王衛(wèi)遠(yuǎn) 李志軍 王濤 李俊芳

1.河北省邯鄲市中心醫(yī)院免疫科，河北邯鄲056001；2.蚌埠醫(yī)學(xué)院第一附屬醫(yī)院風(fēng)濕免疫科，安徽蚌埠233004

TOLL樣受體2及4在脊柱關(guān)節(jié)炎患者外周血CD14+單核細(xì)胞表面的表達(dá)及意義

王衛(wèi)遠(yuǎn)1李志軍2王濤2李俊芳1

1.河北省邯鄲市中心醫(yī)院免疫科，河北邯鄲056001；2.蚌埠醫(yī)學(xué)院第一附屬醫(yī)院風(fēng)濕免疫科，安徽蚌埠233004

目的觀察脊柱關(guān)節(jié)炎（SpA）患者外周血CD14+單核細(xì)胞Toll樣受體2（TLR2）和Toll樣受體4（TLR4）的表達(dá)變化及其與臨床指標(biāo)的關(guān)系，探討其在SpA的發(fā)病中的作用。方法選擇2008年7月～2009年1月蚌埠醫(yī)學(xué)院第一附屬醫(yī)院風(fēng)濕免疫科確診SpA患者71例，并選擇30名健康體檢者作為正常對照組。采用流式細(xì)胞術(shù)檢測外周血CD14+單核細(xì)胞表面TLR2、TLR4陽性細(xì)胞的表達(dá)的百分率及平均熒光強(qiáng)度（MFI）。根據(jù)BASDAI評分將SpA患者組分為活動組54例（BASDAI評分＞4分）和非活動組17例（BASDAI評分≤4分），分別比較活動組、非活動組和正常對照組三組間TLR2、TLR4陽性細(xì)胞表達(dá)百分率和MFI的差異，并分析TLR2、TLR4陽性細(xì)胞表達(dá)百分率和MFI與相關(guān)臨床和實(shí)驗(yàn)室指標(biāo)的相關(guān)性。結(jié)果TLR2+外周血CD14+單核細(xì)胞的表面表達(dá)百分率在活動組、非活動組及正常對照組間差異無統(tǒng)計學(xué)意義（均P＞0.05）。TLR2+外周血CD14+單核細(xì)胞表面MFI在各組間差異無統(tǒng)計學(xué)意義（均P＞0.05）。TLR4+外周血CD14+單核細(xì)胞的表面表達(dá)的百分率在活動組和非活動組[（42.5±11.1）%、（32.9±9.4）%]與正常組相比[（22.3±7.5）%]，差異有高度統(tǒng)計學(xué)意義（P＜0.01），活動組和非活動組之間相比差異有高度統(tǒng)計學(xué)意義（P＜0.01）。TLR4+外周血CD14+單核細(xì)胞的MFI在各組間比較差異無統(tǒng)計學(xué)意義（均P＞0.05）。TLR4+外周血CD14+單核細(xì)胞的表面表達(dá)的百分率與ESR和IgA呈正相關(guān)（P＜0.05），TLR2+外周血CD14+單核細(xì)胞的表面表達(dá)的百分率與ESR和IgG呈正相關(guān)（P＜0.05）。結(jié)論TLR4在SpA患者外周血CD14+單核細(xì)胞表面表達(dá)有顯著性變化，提示TLR4可能與SpA發(fā)生及病情存在一定的關(guān)聯(lián)，TLR4和TLR2的表達(dá)可作為疾病活動度的參考指標(biāo)。

Toll樣受體；脊柱關(guān)節(jié)炎；單核細(xì)胞；流式細(xì)胞術(shù)

脊柱關(guān)節(jié)炎（spondyloarthropathy，SpA）是一組具有共同特征的相互關(guān)聯(lián)的侵犯脊柱、外周關(guān)節(jié)和關(guān)節(jié)周圍組織的多系統(tǒng)炎性疾病的總稱，嚴(yán)重者可發(fā)生脊柱畸形和關(guān)節(jié)強(qiáng)直，其病因至今尚不明確。有研究表明，感染可能是其發(fā)病因素之一。目前普遍認(rèn)為，微生物可能通過感染宿主使其產(chǎn)生免疫應(yīng)答促使SpA發(fā)病。Toll樣受體（Toll-like receptors，TLRs）作為一種模式識別受體，在抗感染與免疫信號的轉(zhuǎn)導(dǎo)過程中起重要作用，TLRs激活后引發(fā)細(xì)胞的信號轉(zhuǎn)導(dǎo)最終導(dǎo)致炎性介質(zhì)的釋放，啟動炎癥和適應(yīng)性免疫應(yīng)答。目前的研究認(rèn)為，TLRs在多種免疫介導(dǎo)性疾病中發(fā)揮了重要作用，SpA也是一種免疫性疾病，但目前有關(guān)TLRs與SpA的研究甚少[1]。本研究采用流式細(xì)胞術(shù)測定了SpA患者CD14+單核細(xì)胞表面TLR2和TLR4表達(dá)的百分率及平均熒光強(qiáng)度（mean fluorescence intension，MFI），并與正常對照進(jìn)行比較。同時，分析SpA患者CD14+單核細(xì)胞表面TLR2和TLR4表達(dá)的百分率與有關(guān)臨床和實(shí)驗(yàn)室指標(biāo)的相關(guān)性，現(xiàn)報道如下：

1 資料與方法

1.1 一般資料

選擇2008年7月～2009年1月蚌埠醫(yī)學(xué)院第一附屬醫(yī)院風(fēng)濕免疫科確診的SpA患者71例，SpA患者診斷均符合1991年ESSC制訂的SpA分類標(biāo)準(zhǔn)[2]，其中，強(qiáng)直性脊柱炎、銀屑病關(guān)節(jié)炎、反應(yīng)性關(guān)節(jié)炎、幼年脊柱關(guān)節(jié)炎、未分化脊柱關(guān)節(jié)炎又符合各自診斷標(biāo)準(zhǔn)，均有CT證實(shí)的骶髂關(guān)節(jié)炎。排除嚴(yán)重肝炎、腫瘤和其他自身免疫病患者，且3個月內(nèi)未使用激素、免疫抑制劑和生物制劑。所有患者中男61例，女10例；年齡12～54歲，平均（27±10）歲；其中，強(qiáng)直性脊柱炎49例，反應(yīng)性關(guān)節(jié)炎4例，幼年脊柱關(guān)節(jié)炎8例，銀屑病關(guān)節(jié)炎2例，未分化脊柱關(guān)節(jié)炎8例。所有SpA患者參照BASDAI評分評定病情活動，分為活動組54例（BASDAI評分＞4分）和非活動組17例（BASDAI評分≤4分）。選擇蚌埠醫(yī)學(xué)院第一附屬醫(yī)院健康志愿者30名作為正常對照，其中，男26例，女4例，年齡18～41歲，平均（26±6）歲，均無SpA既往史和家族史，排除其他自身免疫性疾病和感染性疾病表現(xiàn)。各組間性別和年齡等一般情況比較，差異無統(tǒng)計學(xué)意義（P＞0.05），具有可比性。

1.2 試劑與儀器

熒光素FITC小鼠抗人CD14單抗（克隆號H1221購自天津協(xié)和干細(xì)胞基因工程有限公司），TLR2-PE（克隆號TL2.1，購自Ebioscience公司），TLR2-PE（克隆號TTA123，購自Ebioscience公司），流式細(xì)胞儀（美國B-D公司FACS Calibur），氯化氨溶血劑和PBS洗液為蚌埠醫(yī)學(xué)院免疫學(xué)實(shí)驗(yàn)室自行配制。

1.3 方法

1.3.1 流式細(xì)胞染色抽取患者和正常人肘靜脈血2 mL于抗凝管中，每份標(biāo)本分裝5管，從第2管開始，依次加入CD14-FITC 4 μL、TLR2-PE 4 μL或TLR4-PE 4 μL于管底，用鼠IgG2a抗體作為同型對照；然后加30 μL的抗凝全血混勻，置室溫避光孵育20 min，加入3 mL/管氯化氨溶血劑，充分混勻后室溫避光15 min，以破壞紅細(xì)胞。將試管置于離心機(jī)，以1500 r/min離心5 min，吸去上清液；2 mL/管PBS液（pH 7.2）洗滌2次，1500 r/min離心5 min，吸去上清液。加入PBS液（pH 7.2）300 μL，流式細(xì)胞術(shù)檢測。同樣處理的細(xì)胞設(shè)置未加熒光抗體對照管，用小鼠Ig2a-PE作表面染色的同型對照管，僅做表面染色抗人CD14-FITC單色熒光抗體染色作為調(diào)試流式細(xì)胞儀熒光補(bǔ)償管。

1.3.2 流式細(xì)胞術(shù)檢測細(xì)胞表面受體數(shù)據(jù)獲取及分析在流式細(xì)胞儀上用Cellquest軟件檢測待測樣品，利用未染色管和單熒光抗體染色管設(shè)置光電倍增管（PMT）電壓和熒光補(bǔ)償，利用同型對照管區(qū)分是否有非特異性染色，利用未染色管和同型對照管設(shè)置陰陽界限，然后對待測樣品進(jìn)行檢測。每管測定獲取105個細(xì)胞的數(shù)據(jù)。在利用Cellquest軟件分析結(jié)果時，首先在前向散射光（forward light scatter，F(xiàn)SC）和側(cè)向散射光（side light scatter，SSC）點(diǎn)陣圖上劃定單核細(xì)胞區(qū)域R1（region 1），然后在FL-1（CD14+-FITC）和FL-2（TLR2-PE或TLR4-PE）點(diǎn)陣圖上設(shè)定CD14陽性細(xì)胞群為R2，通過設(shè)門G2=R1*R2選擇雙陽性單核細(xì)胞。選擇FL-2為X軸，G2為門的直方圖，分析TLR2和TLR4的表達(dá)百分率及MFI。

1.4 統(tǒng)計學(xué)方法

采用SPSS 17.0統(tǒng)計學(xué)軟件進(jìn)行數(shù)據(jù)分析，計量資料數(shù)據(jù)用均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差（x±s）表示，多組間比較采用單因素方差分析，組間兩兩比較采用SNK-q檢驗(yàn)；相關(guān)分析采用Pearson相關(guān)分析。以P＜0.05為差異有統(tǒng)計學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 各組CD14+單核細(xì)胞表面TLR2/4的表達(dá)水平比較

2.1.1 TLR2、TLR4在SpA外周血CD14+單核細(xì)胞表面陽性率比較TLR2在SpA活動組、非活動組外周血CD14+單核細(xì)胞表面陽性率與正常組相比，差異無統(tǒng)計學(xué)意義（P＞0.05），活動組與非活動組相比差異無統(tǒng)計學(xué)意義（P＞0.05）。TLR4在SpA活動組、非活動組外周血CD14+單核細(xì)胞表面陽性率與正常組相比，差異有高度統(tǒng)計學(xué)意義（P＜0.01），活動組與非活動組相比差異有高度統(tǒng)計學(xué)意義（P＜0.01）。見表1。

表1 各組CD14+單核細(xì)胞表面TLR2/4的表達(dá)水平（x±s）

2.1.2 TLR2、TLR4在SpA外周血CD14+單核細(xì)胞表面MIF的差異TLR2、TLR4在SpA活動組、非活動組外周血CD14+單核細(xì)胞表面MIF與正常對照組相比，差異無統(tǒng)計學(xué)意義（P＞0.05），活動組與非活動組相比差異無統(tǒng)計學(xué)意義（P＞0.05）。見表1。

2.2 TLR2、TLR4的表達(dá)水平與臨床指標(biāo)的相關(guān)性

SpA患者外周血CD14+單核細(xì)胞TLR2和TLR4的表達(dá)與臨床指標(biāo)相關(guān)性分析結(jié)果顯示，TLR4表達(dá)水平與ESR和IgA呈正相關(guān)（P＜0.05），TLR2表達(dá)水平與ESR和IgG、IgA呈正相關(guān)（P＜0.05）；以上結(jié)果提示：SpA患者外周血單核細(xì)胞TLR2、TLR4表達(dá)水平可作為判斷SpA患者疾病活動度的參考指標(biāo)。見表2、3。

表2TLR2的表達(dá)水平與臨床指標(biāo)的相關(guān)性

表3TLR4的表達(dá)水平與臨床指標(biāo)的相關(guān)性

3 討論

SpA最典型的疾病是強(qiáng)直性脊柱炎，還包括反應(yīng)性關(guān)節(jié)炎、銀屑病關(guān)節(jié)炎、炎性腸病關(guān)節(jié)炎、幼年脊柱關(guān)節(jié)炎及未分化脊柱關(guān)節(jié)炎，起病隱匿，致殘率高。目前研究認(rèn)為，SpA是一種與HLA-B27不同程度相關(guān)、細(xì)菌感染誘發(fā)及機(jī)體免疫異常等多因素參與的自身免疫性疾病[3]。盡管SpA發(fā)病中觸發(fā)感染的證據(jù)甚少，但天然免疫應(yīng)答和獲得性免疫應(yīng)答在脊柱關(guān)節(jié)炎的形成中均起作用[4]。TLRs是近年來發(fā)現(xiàn)的機(jī)體感知微生物病原體病激活細(xì)胞直接產(chǎn)生免疫的天然免疫受體，TLR可以防止細(xì)菌感染宿主，但當(dāng)不適當(dāng)?shù)姆置?，它能?dǎo)致慢性炎癥和自身免疫性疾病。它的發(fā)現(xiàn)使人們重新審視了天然免疫在SpA發(fā)生機(jī)制中的作用。

TLRs是進(jìn)化高度保守的Ⅰ型跨膜蛋白，目前在人類已有13種TLR（TLR1～TLR13）被鑒定出[5]TLR1、2、3、4、5和6表達(dá)在細(xì)胞表面膜，7、8和9存在于細(xì)胞內(nèi)的膜內(nèi)。TLR2、TLR4是研究最廣的受體，前者主要表達(dá)在單核細(xì)胞及樹突細(xì)胞上，識別G+菌的肽聚糖；后者表達(dá)于單核細(xì)胞、巨噬細(xì)胞、上皮細(xì)胞和內(nèi)皮細(xì)胞，識別G-菌細(xì)胞壁的主要成分脂多糖，在天然免疫中，CD14與TLR2/TLR4作為免疫受體，它通過相互間協(xié)同作用不但可以識別病原體所特有的病原相關(guān)分子模式（pathogen associated molecular patterns，PAMPs），而且還可特異性識別特定內(nèi)源性損傷相關(guān)分子模式（danger associated molecular patterns，DAMPs）。主要通過MyD88依賴和MyD88非依賴兩條途徑[6-7]：MyD88依賴途徑是目前研究較為清楚的，TLR2/4通過該途徑尚需MAL協(xié)助MyD88募集下游IL-1受體相關(guān)激酶家族（IL-1 receptor-associated kinase family，IRAK）兩個成員：IRAK-4和IRAK-1，相繼磷酸化，活化后的IRAK-1與MyD88解離，進(jìn)入胞漿募集可溶性TRAF6（TNFR-associated factor 6），TRAF6在泛素偶聯(lián)激酶（ubiqiuitin-conjugating enzyme）作用下形成復(fù)合物，該復(fù)合物可以激活TAK1激酶，活化的TAK1激酶通過激活I(lǐng)KK復(fù)合物活化轉(zhuǎn)錄因子NF-κB和（或）AP-1，引發(fā)促炎細(xì)胞因子基因的轉(zhuǎn)錄和表達(dá)，釋放細(xì)胞因子如IL-1、IL-6和TNF-α等。簡言之，相互識別后通過耦聯(lián)信號傳導(dǎo)途徑，激活天然免疫細(xì)胞，最終引起一系列的炎性反應(yīng)，而且其為激活獲得性免疫提供共刺激信號。因此，TLR是連接天然免疫與獲得性免疫的危險信號受體，可以通過TLR引發(fā)免疫應(yīng)答，參與某些免疫性疾病的發(fā)生、發(fā)展[8-9]。

Wright等[10]運(yùn)用蛋白組學(xué)方法比較強(qiáng)直性脊柱炎（AS）患者和類風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎（RA）患者與正常人外周血單核細(xì)胞蛋白的表達(dá)組成差異，結(jié)果顯示在AS和RA患者中遷移的單核細(xì)胞、TLRs信號傳導(dǎo)等與正常人顯著不同。最近，Assassi等[11]展示了使用全血基因表達(dá)分析表明，TLR4和5的表達(dá)顯著增加，但不是在健康對照組或系統(tǒng)性紅斑狼瘡患者。印證了單核細(xì)胞的TLRs信號通路在SpA的發(fā)病中扮有重要角色。De Rycke等[12]和Yang等[13]已證明TLR2和TLR4在SpA患者血清中、外周血單個核細(xì)胞或滑膜組織顯著升高，而且其疾病的活動性與TLR4的上調(diào)有關(guān)，當(dāng)這些患者應(yīng)用抗TNF-α阻滯劑治療，TLR2、TLR4顯著降低，這一現(xiàn)象表明免疫細(xì)胞內(nèi)存在多層次不同靶點(diǎn)的負(fù)向調(diào)控，可以對TLR4所介導(dǎo)的信號通路的開啟和傳導(dǎo)起到精確的負(fù)調(diào)控作用，從而抑制TLR4信號轉(zhuǎn)導(dǎo)[14]。雖然入選的患者無一例應(yīng)用生物制劑治療，但TLR4的上調(diào)仍提示它可能參與SPA的病理過程。

本研究采用流式細(xì)胞術(shù)檢測71例脊柱關(guān)節(jié)炎患者外周血CD14+單核細(xì)胞上TLR2和TLR4的表達(dá)，結(jié)果顯示，脊柱關(guān)節(jié)炎患者外周血和TLR4在CD14+單核細(xì)胞陽性率高于健康對照組，且活動期TLR4表達(dá)強(qiáng)于靜止期患者。這種高表達(dá)可能與其接受感染因子刺激有關(guān)，進(jìn)一步證明感染作為誘因參與SpA的發(fā)病，TLR4的高表達(dá)也初步提示TLR4及其介導(dǎo)的天然免疫應(yīng)答與SpA發(fā)生發(fā)展存在一定相關(guān)性。而非活動期患者TLR4的表達(dá)雖然低于活動期，但也明顯高于健康對照組，推測其不僅參與了SpA的起病階段，而且在脊柱關(guān)節(jié)炎后期病情進(jìn)展中也有重要作用。提示TLR4信號通路參與SpA的發(fā)病，活化的單核細(xì)胞遷移至病變的關(guān)節(jié)內(nèi)，轉(zhuǎn)化成巨噬細(xì)胞，通過TLR識別關(guān)節(jié)內(nèi)的PAMP，活化JNK、p38和NF-κB信號傳導(dǎo)通路，啟動機(jī)體的炎性反應(yīng)，并活化獲得性免疫系統(tǒng)，合成和釋放許多炎癥因子，后者除了聚集在關(guān)節(jié)滑膜上外，還會激活體內(nèi)配體產(chǎn)生免疫應(yīng)答，最終導(dǎo)致關(guān)節(jié)組織和骨組織的破壞[15]。導(dǎo)致SpA炎性反應(yīng)慢性持續(xù)發(fā)展。

本研究顯示，TLR2的表達(dá)在SpA患者組和正常對照組相比無顯著性差異。然而，Candia等[16]觀察TLR2和TLR4受體在PsA患者單核細(xì)胞來源的抗原提呈細(xì)胞的表達(dá)發(fā)現(xiàn)，來自于PsA患者未成熟樹突狀細(xì)胞TLR2表達(dá)升高，而成熟樹突狀細(xì)胞和單核細(xì)胞與正常對照和類風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎患者相比無顯著性差異。TLR4在任何類型細(xì)胞中的表達(dá)無明顯差異，上清液中細(xì)胞因子測定顯示為Th1型，多數(shù)表達(dá)IL-2、TNF-α及IFN-γ，Western blot分析同樣證實(shí)TLR2表達(dá)增加，上調(diào)的TLR2為天然免疫在PsA中發(fā)病機(jī)制提供了支持依據(jù)。Florence等[17]研究TLR2和TLR4基因多態(tài)性在沙門腸道桿菌引發(fā)的ReA中發(fā)現(xiàn)，與正常人比較TLR4的變異體無顯著性差異，而TLR2（753Q）變異個體易進(jìn)展為關(guān)節(jié)炎并具有關(guān)節(jié)外表現(xiàn)，而TLR2的另外一變異體（631H）男性感染的關(guān)節(jié)外表現(xiàn)相關(guān)。最近報道由Myles等[18]發(fā)現(xiàn)經(jīng)LPS刺激后在肌腱端炎相關(guān)的幼年慢性關(guān)節(jié)炎中發(fā)現(xiàn)TLR2和TLR4在外周血和滑夜中單核細(xì)胞表達(dá)水平增高，并且與健康對照組相比產(chǎn)生較多的IL-6和MMP-3。上述文獻(xiàn)支持單核細(xì)胞通過TLR2信號轉(zhuǎn)導(dǎo)路徑參與SpA的發(fā)病，與本實(shí)驗(yàn)結(jié)果不符，分析原因可能與本次入組的銀屑病關(guān)節(jié)炎及反應(yīng)性關(guān)節(jié)炎、幼年脊柱關(guān)節(jié)炎患者偏少相關(guān)，增加樣本量及更進(jìn)一步的分組分層比較也許可以得到相同的結(jié)果。人們通過小鼠關(guān)節(jié)炎模型發(fā)現(xiàn)，在類風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎起始階段通過TLR2活化促進(jìn)血管的發(fā)生[19]，便于炎癥細(xì)胞的黏附和侵襲，導(dǎo)致關(guān)節(jié)軟骨和骨組織的破壞，在后期TLR4增加金屬蛋白酶介導(dǎo)的破壞作用和破骨細(xì)胞形成[20]，導(dǎo)致慢性破壞性關(guān)節(jié)炎[21]。TLR2與TLR4在類風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎病情進(jìn)展過程中的相互轉(zhuǎn)換可能是其中原因之一，是否能夠在脊柱關(guān)節(jié)炎中得到合理解釋尚需更多試驗(yàn)佐證。

ESR和血漿CRP是反映各種炎癥活動的急性時相反應(yīng)物，臨床研究者把ESR和CRP作為判斷治療后SpA患者病情是否穩(wěn)定的實(shí)驗(yàn)室指標(biāo)之一。TLR4＋和TLR2＋細(xì)胞的比例均與ESR呈正相關(guān)，這提示TLR4和TLR2表達(dá)與SpA病情活動具有相關(guān)性。同時，TLR2＋細(xì)胞比例與血清IgG定量呈正相關(guān)，TLR4＋細(xì)胞的表達(dá)與血清IgA定量呈正相關(guān)，表明SpA患者存在體液免疫亢進(jìn)和急性炎癥或組織損傷。因此，TLR2和TLR4表達(dá)水平可能作為評論SpA患者病情的生物學(xué)標(biāo)志，阻斷這種結(jié)合可能減輕患者的臨床癥狀，但還有很多潛在的機(jī)制未能了解和發(fā)現(xiàn)，尚需要更深入的研究和發(fā)現(xiàn)。

綜上所述，臨床上觀察單核細(xì)胞表面TLR2和TLR4的變化可以從一個新的角度客觀地反映機(jī)體的免疫狀態(tài)，機(jī)體激活TLR4受體的表達(dá)，產(chǎn)生天然免疫和炎性反應(yīng)，啟動特異性免疫應(yīng)答，參與SpA的發(fā)病。

[1]毋靜，梁婉怡，鄧家鑫，等.阿托伐他汀對強(qiáng)直性脊柱炎患者外周血單個核細(xì)胞體外干預(yù)后Toll樣受體2、Toll樣受體4的表達(dá)變化研究[J].上海免疫學(xué)雜志，2012，9（1）：25-27.

[2]Dougados M，Van Der Linden S，Juhlin R，et al.The European Spondylarthropathy Study Group preliminary criteria for the classification of spondylarthropathy[J].Arthritis Rheum，1991，34（10）：1218-1227.

[3]黃烽，朱劍，張江林，等.強(qiáng)直性脊柱炎[M].北京：人民衛(wèi)生出版社，2011：10-17.

[4]武加標(biāo)，李志軍，李柏青，等.Toll樣受體4在強(qiáng)直性脊柱炎外周血單核細(xì)胞中的表達(dá)及意義[J].實(shí)用醫(yī)學(xué)雜志，2010，26（21）：3907-3909.

[5]Moresco EM，LaVine D，Beutler B.Toll-like receptors[J]. Curr Biol，2011，21（13）：488-493.

[6]Hopkins PA，Sriskandan S.Mammalian Toll-like receptors：to immunity and beyond[J].Clin Exp Immunol，2005，140（3）：395-407.

[7]Kawai T，Akira S.Signaling to NF-kappaB by Toll-like receptors[J].Trends Mol Med，2007，13（11）：460-469.

[8]McGonagle D，Lories RJ，Tan AL，et al.The concept of a“synovio-entheseal complex”and its implications for understanding joint inflammation and damage in psoriatic arthritis and beyond[J].Arthritis Rheum，2007，56：2482-2491.

[9]LacosteMG，CargneluttiDE，TamashiroH，etal.Studyofpredominant bacterial antigens triggering antibody response in Salmonella reactive arthritis：apropos of a case[J].Jpn J Infect Dis，2007，60（4）：220-224.

[10]Wright CA，Edelmann M，Digleria K，et al.Ankylosing spondylitis monocytes show upregulation of proteins involved in inflammation and the Ubiquitin Proteasome pathway[J].Ann Rheum Dis，2008，10：1136.

[11]Assassi S，Reveille JD，Arnett FC.Whole-blood gene expression profiling in ankylosing spondylitis shows upregulation of toll-like receptor 4 and 5[J].The Journal of Rheumatology，2011，38（1）：87-98.

[12]De Rycke L，Vandooren B，Kruithof E，et al.Tumor necrosis factor α blockade treatment down-modulates the increased systemic and local expression of Toll-like receptor 2 and Toll-like receptor 4 in spondylarthropathy[J]. Arthritis and Rheumatism，2005，152（7）：2146-2158.

[13]Yang ZX，Liang Y，Zhu Y，et al.Increased expression of Toll-like receptor 4 in peripheral blood leucocytes and serum levels of some cytokines in patients with ankylosing spondylitis[J].Clinical and Experimental Immunology，2007，149（1）：48-55.

[14]Zeytun A，Chaudhary A，Pardington P，et al.Induction of cytokines and chemokines by Toll-like receptor signaling：strategies for control of inflammation[J].Crit Rev Immunol，2010，30（1）：53-67.

[15]Fitzgerald KA，Palsson-McDermott EM，Bowie AG，et al. Mal（MyD88-adapter-like）is required for Toll-like receptor-4 signal transduction[J].Nature，2001，413（6851）：78-83.

[16]Candia L，Marquez J，Hernandez C，et al.Toll-like receptor-2 expression is upregulated in antigen-presenting cells from patients with psoriatic arthritis：a pathogenic role for innate immunity[J].J Rheumatol，2007，34（2）：374-379.

[17]Florence WL，Tsui，Nancy X，et al.Toll-like receptor 2 variants are associated with acute reactive arthritis[J]. Arthritis Rheum，2008，58（11）：3436-3438.

[18]Myles A，Aggarwal A.Expression of Toll-like receptors 2 and 4 is increased in peripheral blood and synovial fluid monocytes of patients with enthesitis-related arthritis subtype of juvenile idiopathic arthritis[J].Rheumatology：Oxford，2011，50（3）：481-488.

[19]Huang Q，Ma Y，Adebayo A.Increased macrophage activation mediated through toll-like receptors in rheumatoid arthritis[J].Arthritis Rheum，2007，56（7）：2192-2201.

[20]Saber T，Veale DJ，Balogh E，et al.Toll-like receptor 2 induced angiogenesis and invasionis mediated through the Tie2 signalling pathway in rheumatoid arthritis[J].PLoS One，2011，6（8）：e23540.

[21]Abdollahi-Roodsaz S，Joosten LA，Helsen MM，et al.Shift from toll-likereceptor2（TLR-2）toward TLR-4 Dependency in the erosive stage of chronic strep to coccal cell wall arthritis coincident with TLR-4-mediated interleukin-17 production[J].Arthritis Rheum，2008，58（12）：3753-3764.

Expression and significance of Toll-like receptor 2 and Toll-like receptor 4 on CD14+peripheral blood monocyte cells surface of patients with spondyloarthropathy

WANG Weiyuan1LI Zhijun2WANG Tao2LI Junfang1
1.Department of Rheumatology,Handan Central Hospital,Hebei Province,Handan056001,China;2.Department of Rheumatology,the First Affiliated Hospital of Bengbu Medical College,Anhui Province,Bengbu233004,China

Objective To investigate the effect and possible mechanism of Toll-like receptor-2(TLR2)and Toll-like receptor-4(TLR4)in the development and progress of spondyloarthropathy.Methods 71 SpA patients in the First Affiliated Hospital of Bengbu Medical College from July 2008 to January 2009 were selected,and 26 cases of healthy controls were selected.SpA patients of 54 cases and 17 cases were divided into the active stage group and stable stage group,according to BASDAI score.Flow cytometry analysis was used to detect the expression of CD14+monocyte surface TLR2/4 positive cells,the TLR2 and TLR4 expression rate,the mean fluorenscence intensity(MFI)and the related clinical and laboratory indicators.Results There was no significant differences in the expression rate and MFI of TLR2 on CD14+monocyte in the peripheral blood of SpA patients among the active stage group,stable stage group and healthy control group(P＞0.05).The expression rates of TLR4 in the CD14+monocytes were[(42.5±11.1)%]and [(32.9±9.4)%]respectively in the active stage group and stable stage group,both were higher than that of control group [(22.3±7.5)%],there were significant differences among the three groups(P＜0.01),there was also significant difference between the active stage group and stable stage group(P＜0.01).There was no significant differences in MFI of TLR4 on CD14+monocyte in the peripheral blood of SpA patients among the active stage group,stable stage group and healthy control group(P＞0.05).The expressiong rate of TLR4+correlated positively with ESR and IgA(P＜0.05),the expressiong rate of TLR2+correlated positively with ESR and IgG(P＜0.05).Conclusion The expression pattern of TLR4 on CD14+peripheral blood monocyte cells surface in SpA patients has significant changes.The results indicate that TLR4 play an important role in immune reaction of SpA.The expression of TLR2 and TLR4 in peripheral blood monocytes may help in assessing disease activity in SpA patients.

Toll like receptor;Spondyloarthropathy;Mononcyter;Flow cytometry

R593.23

A

1673-7210（2014）09（a）-0062-05

2014-05-23本文編輯：程銘）