劉 聰，陳新梅，袁玉芳

（山東中醫(yī)藥大學(xué)藥學(xué)院，山東濟(jì)南250355）

脂質(zhì)體降低尼美舒利肝臟毒性的初步研究

劉 聰，陳新梅，袁玉芳

（山東中醫(yī)藥大學(xué)藥學(xué)院，山東濟(jì)南250355）

目的考察尼美舒利脂質(zhì)體對(duì)肝臟的影響作用。方法小鼠隨機(jī)分為生理鹽水對(duì)照組、尼美舒利溶液組及尼美舒利脂質(zhì)體組，各組分別灌胃相應(yīng)藥物，21 d后處死并檢測(cè)小鼠肝臟中ALT和AST活性，同時(shí)觀察肝組織病理變化。結(jié)果NIM溶液組小鼠與對(duì)照組小鼠相比，谷草轉(zhuǎn)氨酶和谷丙轉(zhuǎn)氨酶均明顯升高，分別為（250.11± 31.64），（234.01±29.59），P＜0.01；脂質(zhì)體組小鼠與溶液組相比，谷草轉(zhuǎn)氨酶和谷丙轉(zhuǎn)氨酶均降低，分別為（207.33±25.77），（198.44±24.70），P＜0.05；小鼠肝臟病理切片顯示脂質(zhì)體組小鼠肝損傷程度明顯低于溶液組小鼠。結(jié)論脂質(zhì)體能顯著降低尼美舒利的肝臟毒性。

尼美舒利；脂質(zhì)體；肝臟保護(hù)

尼美舒利（nimesulide，NIM）是一種新型的非甾體類抗炎藥，因其具有顯著的抗炎、鎮(zhèn)痛和解熱作用而在世界各國(guó)內(nèi)均有應(yīng)用。但尼美舒利口服血藥濃度波動(dòng)較大、半衰期較短（t1／2＝3.3 h），需要頻繁服藥，并且由于其肝損傷作用限制了使用［1～3］。本課題的研究以降低NIM的肝毒性及減少其服藥次數(shù)為目的將NIM制成脂質(zhì)體［4］。脂質(zhì)體系指將藥物包封于類脂質(zhì)雙分子層內(nèi)而形成的微型泡囊體，具靶向性、低毒性、緩釋性等特點(diǎn)，本研究考察了NIM脂質(zhì)體對(duì)肝臟的影響，以期提高NIM臨床用藥的安全性。

1 材料

1.1 儀器 旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀（上海亞榮生化儀器廠）；UV－3010紫外分光光度計(jì)（日本島津）；JA－2003型電子天平（上海天平儀器廠）；XSP－2C光學(xué)顯微鏡（上海長(zhǎng)方光學(xué)儀器有限公司）；KQ－250E超聲波清洗器（昆山市超聲儀器有限公司）。

1.2 試藥 ALT試劑盒（南京建成生物工程研究所，批號(hào)：C009－1130915）；AST試劑盒（南京建成生物工程研究所，批號(hào)：C010－1130911）；總蛋白測(cè)定試劑盒（南京建成生物工程研究所，批號(hào)：WO11131009）；尼美舒利原料藥（武漢大華偉業(yè)醫(yī)藥化工有限公司，批號(hào)：XH201301248002，純度99%）；蛋黃卵磷脂（上海太偉藥業(yè)有限公司）；膽固醇（南京奧多福尼生物科技有限公司，進(jìn)口分裝）。

1.3 動(dòng)物 KM系清潔級(jí)小鼠共48只，體重26～32 g，雌雄各半。由山東中醫(yī)藥大學(xué)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心提供，證書編號(hào)：SCXK（魯）2013－0003。

2 方法與結(jié)果

2.1.1 藥物制備 將尼美舒利原料藥溶于蒸餾水中，制成濃度為2 mg·mL－1的溶液備用；薄膜分散法制備NIM脂質(zhì)體［4］，NIM含量為2 mg·mL－1。所有灌胃藥物現(xiàn)用現(xiàn)制。

2.1.2 動(dòng)物分組 試驗(yàn)動(dòng)物雌雄各半，隨機(jī)分為生理鹽水對(duì)照組、NIM溶液組及NIM脂質(zhì)體組，小鼠飼養(yǎng)于22℃、60%相對(duì)濕度的環(huán)境中，自由進(jìn)食和飲水，一周后開始試驗(yàn)。

2.1.3 試驗(yàn)數(shù)據(jù)的測(cè)定 小鼠每天灌胃兩次，每次0.4 mL。小鼠連續(xù)灌胃21 d后禁食12 h，脊柱脫臼處死，小鼠解剖后取肝臟稱重，計(jì)算肝指數(shù)（肝指數(shù)＝肝臟重量／小鼠體重）；肝臟分兩部分，一部分用來(lái)測(cè)定肝臟中的谷草轉(zhuǎn)氨酶（Aspartate transaminase，AST）和谷丙轉(zhuǎn)氨酶（Alanine aminotransferase，ALT）的含量，另一部分肝臟作病理切片。試驗(yàn)數(shù)據(jù)以±s表示，計(jì)量資料用統(tǒng)計(jì)分析軟件SPSS 19.0進(jìn)行單因素方差分析，P＜0.05為差異具統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，結(jié)果見表1。

表1 小鼠肝指數(shù)及肝臟中ALT、AST含量

由表1可見，對(duì)于肝指數(shù)，溶液組和脂質(zhì)體組與對(duì)照組之間均無(wú)顯著性差異，即尼美舒利脂質(zhì)體與尼美舒利溶液對(duì)小鼠的肝指數(shù)均無(wú)明顯影響。而對(duì)于肝臟中的ALT和AST含量，脂質(zhì)體組和溶液組分別與正常組比較，具有極顯著性差異；脂質(zhì)體組與溶液組進(jìn)行比較，數(shù)據(jù)亦具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。即尼美舒利脂質(zhì)體與尼美舒利溶液相比，能顯著減少小鼠肝臟內(nèi)AST和ALT的含量。

2.1.4 肝臟病理切片 小鼠肝臟病理切片后HE染色，鏡下觀察病理改變，結(jié)果見圖1。生理鹽水對(duì)照組小鼠肝小葉結(jié)構(gòu)清晰，肝索排列規(guī)則，肝細(xì)胞未見明顯異常；尼美舒利溶液組中肝臟結(jié)構(gòu)紊亂，小葉間界限不清，偶有小灶性炎細(xì)胞浸潤(rùn)并有大片肝組織損傷，其中以空泡變性為主，受損面積超過(guò)一半；尼美舒利脂質(zhì)體組細(xì)胞變形明顯減少，且?guī)缀跷匆娪醒准?xì)胞出現(xiàn)。脂質(zhì)體組和溶液組與對(duì)照組比較均有明顯差異。

圖1 各組小鼠肝臟病理切片結(jié)果（HE，×200）

3 討論

本研究結(jié)果表明，尼美舒利所致急性肝損傷模型中小鼠肝組織內(nèi)，ALT和AST活性明顯升高。肝細(xì)胞明顯變性壞死，表明尼美舒利引起小鼠嚴(yán)重的急性肝損傷。尼美舒利脂質(zhì)體組小鼠與尼美舒利溶液組小鼠相比其肝酶（ALT、AST）活性明顯偏低。而通過(guò)對(duì)小鼠肝臟的大體觀察、組織學(xué)觀察及肝組織的分級(jí)評(píng)分可以看出，在尼美舒利脂質(zhì)體組中，肝臟大體病變及肝細(xì)胞變性、壞死及炎癥浸潤(rùn)等病變明顯偏輕，進(jìn)一步證明了尼美舒利脂質(zhì)體與尼美舒利溶液相比，尼美舒利脂質(zhì)體對(duì)小鼠肝臟具有預(yù)防保護(hù)作用。這些結(jié)果為尼美舒利制備成脂質(zhì)體化提供了重要的理論根據(jù)。

脂質(zhì)體降低NIM肝毒性的機(jī)理可能是脂質(zhì)體具囊泡結(jié)構(gòu)，包裹NIM分子，使其緩慢釋藥，從而減少了瞬時(shí)NIM濃度過(guò)大對(duì)肝臟的損傷；另一方面，因?yàn)橹|(zhì)體囊殼中含較多磷脂雙分子層，而被囊殼包裹的NIM分子會(huì)迅速分布至脂肪組織中，從而延長(zhǎng)NIM分子在肝臟內(nèi)代謝的時(shí)間，因此而降低NIM對(duì)于肝臟的損傷。這些推測(cè)還需進(jìn)一步的試驗(yàn)驗(yàn)證。

［1］梁玉華，劉勁.19例尼美舒利所致肝臟損害的調(diào)查分析［J］.海南醫(yī)學(xué)，2011，22（19）：34－35.

［2］韓松瑛，劉樹森，玄延花，等.尼美舒利引起嚴(yán)重肝損傷致死尸檢1例［J］.臨床與實(shí)驗(yàn)病理學(xué)雜志，2008，24（4）：508－509.

［3］傅明健，楊正兵，向丹沙，等.尼美舒利致藥物性肝炎1例［J］.職業(yè)衛(wèi)生與病傷，2002，17（4）：299.

［4］張娜娜，陳新梅，戰(zhàn)旗，等.尼美舒利脂質(zhì)體的制備及質(zhì)量評(píng)價(jià)初步研究［J］.藥學(xué)研究，2013，32（11）：651－652，659.

The prelim inary inquiry of liposomes reduce nimesulide liver toxicity

LIU Cong，CHEN Xin-mei，YUAN Yu-fang
（College of Pharmacy，Shandong University of Traditional Chinese Medicine，Jinan 250355，China）

ObjectiveTo explore the influence of nimesulide liposomes to liver.MethodsMethods of test animals were randomly divided into control group，nimesulide solution group and nimesulide liposome group.Each group were orally administered drugs accordingly，21 d after testing animalswere sacrificed and liver tissue ALT and AST activity observed pathological changes in Liver tissue.ResultsThe nimesutide solution group ofmicewas compared with the control group ofmice whose serum aspartate，alanine aminotransferase were significantly increased，respectively（250.11±31.64），（234.01± 29.59），P＜0.01；Mice with liposome and solution mice compared to their aspartate transaminase，alanine aminotransferase were low，respectively（207.33±25.77），（198.44±24.70），P＜0.05；Microscopic observation ofmouse liver biopsy，liver damage liposome group ofmice was significantly lower extent.ConclusionLiposomes reduced liver toxicity nimesulide.

Nimesulide；Liposomes；Liver protection

R965

：A

2095－5375（2014）07－0382－003

山東中醫(yī)藥大學(xué)2014年SRT項(xiàng)目（項(xiàng)目編號(hào)：2014144）。本項(xiàng)目于山東中醫(yī)藥大學(xué)大學(xué)生創(chuàng)新創(chuàng)業(yè)訓(xùn)練平臺(tái)完成

劉聰，男，研究方向：中藥學(xué)，E－mail：DD_liucong＠126.com

陳新梅，女，博士研究生，副教授，研究方向：藥劑學(xué)的教學(xué)與科研，Tel：13065016189，E－mail：xinmeichen＠126.com