邵建偉，劉洪濤，曹永生，張潤祥，曹 翀，彭統(tǒng)全，張永根，張維銀，甘文平，羅清華，高明春，6，王君偉，6

（1.東北農業(yè)大學動物醫(yī)學學院，黑龍江 哈爾濱150030；2.東北農業(yè)大學動物科技學院，黑龍江 哈爾濱150030；3.黑龍江省奶業(yè)協(xié)會，黑龍江 哈爾濱150001；4.黑龍江省農墾科學院畜牧獸醫(yī)研究所，黑龍江 哈爾濱150038；5.黑龍江飛鶴原生態(tài)牧業(yè)股份有限公司，黑龍江 齊齊哈爾164800；6.國家奶牛產業(yè)技術體系，北京 海淀100193）

布魯菌病為常見的人獸共患傳染病，牛、羊、豬等家畜均為此病易感動物，患病動物出現(xiàn)生殖器官炎癥、流產、不育等病理現(xiàn)象，人患此病后可引起波狀熱、心內膜炎、關節(jié)炎和骨髓炎等，嚴重危害畜牧業(yè)的發(fā)展和人類健康。為調查黑龍江省奶牛布魯菌病血清抗體陽性率并驗證布魯菌病凈化示范場的凈化效果進行評價，采用動物布魯菌間接ELISA（I-ELISA）及競爭ELISA（C-ELISA）抗體檢測試劑盒，對東北區(qū)奶牛傳染病血清樣本庫（國家奶牛產業(yè)技術體系基礎任務）中2009-2011年間采集自黑龍江省不同地區(qū)規(guī)?；膛觯ò▋艋痉秷觯┑? 830份奶牛血清進行了回顧性檢測與分析，以期為布魯菌病的防制提供參考依據。

1 材料與方法

被檢血清：國家奶牛產業(yè)技術體系東北區(qū)奶牛傳染病血清樣本庫黑龍江省部分樣本，共計4 830份。

檢測試劑：布魯菌I-ELISA及C-ELISA血清抗體檢測試劑盒，購自哈爾濱平河生物制品有限公司。檢測程序：按照試劑盒操作說明書與相關文獻進行[1-3]。血清樣本先用I-ELISA方法進行檢測，I-ELISA檢測為陽性的樣本，再采用C-ELISA方法進行檢測，經C-ELISA方法檢測出的陽性樣本，最終結果定為陽性。

2 結果

2009-2011年各年度的血清抗體檢測結果見表1～表3。4830份奶牛血清樣本經I-ELISA初檢，共檢測出布魯菌抗體陽性血清739份。初檢出的陽性血清再經C-ELISA檢測，最終確定的布魯菌抗體陽性血清592份，陽性率為0～10.88%。表1～表3中標記為E*、F*的牛場為兩個布魯菌病凈化牛場，對其2009-2011年連續(xù)3年的跟蹤監(jiān)測結果表明，這兩個牛場始終保持在凈化水平，其布魯菌病防控經驗值得借鑒。

表1 2009年7個奶牛場血清樣本布魯菌病血清抗體陽性檢測結果

表1中的D牛場具有高布魯菌病感染率（10.88%），此牛場送檢的465份虎紅陽性血清，經I-ELISA檢測后，陽性數為327，再經C-ELISA確診后，陽性數實際為272，牛場按此結果進行控制，流產率已大幅降低。以上結果可證實高感染背景對靈敏度高的篩選方法影響更大[5]，因而C-ELISA確診程序在此類牛場中顯得尤為重要。

表2 2010年6個奶牛場血清樣本布魯菌病血清抗體陽性檢測結果

表3 2011年7個奶牛場血清樣本布魯菌病血清抗體陽性檢測結果

圖1為2011-2012年度對2個規(guī)模化奶牛場布魯菌病血清抗體的10次監(jiān)測結果。經過2011年6月-11月的5次“檢疫+撲殺”的凈化流程后，這2個規(guī)?；膛龅牟剪斁蹇贵w陽性率逐漸下降為零，且2011年12月與2012年的1月的兩次連續(xù)檢測陽性率均為零。在2012年6月、12月的兩次檢測中陽性率也為零，說明這2個規(guī)?；鲆堰_到凈化水平，其布魯菌病凈化程序與防控措施適宜。

圖1 黑龍江省2個規(guī)模化奶牛場2011-2012年布魯菌病血清抗體監(jiān)測結果

3 討論

黑龍江省布魯菌病疫情發(fā)病情況，從已公開文獻上看也不容樂觀。2005年朱占波[5]從黑龍江省4個奶牛場的流產胎兒體內分離到6株流產型布魯菌，對4個奶牛場的104頭流產母牛進行血清學檢測，其中85頭布魯菌病血清抗體顯陽性，疑似11頭。楊華[6]等對黑龍江省2007-2008年奶牛布魯菌病流行情況進行了血清學調查，共檢測血清6 163份，其中陽性97份，陽性率為1.57%。

此次基于奶牛血清樣本庫的布魯菌病血清抗體陽性率的回顧性檢測結果顯示，黑龍江部分規(guī)?；膛霾剪斁⊙蹇贵w陽性率為0～10.88%之間，總體陽性率較低，但仍有個別奶牛場陽性率較高，這是由于個別奶牛場主疫病防控意識淡薄，牛場檢疫、防疫工作不到位所致。2009-2011年間對E*、F*兩個布魯菌病凈化牛場的跟蹤監(jiān)測結果表明，這兩個布魯菌病凈化牛場能維持本場的凈化水平，說明它們所采取的“檢疫+撲殺”的布魯菌病凈化程序與防控措施是卓有成效的，具有實踐意義。

Ⅰ與Ⅱ2個規(guī)?；膛龅牟剪斁⊙蹇贵w持續(xù)監(jiān)測顯示，5次檢測與捕殺程序使其感染率逐漸下降為零，并在隨后為期一整年的5次跟蹤監(jiān)測中感染率均為零，說明這2個規(guī)模化奶牛場已達到布魯菌病凈化標準，這2個奶牛場采用的“檢疫+撲殺”的布魯菌病凈化程序具有實踐意義。

布魯菌病的凈化是一項持久的工作，OIE承認的幾個無布魯菌病國家如加拿大、澳大利亞等國的布魯菌病根除戰(zhàn)役均進行了30～50年才得以完成[7]。因此，黑龍江省等15省市要在2015年達到布魯菌病控制標準，布病凈化工作仍然緊迫而繁重。依據上述布魯菌病凈化牛場的經驗，只要程序得當，輔以“壯士斷腕以全質”的決心執(zhí)行，相信我國的布魯菌病短期內控制與長期根除的目標是科學可行的。

[1] Matope G，Muma JB A，Nielsen K，Skjerve，etal.E.Evaluation of sensitivity and specificity of RBT，c-ELISA and fluorescence polarisation assay for diagnosis of brucellosis in cattle using latent class analysis[J].Vet Immunol Immunopathol，2011，141（1-2）：58-63.

[2]Godfroid J，Nielsen K，Saegerman C.Diagnosis of brucellosis in livestock and wildlife[J].CroatMed J，2010，51（4）：296-305.

[3]Grushina T，Atshabar B Yu W，Nielsen K，et al.Universal indirect enzyme-linked immunosorbent assay formonitoring of human and animal brucellosis in Kazakhstan[J].Vaccine，2010，28（5）：46.

[4]Nielsen K，Yu W L.Serological diagnosis of brucellosis[J].Prilozi，2010，31（1）：65-89.

[5]朱戰(zhàn)波，崔玉東，樸范澤，等.流產布氏桿菌的檢測及生物型PCR鑒定[J].中國病原生物學雜志，2008，08：574-576.

[6]楊華，高明春，王君偉，等.黑龍江省部分奶牛場奶牛布氏桿菌病血清學調查[J].中國獸醫(yī)雜志，2010，46（9）：36-37.

[7] McDonald W L，Jamaludin R，Mackereth G，et al.Characterization of a Brucella sp.strain as amarine-mammal type despite isolation from a patientwith spinal osteomyelitis in New Zealand[J].JClin Microbiol，2006，44：63-70.