劉世娟，郝貴周，徐 健

（魯南制藥集團(tuán)股份有限公司，山東臨沂276006）

頂空氣相色譜法測(cè)定達(dá)托霉素中有機(jī)溶劑殘留量

劉世娟，郝貴周，徐 健

（魯南制藥集團(tuán)股份有限公司，山東臨沂276006）

目的建立頂空氣相色譜法測(cè)定達(dá)托霉素中有機(jī)溶劑乙醇、乙腈含量的方法。方法以DB－WAX毛細(xì)管柱為分離柱，采用程序升溫，檢測(cè)器為FID。結(jié)果線性關(guān)系良好，方法精密度、重復(fù)性均符合要求。結(jié)論該方法可用于達(dá)托霉素原料中殘留溶劑乙醇和乙腈的含量測(cè)定。

頂空氣相色譜法；達(dá)托霉素；溶劑殘留量；測(cè)定

達(dá)托霉素由Lilly公司研發(fā)，從玫瑰孢鏈霉菌發(fā)酵液中提取得到的一個(gè)環(huán)脂肽類抗生素。它不僅具有新穎的化學(xué)結(jié)構(gòu)，而且其作用機(jī)制特殊：達(dá)托霉素可擾亂細(xì)胞膜對(duì)氨基酸的轉(zhuǎn)運(yùn)，從而阻礙細(xì)菌細(xì)胞壁肽聚糖的生物合成，改變細(xì)胞質(zhì)膜的性質(zhì)；另外，它還能通過(guò)破壞細(xì)菌的細(xì)胞膜，使其內(nèi)容物外泄而達(dá)到殺滅細(xì)菌的目的。達(dá)托霉素除了能作用于大多數(shù)臨床相關(guān)革蘭氏陽(yáng)性菌外，更重要的是它在體外對(duì)已呈現(xiàn)甲氧西林（methicillin）、萬(wàn)古霉素和利奈唑烷等耐藥性質(zhì)的分離菌株具有強(qiáng)力活性［1］。在生產(chǎn)過(guò)程中會(huì)用到乙醇和乙腈，為控制藥品質(zhì)量，需要對(duì)其殘留溶劑進(jìn)行測(cè)定和控制。按照《中國(guó)藥典》2010年版［2］中對(duì)殘留溶劑的要求，乙醇含量不得過(guò)0.5%，乙腈含量不得過(guò)0.041%。筆者在本試驗(yàn)中建立了頂空毛細(xì)管氣相色譜法［3，4］，測(cè)定乙醇和乙腈在達(dá)托霉素中的殘留量，方法靈敏、準(zhǔn)確。

1 儀器與試藥

Agilent7890A型氣相色譜儀，F(xiàn)ID檢測(cè)器，化學(xué)工作站和CTC Analytics型頂空進(jìn)樣器，DB－WAX毛細(xì)管色譜柱。達(dá)托霉素原料（山東新時(shí)代藥業(yè)有限公司，批號(hào)：120901、120902、121001）。乙醇與乙腈為色譜純，N，N－二甲基甲酰胺為色譜純。

2 方法

2.1 供試品溶液及對(duì)照品溶液的配制 精密稱取本品約0.5 g，置20 mL頂空瓶中，精密加N，N－二甲基甲酰胺5mL使溶解，密封，作為供試品溶液；分別精密稱取乙醇499.9 mg、乙腈40.6 mg，置同一100 mL量瓶中，用N，N－二甲基甲酰胺稀釋至刻度，搖勻，作為對(duì)照品儲(chǔ)備液。精密量取對(duì)照品儲(chǔ)備液5 mL，置50 mL量瓶中，用N，N－二甲基甲酰胺稀釋至刻度，搖勻，作為對(duì)照品溶液。

2.2 色譜條件 頂空進(jìn)樣條件：頂空平衡溫度85℃，平衡時(shí)間30 min，采樣針溫度90℃。

氣相色譜條件：DB－WAX毛細(xì)管柱（30 m×0.53 mm，1μm），進(jìn)樣口溫度：200℃，檢測(cè)器溫度：250℃；柱溫：40℃，保持14 min，以40℃·min－1升溫至200℃，保持7 min。載氣為氮?dú)?；柱流量? mL·min－1，分流比：1∶1；進(jìn)樣量：1 mL。兩個(gè)主峰的理論板數(shù)及分離度均符合《中國(guó)藥典》2010年版的有關(guān)規(guī)定，結(jié)果見如圖1。

圖1 GC色譜圖

2.3 線性關(guān)系考察 分別精密量取“2.1”項(xiàng)下的對(duì)照品儲(chǔ)備液3、4、5、6、7 mL，分別置50 mL量瓶中，用N，N－二甲基甲酰胺稀釋至刻度，搖勻，得系列濃度溶液。分別精密量取5 mL，置20 mL頂空瓶中，密封，按“2.2”項(xiàng)下色譜條件測(cè)定。分別以濃度C（mg·mL－1）為橫坐標(biāo)，峰面積A為縱坐標(biāo)進(jìn)行線性回歸，兩組分在其濃度范圍內(nèi)線性關(guān)系良好，結(jié)果見表1。

2.4 精密度試驗(yàn) 取對(duì)照品溶液5 mL，置20 mL頂空瓶中，按“2.2”項(xiàng)下色譜條件測(cè)定，連續(xù)進(jìn)樣6次，乙醇與乙腈峰面積的RSD分別為1.22%、2.96%。

2.5 檢測(cè)限試驗(yàn) 將對(duì)照品溶液濃度逐級(jí)降低后，依法測(cè)定，直至信噪比接近3∶1，計(jì)算最低檢測(cè)濃度，結(jié)果見表1。

表1 兩組分回歸方程，線性范圍（n＝5），最低檢測(cè)濃度

2.6 回收率試驗(yàn) 取已知溶劑殘留量的達(dá)托霉素（批號(hào)：120901）約0.5 g，精密稱定，置20 mL頂空瓶中，共9份，按照各種溶劑殘留限度的80%、100%、120%3個(gè)水平對(duì)9份樣品進(jìn)行加標(biāo)，即加入0.4、0.5和0.6 mL對(duì)照品儲(chǔ)備液，并加N，N－二甲基甲酰胺使成5 mL，每個(gè)水平重復(fù)3次，按“2.2”項(xiàng)下的色譜條件進(jìn)行測(cè)定，計(jì)算乙醇的平均回收率為98.3%，乙腈的平均回收率為105.6%，RSD分別為1.49%和3.32%。

2.7 樣品測(cè)定 分別量取對(duì)照品溶液與供試品溶液各5 mL，置于20 mL頂空瓶中，按“2.2”項(xiàng)下色譜條件測(cè)定。記錄色譜圖，按外標(biāo)法以峰面積計(jì)算供試品中各溶劑的殘留量，結(jié)果3批樣品（批號(hào)：120901、120902、121001）的乙醇濃度分別為0.06%、0.05%和0.08%，乙腈均未檢出。

3 討論

使用頂空進(jìn)樣法，考察了頂空平衡溫度分別為80℃、85℃和90℃，平衡時(shí)間分別為15 min、30 min和45 min時(shí)各成分的出峰情況，結(jié)果見表2，結(jié)果表明頂空溫度85℃，頂空平衡時(shí)間30 min時(shí)效果理想；比較了DB－624毛細(xì)管柱和DB－WAX毛細(xì)管柱，DB－WAX毛細(xì)管柱峰形好并且理論板數(shù)高，因此選用DB－WAX毛細(xì)管柱，結(jié)果見圖2。通過(guò)對(duì)3批達(dá)托霉素原料中溶劑殘留量的測(cè)定，結(jié)果均符合《中國(guó)藥典》2010年版要求。

表2 頂空溫度與時(shí)間選擇試驗(yàn)結(jié)果

圖2 DB－624色譜柱對(duì)照品溶液GC色譜圖

［1］Debono M，Abbott BJ，Molloy RM，et al.Enzymatic and chemical modifications of lipopeptide antibiotic A21978C：the synthesis and evaluation of daptomycin（LY146032）［J］.JAntibiot（Tokyo），1988，41（8）：1093－1105.

［2］國(guó)家藥典委員會(huì).中華人民共和國(guó)藥典2010年版（二部）［S］.北京：中國(guó)醫(yī)藥科技出版社，2010：附錄ⅧP.

［3］任英，劉延鳳.頂空氣相色譜法測(cè)定吡非尼酮中有機(jī)溶劑殘留量［J］.藥學(xué)研究，2013，32（5）：271－272.

［4］許國(guó)旺.現(xiàn)代實(shí)用氣相色譜法［M］.北京：化學(xué)工業(yè)出版社，2004：25－42.

Determination of residual organic solvents in daptomycin by headspace gas chromatography

LIU Shi-juan，HAO Gui-zhou，XU Jian
（Lunan Pharmaceutical Group Co.，Ltd.，Linyi276006，China）

ObjectiveTo establish amethod for the determination of residualethanol and acetonitrile in daptomycin by headspace gas chromatography.MethodsThe DB－WAX capillary column was adopted，temperature programming and FID detector was used.ResultsThe two compositions had good linear relationship and the precision and reproducibility of themethod were in accord with the requests.ConclusionThismethod could be used to determine residual ethanol and acetonitrile in daptomycin.

Headspace gas chromatography；Daptomycin；Residual solvents；Determination

R927.11

：A

2095－5375（2014）07－0389－003

劉世娟，女，研究方向：藥物分析，E－mail：13666398795＠163.com