駱 姍，張 培，徐月敏，劉曄瑋，邸多隆

（1.蘭州大學(xué)公共衛(wèi)生學(xué)院營(yíng)養(yǎng)與食品衛(wèi)生學(xué)研究所，甘肅蘭州730000；2.中國(guó)科學(xué)院蘭州化學(xué)物理研究所，中科院西北特色植物資源化學(xué)重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室，甘肅省天然藥物重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室，甘肅蘭州730000）

基于氣相色譜指紋圖譜技術(shù)的花生油質(zhì)量評(píng)價(jià)方法研究

駱 姍1，2，張 培1，2，徐月敏1，2，劉曄瑋1，*，邸多隆2，*

（1.蘭州大學(xué)公共衛(wèi)生學(xué)院營(yíng)養(yǎng)與食品衛(wèi)生學(xué)研究所，甘肅蘭州730000；2.中國(guó)科學(xué)院蘭州化學(xué)物理研究所，中科院西北特色植物資源化學(xué)重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室，甘肅省天然藥物重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室，甘肅蘭州730000）

借鑒中藥指紋圖譜的研究思路，建立花生油氣相色譜（GC）指紋圖譜。在優(yōu)選的色譜條件下，從16個(gè)樣品的色譜圖利用相似度軟件篩選出8個(gè)共有峰，建立了花生油指紋圖譜，通過(guò)方法學(xué)驗(yàn)證，8個(gè)共有峰精密度、穩(wěn)定性的RSD分別小于3.1%和5.1%。同時(shí)，采用氣相色譜-質(zhì)譜技術(shù)（GC-MS）對(duì)8個(gè)共有峰進(jìn)行化學(xué)歸屬，并利用歸一化法確定其相對(duì)含量。本文建立的方法簡(jiǎn)單、靈敏，為鑒別花生油真?zhèn)魏驮u(píng)價(jià)花生油的品質(zhì)提供技術(shù)參考。

花生油，氣相色譜，氣相色譜-質(zhì)譜，指紋圖譜

食用植物油是我國(guó)居民脂肪攝入的主要來(lái)源，花生油以其獨(dú)特的香味和較高的營(yíng)養(yǎng)價(jià)值，已經(jīng)成為我國(guó)三大食用油之一。研究表明，花生油中不飽和脂肪酸含量較高，平均在45%，僅次于橄欖油，高于大豆油、葵花籽油和菜籽油等[1]。此外，花生油中還含有白藜蘆醇等活性成分，對(duì)心血管有保護(hù)作用。由于在食用油市場(chǎng)上價(jià)格偏高，在經(jīng)濟(jì)利益的驅(qū)使下，不法商販以其他低價(jià)的食用油甚至非食用油摻入花生油中，嚴(yán)重的損害了人民群眾的經(jīng)濟(jì)利益和身體健康。

對(duì)于食用油的檢驗(yàn)，常用的檢測(cè)指標(biāo)主要有油脂的酸價(jià)、過(guò)氧化值和介電常數(shù)等[2]。常規(guī)的檢測(cè)方法有化學(xué)檢測(cè)法、物理檢測(cè)法、光譜法和色譜法等，這些方法都各有其優(yōu)缺點(diǎn)[3]。而氣相色譜法（GC）、氣相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用技術(shù)（GC-MS）已廣泛應(yīng)用于食用油中油脂和揮發(fā)性成分的測(cè)定[4]。隨著現(xiàn)代儀器分析技術(shù)的發(fā)展，指紋圖譜技術(shù)已被廣泛的應(yīng)用于食品成分分析的領(lǐng)域中，所建立的食品中一些成分的指紋圖譜對(duì)食品摻假和食品質(zhì)量控制都具有很大的意義[5]。本文利用氣相色譜建立花生油指紋圖譜，并采用氣相色譜-質(zhì)譜技術(shù)（GC-MS）對(duì)8個(gè)共有峰進(jìn)行化學(xué)歸屬，利用歸一化法確定其相對(duì)含量，研究結(jié)果為花生油的評(píng)價(jià)和質(zhì)量控制提供了參考。

1 材料與方法

1.1 材料與儀器

本實(shí)驗(yàn)所有的花生油樣品 均由超市購(gòu)得，樣品信息見表1；甲醇、乙醚 利安隆博華醫(yī)藥化學(xué)有限公司，分析純；正己烷 天津市凱信化學(xué)工業(yè)有限公司，分析純；甲醇 煙臺(tái)市雙雙化工有限公司，分析純；氫氧化鉀 北京化工廠，分析純。

Agilent 7890A氣相色譜儀 HP-INNOWAX毛細(xì)管色譜柱（30m×0.35mm×0.25μm），美國(guó)Agilent公司（包括自動(dòng)進(jìn)樣器和Agilent Chemstation工作站）；中藥色譜指紋圖譜相似度評(píng)價(jià)系統(tǒng)A版 國(guó)家藥典委員會(huì)。

表1 樣品信息Table 1 Information of samples

1.2 實(shí)驗(yàn)方法

1.2.1 樣品前處理 參照文獻(xiàn)[6]。精密量取樣品0.5mL，置于50mL容量瓶中，加入5mL乙醚∶正己烷（V∶V=1∶1），搖勻，然后加入5mL無(wú)水甲醇，搖勻，再加入5mL 0.8mol/L KOH-甲醇溶液，搖動(dòng)5min，加水至刻度，靜置分層，澄清后吸取上清液，待測(cè)。

1.2.2 色譜條件 HP-INNOWAX毛細(xì)管色譜柱（30m×0.35mm×0.25μm）；進(jìn)樣口溫度：250℃；檢測(cè)器溫度：280℃；柱起始溫度：100℃，以5℃/min速率程序升溫至240℃，保持5min；分流比1∶10，載氣為氮?dú)猓?9.99%），流量3mL/min；進(jìn)樣量1μL。

質(zhì)譜條件：離子源為EI源；離子源溫度：240℃，電子能量：70eV；四級(jí)桿溫度：150℃。

1.2.3 指紋圖譜建立 16個(gè)樣品按照1.2.1項(xiàng)樣品前處理方法和1.2.2項(xiàng)中色譜條件分別制備樣品和進(jìn)樣分析，以16個(gè)樣品氣相色譜圖譜中各色譜峰出峰頻次，利用指紋圖譜相似度軟件篩選樣品的共有峰。選擇峰面積、保留時(shí)間適宜的6號(hào)峰為參比峰，計(jì)算共有峰相對(duì)保留時(shí)間tr（tr=tri/trs）和相對(duì)峰面積Ar（Ar=Ai/As）。

2 結(jié)果與討論

2.1 指紋圖譜建立和共有峰的確定

利用指紋圖譜相似度軟件篩選，得到8個(gè)共有峰，見圖1。8個(gè)共有峰相對(duì)保留時(shí)間tr（tr=tri/trs）和相對(duì)峰面積Ar（Ar=Ai/As）見表2、表3。

圖1 氣相色譜指紋圖譜Fig.1 GC-fingerprints chromatogram of peanut oil

表2 樣品8個(gè)共有峰相對(duì)保留時(shí)間Table 2 The relative retention time of common peaks of 8 samples

2.2 方法學(xué)評(píng)價(jià)

2.2.1 精密度實(shí)驗(yàn) 取同一樣品油，按1.2.1項(xiàng)方法處理后，在1.2.2項(xiàng)中色譜條件下連續(xù)進(jìn)樣3次，分別考察色譜峰的相對(duì)保留時(shí)間、相對(duì)峰面積。8個(gè)共有峰相對(duì)保留時(shí)間的RSD均小于1%；8個(gè)共有峰相對(duì)峰面積的RSD小于3.1%。

2.2.2 穩(wěn)定性實(shí)驗(yàn) 取同一樣品油，按1.2.1項(xiàng)方法處理制備供試品溶液，分別在0、2、4、8、16、24h在1.2.2項(xiàng)中色譜條件下進(jìn)樣分析，考察色譜峰的相對(duì)保留時(shí)間、相對(duì)峰面積，結(jié)果8個(gè)共有峰在0、2、4、8、16、24h的相對(duì)保留時(shí)間的RSD（n=6）均不超過(guò)1.9%；8個(gè)共有峰在0、2、4、8h相對(duì)峰面積的RSD均不超過(guò)5.1%。8個(gè)共有峰在16h時(shí)的相對(duì)峰面積的RSD大于10%，表明樣品溶液在8h內(nèi)基本穩(wěn)定。

2.2.3 重現(xiàn)性實(shí)驗(yàn) 取同一樣品油，分為3份，按1.2.1項(xiàng)方法處理制備供試品溶液3份，考察色譜峰的相對(duì)保留時(shí)間、相對(duì)峰面積。相對(duì)保留時(shí)間重現(xiàn)性實(shí)驗(yàn)結(jié)果的RSD均小于1%，相對(duì)峰面積重現(xiàn)性實(shí)驗(yàn)結(jié)果的RSD均小于4.4%。

表3 樣品8個(gè)共有峰相對(duì)峰面積Table 3 The relative peak area of common peaks of 8 samples

2.3 共有峰化學(xué)歸屬

按照1.2.2項(xiàng)質(zhì)譜條件對(duì)8個(gè)共有峰進(jìn)行化學(xué)歸屬，總離子色譜圖見圖2，共有峰化學(xué)成分見表4。

圖2 樣品總離子流圖Fig.2 Total ion[1]current（TIC）chromatography

表4 8個(gè)共有峰化學(xué)成分Table 4 Chemical constituents of 8 common peaks

根據(jù)表4中8個(gè)共有峰化學(xué)歸屬，按照1.2.1項(xiàng)、1.2.2項(xiàng)對(duì)16個(gè)花生油樣品進(jìn)行測(cè)定，按照歸一化法計(jì)算8個(gè)共有峰相對(duì)含量，結(jié)果見表5。

表5 8個(gè)共有峰相對(duì)含量（%）Table 5 The relative content of common peaks of 8 samples（%）

由表5可知，8個(gè)共有峰平均含量和范圍分別為：亞油酸48.5%（44.3%～50.3%）、硬脂酸39.4%（35.9%～ 40.9%）、10-十九碳酸3.9%（2.6%～6.6%）、花生酸4.1%（2.8%～7.1%）、11-二十碳烯酸4.6%（3.40%～ 4.6%）、芥酸1.33%（0.9%～2.8%）、2，6，10，15，19，23-六甲基-2，6，10，14，18，22-廿四碳六烯2.5%（2.2%～ 2.7%）、二十六烷酸0.2%（0.2%～0.4%）。其中的不飽和脂肪酸主要為棕櫚油酸，亞油酸和芥酸，而亞油酸峰平均含量48.5%，最為突出。硬脂酸平均含量也較高，達(dá)到39.4%，現(xiàn)有研究已經(jīng)證實(shí)，硬脂酸對(duì)于膽固醇無(wú)上升作用。硬脂酸在身體內(nèi)經(jīng)不飽和反應(yīng)會(huì)迅速轉(zhuǎn)換為油酸[7]。

由于花生油原料產(chǎn)地不同、加工工藝的差異，使其化學(xué)成分有一定的差別。但是通過(guò)8個(gè)共有峰種類的篩選及其相對(duì)含量平均值和含量范圍等信息，為鑒別花生油真?zhèn)魏驮u(píng)價(jià)花生油的品質(zhì)提供技術(shù)參考。

3 結(jié)論

本研究借鑒了中藥指紋圖譜的概念，利用氣相色譜指紋圖譜技術(shù)，建立了花生油指紋圖譜。利用中藥色譜指紋圖譜相似度評(píng)價(jià)系統(tǒng)從中篩選到8個(gè)共有峰，經(jīng)方法學(xué)評(píng)價(jià)表明所建立的指紋圖譜穩(wěn)定性、重現(xiàn)性良好，可為鑒別花生油真?zhèn)魏驮u(píng)價(jià)花生油的品質(zhì)提供技術(shù)參考。

[1]徐貴發(fā)，郭海峰，朱鳳，等.花生油對(duì)中老年人血脂水平的影響[J].營(yíng)養(yǎng)學(xué)報(bào)，2004，26（4）：249-252.

[2]鄭振佳，趙先恩，遲炳海，等.花生油中游離脂肪酸的HPLCFLD分析[J].分析測(cè)試室，2011，30（4）：23-27.

[3]黃偉雄，羅建波，江片碧.花生油脂肪酸特征模式的研究[J].中國(guó)公共衛(wèi)生，2001，17（10）：889.

[4]李高陽(yáng)，丁霄霖.亞麻籽油中脂肪酸成分的GC-MS分析[J].食品與機(jī)械，2005，21（5）：30-32.

[5]姚云平，李昌模，劉慧琳.指紋圖譜技術(shù)在植物油鑒定和摻假中的應(yīng)用[J].中國(guó)油脂，2012，37（7）：51-54.

[6]吳惠勤，黃曉蘭，陳江韓，等.SPME/GC-MS鑒別地溝油新方法[J].分析測(cè)試學(xué)報(bào)，2012，13（1）：1-6.

[7]唐傳核，徐建祥，彭志英.脂肪酸營(yíng)養(yǎng)與功能的最近研究[J].中國(guó)油脂，2000，25（6）：20-23.

Fingerprint analysis of peanut oil based on gas chromatography

LUO Shan1，2，ZHANG Pei1，2，XU Yue-min1，2，LIU Ye-wei1，*，DI Duo-long2，*
（1.Institute of Nutrition and Food Hygiene，of Public Health，Lanzhou University，Lanzhou 730000，China. 2.Key Laboratory of Chemistry of Northwestern Plant Resources and Key Laboratory for Natural Medicine of Gansu Province，Lanzhou Institute of Chemical Physics，Chinese Academy of Sciences，Lanzhou 730000，China）

Learned from fingerprinting research ideas，built peanut oil by gas chromatography（GC）fingerprints. In the preferred chromatographic conditions，chromatograms 16 samples screened used software similarity eight common peaks established peanut oil fingerprinting method validation，8 total peak precision，RSD of the stability were less than 3.1%and 5.1%.Meanwhile，the used of gas chromatography-mass spectrometry（GCMS）for a total of eight peaks chemical vest，and determine its relative content of the used of normalization method.The established method was simple，sensitive，and provided technical reference for the identification and evaluation of the quality of peanut oil，peanut oil authenticity.

peanut oil；GC；GC-MS；fingerprint

TS207.3

A

1002-0306（2014）08-0058-04

10.13386/j.issn1002-0306.2014.08.003

2013－10－23 *通訊聯(lián)系人

駱姍（1988－），女，在讀碩士研究生，研究方向：食品污染物檢測(cè)新方法和新技術(shù)。

中科院“百人計(jì)劃”項(xiàng)目；蘭州市城關(guān)區(qū)科技計(jì)劃項(xiàng)目（2012-3-5）。