夏蜀珺，郭俊超，李 建，周 立，趙玉沛

中國醫(yī)學(xué)科學(xué)院 北京協(xié)和醫(yī)學(xué)院 北京協(xié)和醫(yī)院基本外科， 北京 100730

·綜 述·

MicroRNAs在胰腺癌早期診斷中的應(yīng)用

夏蜀珺，郭俊超，李 建，周 立，趙玉沛

中國醫(yī)學(xué)科學(xué)院 北京協(xié)和醫(yī)學(xué)院 北京協(xié)和醫(yī)院基本外科， 北京 100730

胰腺癌；microRNA；早期診斷

胰腺癌起病隱匿，進展迅速，預(yù)后極差，大多數(shù)胰腺癌患者出現(xiàn)癥狀時已屬晚期，失去了手術(shù)根治的機會，其死亡率位居惡性腫瘤的第4位，術(shù)后總體5年生存率不超過5%。然而早期胰腺癌的治療效果卻非常好，術(shù)后5年生存率最多可達100%。但由于胰腺癌生物學(xué)特性尚不清楚，目前醫(yī)學(xué)界尚缺乏較為特異的胰腺癌早期篩查手段，傳統(tǒng)的輔助檢查，如增強CT/磁共振成像，血清標志物癌抗原(cancer antigen，CA)19- 9、CA242、癌胚抗原(carcinoembryonic antigen，CEA)、甲胎蛋白(α-fetoprotein，AFP)及K-ras突變等并不能在早期診斷中起到很大作用。為了進一步提高手術(shù)切除率，提高總體治療效果及改善遠期預(yù)后，胰腺癌的早期診斷顯得尤為重要，因此尋找胰腺癌的早期診斷方法成為當(dāng)今研究的一大熱點。

胰腺癌被認為是一種基因疾病，胰腺癌的發(fā)生伴隨著原癌基因的突變和抑癌基因的失活。胰腺上皮內(nèi)瘤變(pancreatic intraepithelial neoplasia，PanIN)為最常見的胰腺癌前體病變，在PanIN- 1可發(fā)現(xiàn)端粒的耗損及KRAS2基因的失活，PanIN- 3或浸潤癌中可見BRCA2的突變或間皮素的表達[1]。然而，microRNA(miRNA)在腫瘤發(fā)生網(wǎng)絡(luò)中的作用越來越受到大家的重視[2]，包括參與基因的靶向調(diào)節(jié)、表觀調(diào)控、轉(zhuǎn)錄因子調(diào)控等。miRNA是一類廣泛存在于真核生物中的具有調(diào)控功能的非編碼小分子RNA，含有約18～22個核苷酸。miRNA的歷史可追溯到1997年，Lee等[3]首先發(fā)現(xiàn)了一種長度極小、不編碼任何蛋白質(zhì)的基因lin4。其后，Pasquinelli等[4]發(fā)現(xiàn)第二個miRNA let- 7，從此掀起了miRNA的研究熱潮。miRNA的功能類似于siRNA，文獻報道，RNA誘導(dǎo)沉默復(fù)合體(RNA-induced silencing complex，RISC)也參與了siRNA的干擾過程[5]。miRNA的5′端有一個含有2～8個核苷酸的種子區(qū)[6]，此區(qū)域與靶mRNA位點的完美互補決定翻譯抑制功能[7]。

目前許多研究證實了miRNAs與胰腺腫瘤發(fā)生的相關(guān)性，并且發(fā)現(xiàn)miRNAs在不同階段腫瘤中的表達有顯著差異。miRNAs表達的組織特異性，是其成為診斷性生物標志物的前提。Roldo等[8]研究顯示miR- 103和miR- 107的上調(diào)表達和miR- 155的下調(diào)表達可鑒別胰腺癌和正常胰腺組織，miR- 21的高表達與胰腺癌Ki67的高度表達指數(shù)及肝轉(zhuǎn)移密切相關(guān)。Wan等[9]對搜集的9項研究資料進行了meta分析，發(fā)現(xiàn)miRNAs診斷胰腺癌的敏感性達到89%，特異性達到93%。miRNAs在早期胰腺癌中的研究也有不少報道。Habbe等[10]利用實時定量多聚酶鏈反應(yīng)(quantitative real-time polymerase chain reaction，qRT-PCR)的方法在15例導(dǎo)管內(nèi)乳頭狀黏液瘤(intraductal papillary mucinous neoplasm，IPMN)中檢測了12種胰腺癌高表達miRNAs的表達情況，并用鎖核酸原位雜交法(locked nucleic acid-in situ hybridizations，LNA-ISH)將過表達的miRNA- 155及miRNA- 21在64例IPMN患者胰腺組織中進行驗證，同時在10例IPMN患者胰液中進行了驗證，結(jié)果發(fā)現(xiàn)miRNA- 155在IPMN組織及胰液中表達均上調(diào)，miRNA- 21在組織中表達上調(diào)。Ryu等[11]利用qRT-PCR在31例PanIN(14例PanIN- 1，9例PanIN- 2，8例PanIN- 3)中檢測了3種胰腺癌高表達miRNAs(miRNA- 155、miRNA- 21、miRNA- 221)的水平，發(fā)現(xiàn)miRNA- 155在PanIN- 2(2.6倍)、PanIN- 3(7.4倍)中高表達，miRNA- 21只在PanIN- 3(2.5倍)中高表達，而miRNA- 221在不同PanIN中表達差異無統(tǒng)計學(xué)意義，隨后用LNA-ISH的方法證實了miRNA- 155在PanIN- 2和PanIN- 3的表達情況，因此認為miRNA- 155可作為診斷胰腺癌早期病變的分子標志物。Yu等[12]對735種miRNAs在PanIN和正常胰腺導(dǎo)管組織中的表達水平進行了分析，發(fā)現(xiàn)miRNA- 196b僅在PanIN- 3或胰腺癌中表達，因此有望成為診斷標志物。Remmers等[13]對PanIN、黏液囊腫、IPMN這3種癌前病變進行了研究，發(fā)現(xiàn)miRNA在不同組織類型中具有不同變化，認為其有望成為胰腺癌早期標志物的研究方向。綜上，miRNAs成為腫瘤分子標志物這一觀點被越來越多的學(xué)者所贊同。

理想的腫瘤標志物除了其組織表達的特異性外，還需要尋找簡單可行的檢測方法。Szafranska等[14]在超聲引導(dǎo)下行細針穿刺取得病變標本，并且以miRNA- 196和miRNA- 217作為分子標志物，成功鑒別了正常胰腺、慢性胰腺炎和胰腺癌，為指導(dǎo)手術(shù)或保守治療提供了重要的參考價值。但是此方法為有創(chuàng)檢查，有發(fā)生并發(fā)癥的風(fēng)險，病變較小的組織或一些癌前病變陽性檢出率低，而且其價格昂貴，作為常規(guī)檢查手段有一定局限性。Yabushita等[15]構(gòu)建了轉(zhuǎn)基因小鼠胰腺癌模型，通過芯片技術(shù)篩選出血清和組織中異常表達的miRNAs，并對血清中的miRNAs進行了驗證，最終認為4種miRNAs(miRNA- 203、miRNA- 369- 5p、miRNA- 376a和miRNA- 375)為潛在的血清分子診斷標志物。此外，文獻還報道了miRNA- 18a和miRNA- 210也在胰腺癌患者血清中高表達，有望成為血清分子標志物[16- 17]。miRNAs特點之一是在血中穩(wěn)定、不易降解，研究者用qRT-PCR技術(shù)對比了新采集外周血、室溫放置24 h及反復(fù)凍融8次的外周血中miRNA- 15b、miRNA- 16、miRNA- 24等內(nèi)源性miRNA水平，結(jié)果顯示內(nèi)源性miRNA水平?jīng)]有明顯變化。同時，文獻報道人血清、血漿與外周血中內(nèi)源性miRNA高度吻合。因此認為血漿樣品檢測內(nèi)源性miRNA是可行的。

miRNAs除了能在血清中檢測到，還能在胰液、糞便中檢測到。日本學(xué)者Sadakari等[18]采用內(nèi)鏡下逆行胰膽管造影術(shù)(endoscopic retrograde cholangiopancreatography，ERCP)收集了術(shù)前胰腺導(dǎo)管腺癌及慢性胰腺炎患者的胰液，并對miRNA- 21及miRNA- 155的表達進行分析，發(fā)現(xiàn)這兩種miRNAs在胰腺導(dǎo)管腺癌患者胰液中的表達均顯著高于慢性胰腺炎患者，因此認為檢測胰液中的miRNAs有望成為一種早期診斷的方法。Ren等[19]對胰腺癌、慢性胰腺炎及正常人糞便中的7種miRNAs進行了檢測，結(jié)果發(fā)現(xiàn)miRNA- 181b和miRNA- 210可鑒別胰腺癌和正常組織，認為糞便中miRNAs的檢測可作為篩選胰腺癌的一種手段。然而，獲得外周血標本檢測miRNAs無疑比胰液及糞便檢測更理想。

因此，miRNAs有可能成為一種穩(wěn)定、靈敏的胰腺癌早期診斷標志物。從miRNAs入手進一步闡述胰腺癌細胞發(fā)生和發(fā)展機制，這將為胰腺癌的早期診斷提供新的線索。篩選外周血特異性miRNAs具有長遠的臨床應(yīng)用價值。

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趙玉沛 電話：010-69156014，E-mail：zhao8028@263.com

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10.3969/j.issn.1674-9081.2014.02.018

2013- 04- 27)