孫冬梅汪夢(mèng)霞董玉娟

（1廣東省中醫(yī)藥工程技術(shù)研究院，廣州，510095；2廣州中醫(yī)藥大學(xué)，廣州，510405）

中藥研究

川貝止咳合劑質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)研究

孫冬梅1汪夢(mèng)霞2董玉娟2

（1廣東省中醫(yī)藥工程技術(shù)研究院，廣州，510095；2廣州中醫(yī)藥大學(xué)，廣州，510405）

目的：建立川貝止咳合劑的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)控制方法。方法：采用薄層色譜（TLC）法對(duì)方中所含枳殼、桔梗進(jìn)行定性鑒別；采用高效液相色譜法測(cè)定方中柚皮苷的含量。結(jié)果：薄層色譜法可鑒別出枳殼、桔梗，且陰性無(wú)干擾；柚皮苷在160～800 ng范圍內(nèi)呈良好線性關(guān)系，r＝0.999 9，平均回收率為98.90%，RSD＝1.32%。結(jié)論：本方法操作簡(jiǎn)便、準(zhǔn)確可靠、重現(xiàn)性好，可作為川貝止咳合劑的質(zhì)量控制方法。

川貝止咳合劑；薄層色譜法；高效液相色譜法；質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)；柚皮苷

川貝止咳合劑由枳殼、桔梗、川貝、枇杷等中藥組成，具有祛痰止咳、散結(jié)利咽等功效。適用于感冒、急慢性咽喉炎、急慢性支氣管炎引起的咳嗽、咽痛。為了更好地控制其質(zhì)量，保證其臨床療效，本實(shí)驗(yàn)采用TLC法對(duì)其中所含枳殼、桔梗進(jìn)行定性鑒別，采用HPLC法對(duì)方中所含柚皮苷進(jìn)行含量測(cè)定。

1 儀器與試藥

1.1 儀器 BQ-Ⅱ型薄層自動(dòng)鋪板器（重慶南岸實(shí)驗(yàn)電器廠）；CAMAG TLC SAMPLER 4型薄層色譜自動(dòng)點(diǎn)樣儀（瑞士）；CAMAG Reprostar 4薄層成像系統(tǒng)（瑞士）；Agilent1200高效液相色譜儀（美國(guó)）；DAD檢測(cè)器；四元梯度泵，G2170AA數(shù)據(jù)處理軟件系統(tǒng)；Agilent TC C18色譜柱（4.6 mm×250 mm，5μm）；MettlerXS205DU電子分析天平（瑞士）；KQ5200DE型數(shù)控超聲波清洗器（昆山）；電熱恒溫水浴槽（上海）；DHG -9070A型電熱恒溫鼓風(fēng)干燥箱（上海）；美國(guó)Bedford公司Milli-Q超純水制備儀。

1.2 試藥 枳殼對(duì)照藥材（批號(hào)130807～201209）、桔梗對(duì)照藥材（批號(hào)130574～200809）、柚皮苷對(duì)照品（批號(hào)120736～201135）均購(gòu)于中國(guó)藥品生物制品檢定所；川貝止咳合劑（批號(hào)140318、140319、140320），由廣東省第二中醫(yī)院制劑室提供）乙腈為色譜純，水為超純水，其他試劑均為分析純。

2 薄層色譜定性鑒別

2.1 枳殼定性鑒別 取本品100 m L，以4.3%NaOH試液調(diào)pH值到10，用乙酸乙酯振搖提取兩次，每次80 mL，合并乙酸乙酯液，蒸干，殘?jiān)蛹状? mL使溶解，作為川貝止咳合劑樣品溶液。另取枳殼對(duì)照藥材0.5 g，加95%乙醇25 mL，超聲處理30 min，濾過(guò)，濾液蒸干，殘?jiān)蛹状? mL使溶液，作為枳殼對(duì)照藥材溶液。再取缺枳殼的陰性溶液100 mL，按樣品溶液制備方法制成枳殼陰性對(duì)照溶液。根據(jù)薄層色譜法（《中華人民共和國(guó)藥典》2010年一部附錄VIB）試驗(yàn)，分別吸取上述枳殼陰性對(duì)照溶液、枳殼對(duì)照藥材溶液、川貝止咳合劑樣品溶液各10μL點(diǎn)于同一硅膠G-1%羧甲基纖維素鈉薄層板上，以氯仿-丙酮（2∶1）為展開(kāi)劑，展開(kāi)，取出，晾干，置紫外燈（365nm）下觀察。川貝止咳合劑樣品色譜中，在與枳殼對(duì)照藥材色譜相應(yīng)位置顯相同顏色斑點(diǎn)，且陰性對(duì)照無(wú)干擾（見(jiàn)圖1）。

圖1 枳殼TLC圖譜

2.2 桔梗定性鑒別［1］取本品10 m L，加稀鹽酸3 mL，回流45 min，放冷，濾過(guò)，濾液，用氯仿振搖萃取兩次，1次20 mL，合并氯仿液，蒸干，加甲醇1 mL使殘?jiān)芙?，作為川貝止咳合劑樣品溶液。另取桔梗?duì)照藥材1 g，加水10 mL，稀鹽酸3 m L，回流45 min，放冷，濾過(guò)，濾液，用氯仿振搖萃取兩次，1次20 mL，合并氯仿液，蒸干，加甲醇1 mL使殘?jiān)芙猓鳛榻酃?duì)照藥材溶液。再取缺桔梗的陰性溶液10 mL，按川貝止咳合劑樣品溶液制備方法制成桔梗陰性對(duì)照溶液。根據(jù)薄層色譜法（《中華人民共和國(guó)藥典》2010年版一部附錄VIB）試驗(yàn)，吸取桔梗陰性對(duì)照溶液2μL，桔梗對(duì)照藥材溶液4μL，川貝止咳合劑樣品溶液2μL，分別點(diǎn)于同一硅膠GF254-1%羧甲基纖維素鈉薄層板上，以氯仿-乙醚（1∶1）為展開(kāi)劑，展開(kāi)，取出，晾干，置紫外燈（254 nm）下觀察。川貝止咳合劑樣品色譜中，在與桔梗對(duì)照藥材色譜相應(yīng)位置顯相同顏色斑點(diǎn)，且陰性對(duì)照無(wú)干擾（見(jiàn)圖2）。

3 含量測(cè)定［2］

3.1 色譜條件 以C18為填充劑；流動(dòng)相：甲基腈-水（20∶80）（用磷酸調(diào)節(jié)pH值至3）；檢測(cè)波長(zhǎng)：283nm；流速：1 mL/min；柱溫：25℃。按柚皮苷峰計(jì)算理論塔板數(shù)應(yīng)不＜3000。

3.2 制備對(duì)照品溶液 精密稱取柚皮苷對(duì)照品適量，加甲醇分別制成每1 mL含柚皮苷80μg的溶液，即得。

3.3 制備供試品溶液和陰性供試品溶液 精密稱取本品約0.2 g，裝入具塞錐形瓶中，精密加入甲醇50 mL，稱定重量，加熱回流1.5 h，放冷，重新稱定重量，減失的重量用甲醇補(bǔ)足，搖勻，濾過(guò)。精密量取續(xù)濾液10 m L，置25 mL量瓶中，加甲醇至刻度，搖勻，即得。同法制備陰性供試品溶液。

圖2 桔梗TLC圖譜

3.4 方法學(xué)考察

3.4.1 陰性干擾試驗(yàn) 分別吸取陰性供試品溶液、柚皮苷對(duì)照品溶液、供試品溶液各10μL于高效液相色譜儀中進(jìn)行試分離，樣品與對(duì)照品在相同位置有較大吸收，陰性對(duì)照無(wú)干擾。見(jiàn)圖3～5。

圖3 柚皮苷對(duì)照品溶液色譜圖

圖4 供試品溶液色譜圖

圖5 柚皮苷陰性供試品溶液色譜圖

3.4.2 線性范圍考察 精密吸取柚皮苷對(duì)照品溶液2、4、6、8、10 mL，置10 m L容量瓶中，加甲醇稀釋定容至刻度線，搖勻，制成濃度分別為16、32、48、64、80μg/mL的對(duì)照品溶液。精密吸取上述對(duì)照品溶液各10 μL，分別注入液相色譜儀，記錄色譜圖。以柚皮苷對(duì)照品進(jìn)樣量（X，μg）為橫坐標(biāo)，對(duì)照品峰面積（Y）為縱坐標(biāo)，進(jìn)行線性回歸，得回歸方程為Y＝30.7186X-1.5065（r＝0.999 9），結(jié)果表明柚皮苷進(jìn)樣量在160～800 ng范圍內(nèi)與峰面積積分值線性關(guān)系良好。

3.4.3 精密度考察 精密稱取同一個(gè)批號(hào)的川貝止咳合劑（130318）樣品約0.2 g，依法制備供試品溶液，精密吸取10μL，注入高效液相色譜儀，重復(fù)測(cè)定6次，以峰面積計(jì)算，RSD為0.32%，表明儀器精密度好。

3.4.4 重現(xiàn)性試驗(yàn) 取同一批樣品（批號(hào)130318）6份，按上述供試品溶液方法和色譜條件測(cè)定，結(jié)果柚皮苷平均含量為44.18 mg/g，RSD為1.29%，表明該方法重現(xiàn)性好。

3.4.5 穩(wěn)定性試驗(yàn) 取同一供試品溶液，分別在0、2、4、6、8、12 h進(jìn)樣10μL，按上述色譜條件測(cè)定峰面積，結(jié)果柚皮苷峰面積RSD為0.34%，表明供試品溶液在12 h內(nèi)穩(wěn)定性良好。

3.4.6 加樣回收試 按加樣回收率實(shí)驗(yàn)要求，精密稱取已知含量的川貝止咳合劑樣品（批號(hào)130318）約0.1 g，共9份，分別加入一定量的柚皮苷對(duì)照品，依法制備供試品溶液，精密吸取10μL，注入高效液相色譜儀中，測(cè)定，計(jì)算，結(jié)果見(jiàn)表1。

表1 加樣回收率實(shí)驗(yàn)結(jié)果（n＝9）

3.4.7 樣品含量測(cè)定 取三批樣品（批號(hào)130318、130319、130320）約1 g，精密稱定，按上述供試品溶液處理方法制備供試品溶液，分別精密吸取對(duì)照品溶液和供試品溶液各10μL，注入液相色譜儀，按上述色譜條件測(cè)定，以外標(biāo)法計(jì)算含量，三批樣品測(cè)定結(jié)果，見(jiàn)表2。

表2 樣品含量測(cè)定結(jié)果（n＝3）

4 討論

在枳殼的薄層鑒別中，按藥典［2］方法，供試品，對(duì)照品，陰性溶液用甲醇處理，以三氯甲烷-甲醇-水（13∶6∶2）下層溶液為展開(kāi)劑，供試品與對(duì)照品相應(yīng)位置上未見(jiàn)相同顏色的斑點(diǎn)。文獻(xiàn)報(bào)道枳殼薄層色譜法［3-4］，按本文方法處理，供試品與對(duì)照品相應(yīng)位置上顯相同顏色的斑點(diǎn)，且陰性無(wú)干擾。

在桔梗的薄層鑒別中，按藥典［5］方法，供試品，對(duì)照品，陰性溶液用7%硫酸乙醇-水（1∶3）混合溶液，三氯甲烷處理，以三氯甲烷-乙醚（2∶1）為展開(kāi)劑，供試品與對(duì)照品相應(yīng)位置上未見(jiàn)相同顏色的斑點(diǎn)。文獻(xiàn)報(bào)道桔梗薄層色譜法［6-7］按本文［1］方法處理，供試品與對(duì)照品相應(yīng)位置上顯相同顏色的斑點(diǎn)，且陰性無(wú)干擾。

枳殼為本制劑君藥，柚皮苷為枳殼主要成分，故選擇柚皮苷作控制本品質(zhì)量的指標(biāo)成分。含枳殼的中藥復(fù)方制劑中柚皮苷的含量測(cè)定，文獻(xiàn)報(bào)道高效液相色譜法［8-10］。柚皮苷含量測(cè)定方法，參照2010版《中華人民共和國(guó)藥典》一部枳殼含量測(cè)定項(xiàng)下方法，結(jié)果柚皮苷分離較好，保留時(shí)間適宜，通過(guò)方法學(xué)考察，本方法準(zhǔn)確、可靠，可作為川貝止咳合劑的含量測(cè)定方法。本文所建立的方法操作簡(jiǎn)便、準(zhǔn)確可靠、重現(xiàn)性好，可作為川貝止咳合劑的質(zhì)量控制方法。

［1］毛丹，許勇，陸繼偉，等.季申復(fù)方桔梗麻黃堿糖漿質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)研究［J］.中成藥，2012，34（8）：1518-1522.

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（2014-07-11收稿 責(zé)任編輯：曹柏）

Study on Quality Standard of Chuanbeizhike M ixture

Sun Dongmei1，Wang Mengxia2，Dong Yujuan2
（1 Guangdong Research Institute of Traditional Chinese MedicineManufacturing Technology，Guangzhou 510095，China；2 Guangzhou University of Chinese Medicine，Guangzhou 510405，China）

Objective：To establish the quality standard of Chuanbeizhikemixture.Methods：Thin layer chromatography（TLC）wasused to identify Fructus Aurantii，Radix Platycodonis in Chuanbeizhike Mixture.Naringin in Fructus Aurantiiwas determined by high performance liquid chromatography（HPLC）.Results：The TLC spots of Fructus Aurantiiand Radix Platycodoniswere clearwith good resolution and free of interference of negative samples.The calibration curve of HPLCwas linear in the range of160～800ng（r＝0.999 9）. The average recovery rate was98.90%，RSD＝1.32%.Conclusion：Themethod is rapid，curate，sensitive and reliable，and it can be used to control the quality of Chuanbeizhike Mixture.

Chuanbeizhike Mixture；TLC；HPLC；Quality standard；Naringin

R284

A

10.3969/j.issn.1673-7202.2014.10.030

孫冬梅（1969—）碩士，主任中藥師，主要從事中藥質(zhì)量評(píng)價(jià)研究，Tel：（020）83482683，E-mail：wmxyong＠126.com