張學(xué)敏

山西煤炭中心醫(yī)院呼吸內(nèi)科，山西 太原 030006

CD4+CD25+Foxp3+細(xì)胞在哮喘大鼠發(fā)病的作用

張學(xué)敏

山西煤炭中心醫(yī)院呼吸內(nèi)科，山西 太原 030006

目的觀察在哮喘大鼠中CD4+CD25+調(diào)節(jié)性T細(xì)胞Foxp3表達(dá)的變化，分析支氣管哮喘的發(fā)病機(jī)制，并為臨床的治療提供新方向。方法隨機(jī)將16只雄性的Wistar大鼠分為正常對(duì)照組和哮喘組，每組各8只。哮喘組：用卵白蛋白（OVA）使大鼠致敏，并予以霧化吸入刺激；正常對(duì)照組：等量生理鹽水處理。最后一次激發(fā)后，采用HE染色評(píng)價(jià)大鼠肺組織病理形態(tài)學(xué)改變；免疫組化染色分析Foxp3表達(dá)量；ELISA法測(cè)定肺泡灌洗液（BALF）IL-4及IFN-γ水平。結(jié)果哮喘組BALF中細(xì)胞因子IL-4明顯高于鹽水對(duì)照組，IFN-γ含量也升高，但I(xiàn)FN-γ/IL-4水平下降，即IFN-γ相對(duì)不足；哮喘組肺組織內(nèi)Foxp3明顯增高，說明體內(nèi)CD4+CD25+調(diào)節(jié)性T細(xì)胞在哮喘發(fā)作時(shí)出現(xiàn)異常分布的現(xiàn)象。結(jié)論CD4、CD25和Foxp3+三者共同調(diào)節(jié)性T細(xì)胞，與支氣管哮喘的發(fā)病機(jī)制密切相關(guān)，并打破Th1/Th2原有的平衡機(jī)制。

Foxp3；T細(xì)胞；支氣管哮喘

近幾年，研究表明在維持機(jī)體免疫穩(wěn)態(tài)及抑制炎癥方面，T細(xì)胞的調(diào)節(jié)起重要作用，與哮喘氣道炎癥的發(fā)生相關(guān)密切。

1 材料和方法

1.1 材料

山西醫(yī)科大學(xué)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心提供健康的Wistar大鼠16只，均為雄性。將動(dòng)物隨機(jī)分為正常對(duì)照組和哮喘模型組，每組各8只。羅氏公司的卵蛋白卵白蛋白，北京天壇生物制藥研究所的滅活過的百日咳桿菌疫苗，天津三廠的氫氧化鋁粉。

1.2 實(shí)驗(yàn)方法

正常對(duì)照組：從第1～14 d內(nèi)，每隔7 d對(duì)大鼠予以腹腔注射1 ml生理鹽水；14 d后，予以霧化治療，每天吸入1次生理鹽水，30 min/次，共7 d。

哮喘組［1］：從第1～14 d內(nèi)，每隔7 d對(duì)大鼠進(jìn)行腹腔注射1 ml抗原液；14 d后以，每日霧化吸入1次1%OVA生理鹽水液進(jìn)行激發(fā)，30 min/次，連續(xù)7 d。

觀察給藥期間兩組大鼠的各種反應(yīng)，陽性：呼吸急促，躁動(dòng)不安，腹肌抽搐等；陰性：沒有上述反應(yīng)，行動(dòng)如常。

標(biāo)本采集：取下每只大鼠的左肺，分別給予以下操作：甲醛固定，石蠟包埋、切片，對(duì)切片分別進(jìn)行HE染色和Foxp3試劑免疫組化染色，觀察其Foxp3表達(dá)的情況。

灌洗液的采集：夾閉左主支氣管，對(duì)每只大鼠的右肺予以3次的冰鹽水灌洗，灌洗量分別以3 ml、3 ml、和4 ml，最后收集灌洗液，進(jìn)行1500轉(zhuǎn)的10 min離心，收集上清液并進(jìn)行ELISA法檢測(cè)，測(cè)定IFN-γ、IL-4的含量。

1.3 統(tǒng)計(jì)學(xué)分析

所有研究數(shù)據(jù)均采用SPSS 13.0統(tǒng)計(jì)學(xué)軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析，差異顯著，有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）。

2 結(jié)果與分析

哮喘模型的大鼠的肺組織發(fā)生了病理形態(tài)的改變。光鏡下觀察兩組大鼠的染色標(biāo)本發(fā)現(xiàn)，在哮喘組大鼠的肺組織內(nèi)出現(xiàn)較多的支氣管腔粘液。部分支氣管呈花瓣?duì)?。而正常?duì)照組的大鼠肺組織其形態(tài)基本正常。

哮喘大鼠支氣管肺泡灌洗液（BALF）Th1/Th2因子含量，見表1。

肺泡灌洗液（BALF）Th1/Th2因子結(jié)果顯示：哮喘大鼠肺泡灌洗液中IL-4及IFN-γ均較正常組高（P＜0.001）。但由IFN-γ增高的幅度明顯小于IL-4，即IFN-γ/IL-4比值明顯下降表現(xiàn)為Th2優(yōu)勢(shì)。

哮喘大鼠肺組織Foxp3表達(dá)，見表2。

表1 兩組大鼠BALF液Th1/Th2因子含量（）pg/ml

表1 兩組大鼠BALF液Th1/Th2因子含量（）pg/ml

注：與哮喘組比較*P＜0.001；與正常組比較▲P＜0.001

組別 例數(shù) IFN-γ IL-4正常對(duì)照組 8 10.84±2.81* 17.67±3.53▲哮喘組 8 14.53±3.35* 71.05±3.91▲

表2 兩組大鼠肺組織Foxp3表達(dá)比較（x-±s）

3 討論

作為氣道慢性炎癥中的支氣管哮喘，有多種細(xì)胞發(fā)生浸潤現(xiàn)象，其發(fā)生與多種炎癥因子有關(guān)。Th2細(xì)胞產(chǎn)生大量IL-4，在支氣管哮喘發(fā)生的各環(huán)節(jié)中均起重要作用。IFN-γ是活化Th1細(xì)胞分泌的最主要的細(xì)胞因子，具有使致敏小鼠血漿內(nèi)的IgE水平和氣道高反應(yīng)性降低，并使BALF中的浸潤細(xì)胞數(shù)量不斷減少。同時(shí)，IFN-γ對(duì)IL-4產(chǎn)生拮抗作用，減弱體內(nèi)IgE的生成。此外，IFNγ對(duì)EOS的聚集有強(qiáng)烈的抑制作用，增強(qiáng)EOS的活化能力，并降低分化的GM-CSF水平。本實(shí)驗(yàn)通過測(cè)定哮喘BALF中細(xì)胞因子IL-4，INF-γ含量變化，表明哮喘組BALF中細(xì)胞因子IL-4明顯高于鹽水對(duì)照組，IFN-γ含量也升高，但是IFN-γ與IL-4的比值呈下降趨勢(shì)，說明IFN-γ是呈相對(duì)不足的狀態(tài)。

CD4+CD25+T三者接觸抗原并產(chǎn)生刺激，從全身聚集到氣道，導(dǎo)致Th1/Th2失去平衡，最終引發(fā)了氣道的慢性非特異性炎癥。羅征秀等［2］報(bào)道對(duì)比CD4+CD25+T的調(diào)控功能發(fā)現(xiàn)，Th1比Th2容易被調(diào)控，說明CD4+CD25+T可能是通過對(duì)氣道的Th1細(xì)胞發(fā)揮抑制功能，最終促使Th2細(xì)胞發(fā)生分化過度現(xiàn)象。

綜上，在支氣管哮喘的發(fā)病機(jī)制中，CD4+CD25+調(diào)節(jié)性T細(xì)胞具有重要地位，CD4+CD25+調(diào)節(jié)性T細(xì)胞可打破h1/ Th2的平衡狀態(tài)，使局部的炎癥細(xì)胞發(fā)生浸潤，最終致使氣道的慢性非特異性炎癥的發(fā)生；其與肺組織內(nèi)TGF-β的高表達(dá)密切相關(guān)，可使氣道發(fā)生重塑，并與哮喘慢性氣道粘膜的改變密不可分。

［1］呂國平，崔德健，郭英江，等．介紹一種建立大鼠哮喘模型的實(shí)驗(yàn)方法［J］．中華結(jié)核和呼吸雜志，1995，18（6）：377．

［2］羅征秀，劉恩梅，鄧兵，等．Foxp3表達(dá)與CD4+CD25+調(diào)節(jié)性T細(xì)胞在兒童哮喘發(fā)病中的作用［J］．中華兒科雜志，2006，44（4）：267-271．

R562.25

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1674-9316（2014）16-0002-02

10.3969/J.ISSN.1674-9316.2014.16.002