(zhǔn)確測定。對于模式3設(shè)置的線性限制和吸光度A值最高限額，均未起到任何限制作用，從本次葡萄糖氧化酶法結(jié)果分析，反映出試劑廠家提供的線性范圍為27.8mmol／L，而實(shí)際在24.5mmol／L左右已達(dá)到線性極限，同時(shí)試劑廠家提供的吸光度A值最高檢測限額ABS＝2 500mAbs，在CL－8000上僅測到1 300～1 400mAbs，導(dǎo)致模式3所設(shè)置的限制參數(shù)起不到任何作用，給高值樣品的檢測帶來很大的偏差[10]。這種模式個別工程師經(jīng)常用，應(yīng)引起注意。

因此要求廣大的臨床檢驗(yàn)人員，在實(shí)際工作中不要一味依賴廠家提供的各種參數(shù)，要正確分析，合理利用廠家提供的限制參數(shù)和試劑比例[11]，注意一些干擾因素[12]，確保對各種標(biāo)本分析結(jié)果的準(zhǔn)確性。

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