周臻濤++王悅冬

【摘要】 目的 通過(guò)分析HPV16E6蛋白在食管正常組織、不典型性增生組織和癌組織中的表達(dá)，探討HPV16E6蛋白在梅州地區(qū)客家人食管鱗癌組發(fā)生、發(fā)展中的生物學(xué)意義。方法 應(yīng)用免疫組織化學(xué)方法檢測(cè)對(duì)68例食管正常黏膜組織、20例上皮不典型增生組織及68例癌組織中HPV16E6蛋白的表達(dá)情況進(jìn)行研究。結(jié)果 HPV16E6蛋白陽(yáng)性率在正常食管黏膜組織中為14.7%，在上皮不典型性增生組織中為45.0%，在癌組織中為70.6%，各組間差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）。結(jié)論 HPV16E6蛋白與梅州地區(qū)客家人食管鱗癌的發(fā)生、發(fā)展關(guān)系密切。

【關(guān)鍵詞】 食管腫瘤；人乳頭狀瘤病毒；E6蛋白；免疫組化

人乳頭狀瘤病毒（Human Papillomavirus，HPV）是一種屬于乳多空病毒科的乳頭瘤空泡病毒A屬，是球形DNA病毒，能引起人體皮膚、黏膜的鱗狀上皮增殖。目前已分離出的HPV有130多種，根據(jù)其是否致癌分為高危型和低危型，其中HPV16屬于高危型，研究表明其與食管鱗癌的發(fā)生關(guān)系密切[1]。梅州地區(qū)為客家人聚集區(qū)，該地區(qū)食管癌高發(fā)。本研究應(yīng)用免疫組化的方法檢測(cè)梅州地區(qū)客家人正常食管組織、不典型性增生食管組織及食管癌組織內(nèi)HPV16E6蛋白表達(dá)，以探討HPV16E6蛋白在該地區(qū)食管鱗癌發(fā)生、發(fā)展中的生物學(xué)意義。

作者單位：514031梅州市人民醫(yī)院腫瘤外一科

1 資料與方法

1.1 一般資料

收集梅州市人民醫(yī)院2008年1月～2011年6月間行根治性切除，且臨床病理資料完整的食管鱗病例標(biāo)本及相應(yīng)的距腫瘤5 cm以上經(jīng)病理證實(shí)為正常食管黏膜組織68例。所有患者術(shù)前均未行放療、化療，其中男性50例，女性18例；年齡40～62歲，中位年齡50歲；另外選取同期經(jīng)胃鏡活檢病理證實(shí)為食管鱗狀上皮不典型性增生標(biāo)本20例，其中男性15例，女性5 例；年齡30～65歲，中位年齡40歲。上述所有患者均為長(zhǎng)期（≥20年）居住在梅州地區(qū)的客家人。HPV16E6單抗為美國(guó)Santa Cruz公司產(chǎn)品，購(gòu)自北京中山生物公司，即用型免疫組化chemMate TM EnVision二抗試劑盒購(gòu)自DaKo公司。

1.2 方法

免疫組織化學(xué)檢查采用EnVision兩步法，實(shí)驗(yàn)步驟按試劑盒說(shuō)明書(shū)進(jìn)行，最后DAB顯色。以試劑公司提供的陽(yáng)性對(duì)照片作為陽(yáng)性對(duì)照，以磷酸鹽緩沖液代替一抗作為陰性對(duì)照。

1.3 結(jié)果判斷

2 結(jié)果

2.1 HPV16 E6在各組織中的表達(dá) HPV16E6蛋白著色部位主要在細(xì)胞核， 呈棕黃色或棕褐色反應(yīng)，伴少許胞漿著色。在正常食管黏膜組織、上皮不典型增生組織和癌組織中HPV16E6蛋白表達(dá)陽(yáng)性率分別為14.7%、45.0%、70.6%。正常黏膜組與上皮不典型增生組及正常黏膜組與鱗癌組比較HPV16E6蛋白表達(dá)陽(yáng)性率差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（均P<0.05）；上皮不典型增生組與鱗癌組比較HPV16E6蛋白表達(dá)陽(yáng)性率差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）（見(jiàn)表1）。

表1

3 討論

食管癌是常見(jiàn)的消化道腫瘤，全世界每年約有30萬(wàn)人死于食管癌，我國(guó)是世界上食管癌高發(fā)地區(qū)之一，其中尤以我國(guó)北部（太行山區(qū)）發(fā)病率最高，梅州地區(qū)亦為食管癌高發(fā)區(qū)。食管癌的發(fā)生、發(fā)展是多因素協(xié)同、多階段綜合作用的結(jié)果，其病理學(xué)形態(tài)常經(jīng)過(guò)鱗狀上皮的單純?cè)錾⒉坏湫驮錾⒃话?、早期浸?rùn)癌至浸潤(rùn)癌階段[3]。

HPV能引起人體皮膚、黏膜的鱗狀上皮增殖，目前已分離出的HPV有130多種，根據(jù)其是否致癌分為高危型和低危型，其中HPV16屬于高危型，研究表明HPV16與多種腫瘤的發(fā)生、發(fā)展密切相關(guān)[4，5]。在HPV16雙股DNA的8個(gè)讀碼框架結(jié)構(gòu)中，E6基因?yàn)檗D(zhuǎn)化有關(guān)的早期基因，在DNA復(fù)制前早期編碼E6蛋白，是一種病毒癌蛋白，可以刺激易感細(xì)胞增生，并在腫瘤形成的早期階段起重要作用。歐洲學(xué)者研究表明高危型HPV感染與食管癌的發(fā)生發(fā)展密切相關(guān)，40%～60%的食管鱗癌標(biāo)本HPV監(jiān)測(cè)為陽(yáng)性[6]。國(guó)內(nèi)學(xué)者王悅冬[7]采用PCR/導(dǎo)流雜交法檢測(cè)56例新鮮客家人食管癌組織、癌旁組織及正常食管黏膜組織HPV的表達(dá)，結(jié)果提示梅州地區(qū)客家人食管癌組織中存在HPV感染。本研究應(yīng)用免疫組化的方法檢測(cè)梅州地區(qū)客家人正常食管組織、不典型性增生食管組織及食管癌組織內(nèi)HPV16E6蛋白表達(dá)，結(jié)果顯示在正常食管黏膜組織、上皮不典型增生組織和癌組織中HPV16E6蛋白表達(dá)陽(yáng)性率分別14.7%、45.0%、70.6%，各組之間差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）。從研究結(jié)果可也看出，隨著食管病變的進(jìn)展，HPV16 E6蛋白表達(dá)的陽(yáng)性率也隨著升高，這提示HVP16E6蛋白在梅州地區(qū)客家人食管鱗癌的發(fā)生、發(fā)展密切相關(guān)，但其具體作用機(jī)制尚有待進(jìn)一步研究。

參 考 文 獻(xiàn)

[1] 劉節(jié)，蘇勤，張偉.人乳頭瘤病毒HPVE6及p53蛋白與食管鱗癌關(guān)系.世界華人消化雜志，2000，8（5）：494496.

[2] Fromowitz F B， Viola M V， Chao S， et al. Ras p21 expression in the progression of breast cancer.Hum Pathol，1987， 18（12）：1268 1275.

[3] 許春雷，千新來(lái)，周小山，等.HPV16型E6、E7 在食管鱗癌組織與非癌組織中的表達(dá).癌癥，2004，23（2）：165168.

[4] 任占平，石喆，杜鵑，等.乳腺癌組織中HPV16 18E6 及p53 MCM7 蛋白的表達(dá)及意義.中國(guó)腫瘤臨床，2008，35（6）：327330.

[5] McDougall J K. Immortalization and transformation of human cells by human papillomavirus//Human Pathogenic Papillomaviruses. Springer Berlin Heidelberg， 1994： 101119.

[6] 陸哲明.HPV與食管癌關(guān)系研究概況.國(guó)外醫(yī)學(xué)：腫瘤分冊(cè)，2000，27（4）：241245.

[7] 王悅冬，張開(kāi)鄂，周臻濤，等.梅州市客家人食管與人乳頭狀瘤病毒感染的關(guān)系.腫瘤基礎(chǔ)與臨床，2010，23（5）：377378.endprint

【摘要】 目的 通過(guò)分析HPV16E6蛋白在食管正常組織、不典型性增生組織和癌組織中的表達(dá)，探討HPV16E6蛋白在梅州地區(qū)客家人食管鱗癌組發(fā)生、發(fā)展中的生物學(xué)意義。方法 應(yīng)用免疫組織化學(xué)方法檢測(cè)對(duì)68例食管正常黏膜組織、20例上皮不典型增生組織及68例癌組織中HPV16E6蛋白的表達(dá)情況進(jìn)行研究。結(jié)果 HPV16E6蛋白陽(yáng)性率在正常食管黏膜組織中為14.7%，在上皮不典型性增生組織中為45.0%，在癌組織中為70.6%，各組間差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）。結(jié)論 HPV16E6蛋白與梅州地區(qū)客家人食管鱗癌的發(fā)生、發(fā)展關(guān)系密切。

【關(guān)鍵詞】 食管腫瘤；人乳頭狀瘤病毒；E6蛋白；免疫組化

人乳頭狀瘤病毒（Human Papillomavirus，HPV）是一種屬于乳多空病毒科的乳頭瘤空泡病毒A屬，是球形DNA病毒，能引起人體皮膚、黏膜的鱗狀上皮增殖。目前已分離出的HPV有130多種，根據(jù)其是否致癌分為高危型和低危型，其中HPV16屬于高危型，研究表明其與食管鱗癌的發(fā)生關(guān)系密切[1]。梅州地區(qū)為客家人聚集區(qū)，該地區(qū)食管癌高發(fā)。本研究應(yīng)用免疫組化的方法檢測(cè)梅州地區(qū)客家人正常食管組織、不典型性增生食管組織及食管癌組織內(nèi)HPV16E6蛋白表達(dá)，以探討HPV16E6蛋白在該地區(qū)食管鱗癌發(fā)生、發(fā)展中的生物學(xué)意義。

作者單位：514031梅州市人民醫(yī)院腫瘤外一科

1 資料與方法

1.1 一般資料

收集梅州市人民醫(yī)院2008年1月～2011年6月間行根治性切除，且臨床病理資料完整的食管鱗病例標(biāo)本及相應(yīng)的距腫瘤5 cm以上經(jīng)病理證實(shí)為正常食管黏膜組織68例。所有患者術(shù)前均未行放療、化療，其中男性50例，女性18例；年齡40～62歲，中位年齡50歲；另外選取同期經(jīng)胃鏡活檢病理證實(shí)為食管鱗狀上皮不典型性增生標(biāo)本20例，其中男性15例，女性5 例；年齡30～65歲，中位年齡40歲。上述所有患者均為長(zhǎng)期（≥20年）居住在梅州地區(qū)的客家人。HPV16E6單抗為美國(guó)Santa Cruz公司產(chǎn)品，購(gòu)自北京中山生物公司，即用型免疫組化chemMate TM EnVision二抗試劑盒購(gòu)自DaKo公司。

1.2 方法

免疫組織化學(xué)檢查采用EnVision兩步法，實(shí)驗(yàn)步驟按試劑盒說(shuō)明書(shū)進(jìn)行，最后DAB顯色。以試劑公司提供的陽(yáng)性對(duì)照片作為陽(yáng)性對(duì)照，以磷酸鹽緩沖液代替一抗作為陰性對(duì)照。

1.3 結(jié)果判斷

2 結(jié)果

2.1 HPV16 E6在各組織中的表達(dá) HPV16E6蛋白著色部位主要在細(xì)胞核， 呈棕黃色或棕褐色反應(yīng)，伴少許胞漿著色。在正常食管黏膜組織、上皮不典型增生組織和癌組織中HPV16E6蛋白表達(dá)陽(yáng)性率分別為14.7%、45.0%、70.6%。正常黏膜組與上皮不典型增生組及正常黏膜組與鱗癌組比較HPV16E6蛋白表達(dá)陽(yáng)性率差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（均P<0.05）；上皮不典型增生組與鱗癌組比較HPV16E6蛋白表達(dá)陽(yáng)性率差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）（見(jiàn)表1）。

表1

3 討論

食管癌是常見(jiàn)的消化道腫瘤，全世界每年約有30萬(wàn)人死于食管癌，我國(guó)是世界上食管癌高發(fā)地區(qū)之一，其中尤以我國(guó)北部（太行山區(qū)）發(fā)病率最高，梅州地區(qū)亦為食管癌高發(fā)區(qū)。食管癌的發(fā)生、發(fā)展是多因素協(xié)同、多階段綜合作用的結(jié)果，其病理學(xué)形態(tài)常經(jīng)過(guò)鱗狀上皮的單純?cè)錾?、不典型增生、原位癌、早期浸?rùn)癌至浸潤(rùn)癌階段[3]。

HPV能引起人體皮膚、黏膜的鱗狀上皮增殖，目前已分離出的HPV有130多種，根據(jù)其是否致癌分為高危型和低危型，其中HPV16屬于高危型，研究表明HPV16與多種腫瘤的發(fā)生、發(fā)展密切相關(guān)[4，5]。在HPV16雙股DNA的8個(gè)讀碼框架結(jié)構(gòu)中，E6基因?yàn)檗D(zhuǎn)化有關(guān)的早期基因，在DNA復(fù)制前早期編碼E6蛋白，是一種病毒癌蛋白，可以刺激易感細(xì)胞增生，并在腫瘤形成的早期階段起重要作用。歐洲學(xué)者研究表明高危型HPV感染與食管癌的發(fā)生發(fā)展密切相關(guān)，40%～60%的食管鱗癌標(biāo)本HPV監(jiān)測(cè)為陽(yáng)性[6]。國(guó)內(nèi)學(xué)者王悅冬[7]采用PCR/導(dǎo)流雜交法檢測(cè)56例新鮮客家人食管癌組織、癌旁組織及正常食管黏膜組織HPV的表達(dá)，結(jié)果提示梅州地區(qū)客家人食管癌組織中存在HPV感染。本研究應(yīng)用免疫組化的方法檢測(cè)梅州地區(qū)客家人正常食管組織、不典型性增生食管組織及食管癌組織內(nèi)HPV16E6蛋白表達(dá)，結(jié)果顯示在正常食管黏膜組織、上皮不典型增生組織和癌組織中HPV16E6蛋白表達(dá)陽(yáng)性率分別14.7%、45.0%、70.6%，各組之間差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）。從研究結(jié)果可也看出，隨著食管病變的進(jìn)展，HPV16 E6蛋白表達(dá)的陽(yáng)性率也隨著升高，這提示HVP16E6蛋白在梅州地區(qū)客家人食管鱗癌的發(fā)生、發(fā)展密切相關(guān)，但其具體作用機(jī)制尚有待進(jìn)一步研究。

參 考 文 獻(xiàn)

[1] 劉節(jié)，蘇勤，張偉.人乳頭瘤病毒HPVE6及p53蛋白與食管鱗癌關(guān)系.世界華人消化雜志，2000，8（5）：494496.

[2] Fromowitz F B， Viola M V， Chao S， et al. Ras p21 expression in the progression of breast cancer.Hum Pathol，1987， 18（12）：1268 1275.

[3] 許春雷，千新來(lái)，周小山，等.HPV16型E6、E7 在食管鱗癌組織與非癌組織中的表達(dá).癌癥，2004，23（2）：165168.

[4] 任占平，石喆，杜鵑，等.乳腺癌組織中HPV16 18E6 及p53 MCM7 蛋白的表達(dá)及意義.中國(guó)腫瘤臨床，2008，35（6）：327330.

[5] McDougall J K. Immortalization and transformation of human cells by human papillomavirus//Human Pathogenic Papillomaviruses. Springer Berlin Heidelberg， 1994： 101119.

[6] 陸哲明.HPV與食管癌關(guān)系研究概況.國(guó)外醫(yī)學(xué)：腫瘤分冊(cè)，2000，27（4）：241245.

[7] 王悅冬，張開(kāi)鄂，周臻濤，等.梅州市客家人食管與人乳頭狀瘤病毒感染的關(guān)系.腫瘤基礎(chǔ)與臨床，2010，23（5）：377378.endprint

【摘要】 目的 通過(guò)分析HPV16E6蛋白在食管正常組織、不典型性增生組織和癌組織中的表達(dá)，探討HPV16E6蛋白在梅州地區(qū)客家人食管鱗癌組發(fā)生、發(fā)展中的生物學(xué)意義。方法 應(yīng)用免疫組織化學(xué)方法檢測(cè)對(duì)68例食管正常黏膜組織、20例上皮不典型增生組織及68例癌組織中HPV16E6蛋白的表達(dá)情況進(jìn)行研究。結(jié)果 HPV16E6蛋白陽(yáng)性率在正常食管黏膜組織中為14.7%，在上皮不典型性增生組織中為45.0%，在癌組織中為70.6%，各組間差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）。結(jié)論 HPV16E6蛋白與梅州地區(qū)客家人食管鱗癌的發(fā)生、發(fā)展關(guān)系密切。

【關(guān)鍵詞】 食管腫瘤；人乳頭狀瘤病毒；E6蛋白；免疫組化

人乳頭狀瘤病毒（Human Papillomavirus，HPV）是一種屬于乳多空病毒科的乳頭瘤空泡病毒A屬，是球形DNA病毒，能引起人體皮膚、黏膜的鱗狀上皮增殖。目前已分離出的HPV有130多種，根據(jù)其是否致癌分為高危型和低危型，其中HPV16屬于高危型，研究表明其與食管鱗癌的發(fā)生關(guān)系密切[1]。梅州地區(qū)為客家人聚集區(qū)，該地區(qū)食管癌高發(fā)。本研究應(yīng)用免疫組化的方法檢測(cè)梅州地區(qū)客家人正常食管組織、不典型性增生食管組織及食管癌組織內(nèi)HPV16E6蛋白表達(dá)，以探討HPV16E6蛋白在該地區(qū)食管鱗癌發(fā)生、發(fā)展中的生物學(xué)意義。

作者單位：514031梅州市人民醫(yī)院腫瘤外一科

1 資料與方法

1.1 一般資料

收集梅州市人民醫(yī)院2008年1月～2011年6月間行根治性切除，且臨床病理資料完整的食管鱗病例標(biāo)本及相應(yīng)的距腫瘤5 cm以上經(jīng)病理證實(shí)為正常食管黏膜組織68例。所有患者術(shù)前均未行放療、化療，其中男性50例，女性18例；年齡40～62歲，中位年齡50歲；另外選取同期經(jīng)胃鏡活檢病理證實(shí)為食管鱗狀上皮不典型性增生標(biāo)本20例，其中男性15例，女性5 例；年齡30～65歲，中位年齡40歲。上述所有患者均為長(zhǎng)期（≥20年）居住在梅州地區(qū)的客家人。HPV16E6單抗為美國(guó)Santa Cruz公司產(chǎn)品，購(gòu)自北京中山生物公司，即用型免疫組化chemMate TM EnVision二抗試劑盒購(gòu)自DaKo公司。

1.2 方法

免疫組織化學(xué)檢查采用EnVision兩步法，實(shí)驗(yàn)步驟按試劑盒說(shuō)明書(shū)進(jìn)行，最后DAB顯色。以試劑公司提供的陽(yáng)性對(duì)照片作為陽(yáng)性對(duì)照，以磷酸鹽緩沖液代替一抗作為陰性對(duì)照。

1.3 結(jié)果判斷

2 結(jié)果

2.1 HPV16 E6在各組織中的表達(dá) HPV16E6蛋白著色部位主要在細(xì)胞核， 呈棕黃色或棕褐色反應(yīng)，伴少許胞漿著色。在正常食管黏膜組織、上皮不典型增生組織和癌組織中HPV16E6蛋白表達(dá)陽(yáng)性率分別為14.7%、45.0%、70.6%。正常黏膜組與上皮不典型增生組及正常黏膜組與鱗癌組比較HPV16E6蛋白表達(dá)陽(yáng)性率差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（均P<0.05）；上皮不典型增生組與鱗癌組比較HPV16E6蛋白表達(dá)陽(yáng)性率差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）（見(jiàn)表1）。

表1

3 討論

食管癌是常見(jiàn)的消化道腫瘤，全世界每年約有30萬(wàn)人死于食管癌，我國(guó)是世界上食管癌高發(fā)地區(qū)之一，其中尤以我國(guó)北部（太行山區(qū)）發(fā)病率最高，梅州地區(qū)亦為食管癌高發(fā)區(qū)。食管癌的發(fā)生、發(fā)展是多因素協(xié)同、多階段綜合作用的結(jié)果，其病理學(xué)形態(tài)常經(jīng)過(guò)鱗狀上皮的單純?cè)錾⒉坏湫驮錾?、原位癌、早期浸?rùn)癌至浸潤(rùn)癌階段[3]。

HPV能引起人體皮膚、黏膜的鱗狀上皮增殖，目前已分離出的HPV有130多種，根據(jù)其是否致癌分為高危型和低危型，其中HPV16屬于高危型，研究表明HPV16與多種腫瘤的發(fā)生、發(fā)展密切相關(guān)[4，5]。在HPV16雙股DNA的8個(gè)讀碼框架結(jié)構(gòu)中，E6基因?yàn)檗D(zhuǎn)化有關(guān)的早期基因，在DNA復(fù)制前早期編碼E6蛋白，是一種病毒癌蛋白，可以刺激易感細(xì)胞增生，并在腫瘤形成的早期階段起重要作用。歐洲學(xué)者研究表明高危型HPV感染與食管癌的發(fā)生發(fā)展密切相關(guān)，40%～60%的食管鱗癌標(biāo)本HPV監(jiān)測(cè)為陽(yáng)性[6]。國(guó)內(nèi)學(xué)者王悅冬[7]采用PCR/導(dǎo)流雜交法檢測(cè)56例新鮮客家人食管癌組織、癌旁組織及正常食管黏膜組織HPV的表達(dá)，結(jié)果提示梅州地區(qū)客家人食管癌組織中存在HPV感染。本研究應(yīng)用免疫組化的方法檢測(cè)梅州地區(qū)客家人正常食管組織、不典型性增生食管組織及食管癌組織內(nèi)HPV16E6蛋白表達(dá)，結(jié)果顯示在正常食管黏膜組織、上皮不典型增生組織和癌組織中HPV16E6蛋白表達(dá)陽(yáng)性率分別14.7%、45.0%、70.6%，各組之間差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）。從研究結(jié)果可也看出，隨著食管病變的進(jìn)展，HPV16 E6蛋白表達(dá)的陽(yáng)性率也隨著升高，這提示HVP16E6蛋白在梅州地區(qū)客家人食管鱗癌的發(fā)生、發(fā)展密切相關(guān)，但其具體作用機(jī)制尚有待進(jìn)一步研究。

參 考 文 獻(xiàn)

[1] 劉節(jié)，蘇勤，張偉.人乳頭瘤病毒HPVE6及p53蛋白與食管鱗癌關(guān)系.世界華人消化雜志，2000，8（5）：494496.

[2] Fromowitz F B， Viola M V， Chao S， et al. Ras p21 expression in the progression of breast cancer.Hum Pathol，1987， 18（12）：1268 1275.

[3] 許春雷，千新來(lái)，周小山，等.HPV16型E6、E7 在食管鱗癌組織與非癌組織中的表達(dá).癌癥，2004，23（2）：165168.

[4] 任占平，石喆，杜鵑，等.乳腺癌組織中HPV16 18E6 及p53 MCM7 蛋白的表達(dá)及意義.中國(guó)腫瘤臨床，2008，35（6）：327330.

[5] McDougall J K. Immortalization and transformation of human cells by human papillomavirus//Human Pathogenic Papillomaviruses. Springer Berlin Heidelberg， 1994： 101119.

[6] 陸哲明.HPV與食管癌關(guān)系研究概況.國(guó)外醫(yī)學(xué)：腫瘤分冊(cè)，2000，27（4）：241245.

[7] 王悅冬，張開(kāi)鄂，周臻濤，等.梅州市客家人食管與人乳頭狀瘤病毒感染的關(guān)系.腫瘤基礎(chǔ)與臨床，2010，23（5）：377378.endprint