王嘉，曲秀娟，張敬東，溫倜，羅穎，劉云鵬

（中國(guó)醫(yī)科大學(xué)附屬第一醫(yī)院腫瘤內(nèi)科，沈陽110001）

·論著·

腸癌患者外周血T淋巴細(xì)胞亞群數(shù)量及臨床意義

王嘉，曲秀娟，張敬東，溫倜，羅穎，劉云鵬

（中國(guó)醫(yī)科大學(xué)附屬第一醫(yī)院腫瘤內(nèi)科，沈陽110001）

目的檢測(cè)結(jié)直腸癌患者外周血淋巴細(xì)胞各亞群絕對(duì)值及比率以評(píng)估腸癌患者的免疫狀態(tài)，并進(jìn)一步分析其與腸癌患者臨床特征的關(guān)系。方法收集167例腫瘤內(nèi)科初次就診的腸癌患者外周血，其中112例為根治術(shù)后患者，44例為晚期一線腸癌患者。同時(shí)收集166例體檢中心健康人群的外周血，應(yīng)用流式細(xì)胞術(shù)進(jìn)行淋巴細(xì)胞亞群的檢測(cè)。應(yīng)用t檢驗(yàn)及χ2檢驗(yàn)進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析。結(jié)果腸癌患者外周血CD4+T細(xì)胞絕對(duì)值較正常人顯著下降；晚期腸癌患者CD4+T及CD8+T細(xì)胞絕對(duì)值較正常人顯著下降，且相對(duì)根治術(shù)后患者，CD8+T細(xì)胞有下降趨勢(shì)。此外，＜49歲的晚期患者CD4+T細(xì)胞下降更明顯。結(jié)論術(shù)后和晚期結(jié)直腸癌患者均存在免疫功能下降，為進(jìn)一步了解腸癌患者的免疫狀態(tài)和免疫治療提供依據(jù)。

腸癌；T細(xì)胞亞群；臨床意義

免疫系統(tǒng)具有重要的抗腫瘤作用，而免疫抑制可促進(jìn)腫瘤發(fā)生、發(fā)展。機(jī)體抗腫瘤作用以T淋巴細(xì)胞介導(dǎo)的細(xì)胞免疫為主。T淋巴細(xì)胞主要包括CD3+CD4+和CD3+CD8+T細(xì)胞?？鼓[瘤作用的實(shí)現(xiàn)依賴于這些細(xì)胞功能的正常發(fā)揮［1，2］。目前，對(duì)人外周血淋巴細(xì)胞的檢測(cè)已經(jīng)用于衡量腫瘤患者的免疫狀態(tài)，既往報(bào)道顯示惡性腫瘤患者機(jī)體免疫狀態(tài)常表現(xiàn)為CD3+T細(xì)胞、CD4+T細(xì)胞下降，CD4+/CD8+比值下降或倒置［3～4］。但各亞群在腸癌患者中的表達(dá)規(guī)律仍無統(tǒng)一的結(jié)論。因此，本研究擬以健康人群為對(duì)照，探討術(shù)后、晚期腸癌患者T淋巴細(xì)胞亞群的數(shù)量及其與臨床特征之間的關(guān)系，本研究結(jié)果將為臨床治療及腸癌免疫研究提供參考依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 臨床資料

納入2012年3月1日至2013年9月1日中國(guó)醫(yī)科大學(xué)附屬第一醫(yī)院腫瘤內(nèi)科初次就診的167例結(jié)直腸癌患者（均經(jīng)術(shù)后或腸鏡病理確診）。其中男84例，女82例。年齡21～80歲，中位年齡49歲。112例患者均為根治術(shù)后1～3個(gè)月入我科；44例為晚期一線結(jié)直腸癌患者，其中未手術(shù)19例，術(shù)后進(jìn)展12例，姑息術(shù)后24例。健康對(duì)照組為166名在中國(guó)醫(yī)科大學(xué)附屬第一醫(yī)院體檢中心進(jìn)行體檢的健康人群，體檢結(jié)果均提示為健康者，無慢性肝腎疾病，無風(fēng)濕科疾病等。

1.2 檢測(cè)方法

抽取167例結(jié)直腸癌患者及166名健康者外周血，應(yīng)用流式細(xì)胞儀技術(shù)，測(cè)定外周血液中CD4+T細(xì)胞，CD8+T細(xì)胞及CD4+/CD8+，CD3+T細(xì)胞絕對(duì)值及比率等。體力評(píng)分按照卡式（KPS）評(píng)分法。

1.3 統(tǒng)計(jì)學(xué)分析

2 結(jié)果

2.1 結(jié)直腸癌患者外周血T細(xì)胞亞群與健康人群對(duì)照比較

術(shù)后結(jié)直腸癌患者外周血CD3+T細(xì)胞和CD4+T細(xì)胞分別為1 168.66±306.34/μL和683.02±247.61/μ L，顯著低于健康對(duì)照組1 476.94±467.27/μL和800.48±279.39/μL，CD8+T細(xì)胞也有降低的趨勢(shì)；晚期腸癌患者外周血CD3+T細(xì)胞為1 144.22±418.17/μ L，CD4+T細(xì)胞為668.64±246.27/μL，CD8+T細(xì)胞為463.02±266.68/μL，均顯著低于健康對(duì)照組1 476.94± 467.27/μL，800.48±279.39/μL，607.20±273.32/μL。CD4+/CD8+比值無顯著性差異。上述結(jié)果提示腸癌患者存在普遍的免疫能力降低，見表1。

表1 腸癌患者與健康對(duì)照人群中T細(xì)胞亞群值的對(duì)比Tab.1 T cell subgroup value in colorectal cancer patients and healthy controls

2.2 術(shù)后結(jié)直腸癌患者外周血淋巴細(xì)胞亞群與晚期結(jié)直腸癌患者對(duì)比

無論術(shù)后還是晚期的患者都存在T細(xì)胞免疫狀態(tài)的顯著下降，但是兩者之間是否有差異尚不清楚。我們對(duì)術(shù)后和晚期患者的T細(xì)胞亞群數(shù)值情況也進(jìn)行了比較分析，結(jié)果顯示，CD4+T細(xì)胞為684.24±247.91/μL對(duì)比690.24±236.94/μL，無顯著性差異。CD8+T細(xì)胞為448.42±306.26/μL對(duì)比466.47± 264.13/μL，晚期患者有下降趨勢(shì)。CD4+/CD8+分別為1.49±0.74對(duì)比1.77±0.86，晚期腸癌患者顯著升高，差別有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。上述結(jié)果提示晚期腸癌患者的免疫狀態(tài)進(jìn)一步降低，見表2。

表2 晚期結(jié)直腸癌與術(shù)后結(jié)直腸癌患者外周血淋巴細(xì)胞亞群對(duì)比Tab.2 T cell subgroup value in postoperative colorectal cancer patients and advanced colorectal cancer patients

2.3 術(shù)后結(jié)直腸癌患者外周血淋巴細(xì)胞亞群與其自身臨床特征的關(guān)系

術(shù)后腸癌患者中，按照性別、體力評(píng)分、年齡、分期及淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移情況分別進(jìn)行分組，比較外周血T淋巴細(xì)胞亞群數(shù)值的差異。結(jié)果提示T淋巴細(xì)胞亞群中CD4+T細(xì)胞，CD8+T細(xì)胞，CD4+/CD8+及CD3+T細(xì)胞數(shù)值與上述臨床特征無顯著性相關(guān)，見表3。

2.4 晚期結(jié)直腸癌患者外周血淋巴細(xì)胞亞群與其自身臨床特征的關(guān)系

晚期腸癌患者中，按照性別、體力評(píng)分、年齡、是否做過手術(shù)及是否肝轉(zhuǎn)移等情況分別進(jìn)行分組，其中CD4+T細(xì)胞按照年齡進(jìn)行分組，＜49歲組為494.12±204.46/μL，49歲以上組為749.28±274.60/μL，49歲以下組顯著降低；CD8+T細(xì)胞按照是否經(jīng)歷過手術(shù)進(jìn)行分組，分別為378.79±169.76/μL對(duì)比412.74±294.01/μL，在未經(jīng)歷過手術(shù)患者中顯著降低，見表4。

表3 術(shù)后結(jié)直腸癌臨床特征與T淋巴細(xì)胞亞群數(shù)量的關(guān)系Tab.3 Relationship between the clinical features of postoperative colorectal cancer and T cell subgroup value

表4 晚期結(jié)直腸癌臨床特征與T淋巴細(xì)胞亞群數(shù)量的關(guān)系Tab.4 Relationship between the clinical features of advanced colorectal cancer and T cell subgroup value

3 討論

在機(jī)體抗腫瘤免疫效應(yīng)中，細(xì)胞免疫起著重要的作用。而細(xì)胞免疫又以T淋巴細(xì)胞亞群起主導(dǎo)作用。檢測(cè)外周血T淋巴細(xì)胞亞群目前是觀察免疫水平的重要方法之一。T淋巴細(xì)胞亞群中CD4+T細(xì)胞及CD8+T細(xì)胞在抗腫瘤效應(yīng)中起作用［4～6］。

CD3+T細(xì)胞的數(shù)量代表了機(jī)體總的細(xì)胞免疫狀態(tài)，CD4+T細(xì)胞為輔助性T細(xì)胞，輔助機(jī)體完成抗腫瘤免疫，CD8+T細(xì)胞既往認(rèn)為是抑制性T細(xì)胞，而目前普遍認(rèn)為是細(xì)胞毒性T細(xì)胞。CD4+/CD8+比值保持動(dòng)態(tài)平衡，以維持機(jī)體細(xì)胞的免疫功能穩(wěn)定。既往報(bào)道各種惡性腫瘤外周血CD4+T細(xì)胞計(jì)數(shù)在各種惡性腫瘤中下降，CD8+T細(xì)胞與健康對(duì)照組無顯著差異或者較健康對(duì)照組升高。本研究也證實(shí)術(shù)后結(jié)直腸癌患者外周血中CD4+T、CD3+T細(xì)胞較健康對(duì)照組顯著下降，CD8+T細(xì)胞無顯著變化。主要原因可能是許多類型的腫瘤都能產(chǎn)生轉(zhuǎn)化生長(zhǎng)因子2β（TGF2β）在體外能強(qiáng)烈抑制CD4+T細(xì)胞應(yīng)答和活性細(xì)胞毒性T細(xì)胞的產(chǎn)生［7］。CD4+T細(xì)胞的減少符合腫瘤的免疫逃避機(jī)制，腫瘤細(xì)胞通過Fas/Fas L途徑改變宿主的免疫系統(tǒng)產(chǎn)生免疫抑制［8］。既往多數(shù)報(bào)道CD8+T細(xì)胞在惡性腫瘤中無明顯變化或者升高，而本研究中晚期結(jié)直腸癌患者外周血CD4+T及CD8+T細(xì)胞均較健康對(duì)照組顯著下降。且對(duì)比早期患者CD4+/CD8+數(shù)值顯著升高，提示CD8+T細(xì)胞在晚期患者中有進(jìn)一步下降趨勢(shì)，需要進(jìn)一步通過擴(kuò)大樣本量得到證實(shí)。CD8+T細(xì)胞顯著下降原因可能在于多項(xiàng)研究證實(shí)腫瘤組織中CD8+T細(xì)胞的浸潤(rùn)參與了控制腫瘤生長(zhǎng)及轉(zhuǎn)移的作用［9］，晚期肝轉(zhuǎn)移腸癌組織中CD8+T細(xì)胞的浸潤(rùn)明顯減少，晚期的腸癌患者外周血有較低的CD8+T細(xì)胞比率［10，11］。因此，本研究表明結(jié)直腸癌患者機(jī)體的細(xì)胞免疫功能較健康對(duì)照明顯降低，晚期腸癌患者的細(xì)胞免疫紊亂進(jìn)一步加重。提示消化道腫瘤患者在進(jìn)行化療時(shí)，殺傷腫瘤細(xì)胞與保護(hù)機(jī)體免疫功能具有同等重要意義。

本研究中納入根治術(shù)后1～2個(gè)月的腸癌患者112例，研究其外周血CD4+T、CD8+T、CD4+/CD8+及CD3+T數(shù)值與分期、性別、年齡、體力評(píng)分及淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移等無顯著相關(guān)。納入55例晚期一線結(jié)直腸癌患者，其外周血中CD4+T細(xì)胞在59歲以下患者中顯著降低，2組中男女比例，是否手術(shù)，體力評(píng)分等因素分布均衡。既往有動(dòng)物實(shí)驗(yàn)報(bào)道年齡與T淋巴細(xì)胞數(shù)值相關(guān)，CD4+T細(xì)胞在年長(zhǎng)小鼠中升高［12］。而本研究結(jié)果中CD4在年輕患者中顯著下降，不除外本身年齡差別起作用，也可能提示晚期腸癌中年齡小于59歲患者免疫功能抑制更為強(qiáng)烈。以往相關(guān)報(bào)道較少。同時(shí)如前所述，晚期腸癌患者CD4+T細(xì)胞及CD8+T細(xì)胞均較健康對(duì)照顯著下降，晚期患者中未手術(shù)者CD8+T細(xì)胞顯著降低。提示晚期腸癌患者的免疫失調(diào)進(jìn)一步加重。

本研究證實(shí)了術(shù)后和晚期結(jié)直腸癌患者外周血CD4+T細(xì)胞均顯著下降，而晚期結(jié)直腸癌患者更伴有CD8+T細(xì)胞的顯著下降。本研究結(jié)果為進(jìn)一步了解腸癌患者的免疫狀態(tài)提供數(shù)據(jù)，也為結(jié)直腸癌患者的輔助免疫治療提供進(jìn)一步的科學(xué)依據(jù)。

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（編輯 裘孝琦）

The Peripheral Blood Lymphocyte Subsetsin Colorectal Cancer Patients and Its Clinical Significance

WANGJia，QU Xiu-juan，ZHANGJing-dong，WENTi，LUOYing，LIUYun-peng
（Department of Internal Oncology，The First Hospital，China Medical University，Shenyang 110001，China）

ObjectiveTo evaluate the immune status of colorectal cancerpatients through detecting the absolute value of lymphocyte subsets in the peripheral blood，and further analysis the relationship between the immune status variation and the patients’clinical features.MethodsPeripheral blood of167 patients thatbeing treated in the FirstAffiliated HospitalofChina MedicalUniversity were collected，including 112 cases with postoperative bowelcancerand 44 cases offirstline advanced bowelcancer.A totalof167 healthy individuals admitted to medicalcenters were also recruited as control.Flow cytometry was used to detectthe lymphocyte subgroups.ResultsCD4+T in the peripheralblood ofcolorectalcancerpatientswassignificantly decreased comparing with the normalcontrols.CD4+T and CD8+Tin the peripheralblood ofadvanced colorectalcancerpatients were significantly decreased compared with the normal controls.There was no significantly difference of the absolute value of CD4+T cells between advanced colorectal cancer patients and postoperative cancer patients.CD8+T cells have a downward trend.In addition，those advanced colorectal cancer patients with age less than 49 patients showed more obvious decreased CD4+T cells.ConclusionThere are drawbacks of immune function in colorectalcancerpatients，which can be applied as supporting data forauxiliary immunotherapy.

colorectal cancer；lymphocyte subsets；clinical significance

R73

A

0248-4646（2014）04-0289-04

國(guó)家自然科學(xué)基金（31300743）

王嘉（1984-），女，醫(yī)師，本科.

劉云鵬，E-mail：cmuliuyunpeng@hotmail.com

2014-01-14

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