童卉琦，周平，白金，馬楠，宋伶俐，金向群

(吉林大學(xué)藥學(xué)院，長(zhǎng)春130012)

參絨潔陰泡沫劑由苦參、赤芍、蒲公英、白鮮皮、鶴虱等中藥組成。具有清熱解毒、殺蟲(chóng)止癢之功效，可有效治療陰道炎引起的外陰瘙癢、發(fā)熱、灼熱、白帶增多、異味、不適等癥狀[1]。本試驗(yàn)修訂了蒲公英和赤芍的薄層鑒別方法，對(duì)處方中蒲公英、赤芍、鶴虱和白鮮皮進(jìn)行了鑒別，同時(shí)對(duì)苦參進(jìn)行了含量測(cè)定，制定了本泡沫制劑的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)。

1 儀器與試劑

1.1儀器

AB204-N分析天平( 梅特勒-托利多儀器有限公司 )；JT2001電子天平(上海精天電子儀器有限公司)；KQ-250D數(shù)控超聲波清洗器(昆山市超聲儀器有限公司)；LC-10AT高效液相色譜儀(SHIMADZA公司)。

1.2試劑

參絨潔陰泡沫劑(百奧生物技術(shù)有限公司，批號(hào)：20091105)；咖啡酸標(biāo)準(zhǔn)品、芍藥苷標(biāo)準(zhǔn)品、鶴虱對(duì)照藥材、腀酮標(biāo)準(zhǔn)品、苦參堿標(biāo)準(zhǔn)品(吉林省藥品生物制品檢定所)；甲醇、乙腈、無(wú)水乙醇(色譜級(jí)，F(xiàn)isher Scientific公司)；水為3蒸水；其余試劑均為分析純。

2 方法與結(jié)果

2.1蒲公英薄層鑒別

取10mL參絨潔陰泡沫劑蒸干，加甲醇20mL，加熱回流30min，濾過(guò)，蒸干。殘?jiān)铀?0mL使其溶解，滴入3滴甲酸，用乙酸乙酯振搖萃取2次，每次10mL，合并乙酸乙酯層，蒸干，殘?jiān)蛹状?mL使其溶解，作為供試品溶液。再取按處方量及制備工藝制備的陰性樣品制成陰性樣品溶液。另取咖啡酸對(duì)照品加甲醇制成0.5mg/mL的溶液，作為對(duì)照品溶液。照薄層色譜法進(jìn)行試驗(yàn)。吸取上述3種溶液4μL[2]，分別點(diǎn)于同硅膠G板上，其中供試品溶液重復(fù)點(diǎn)樣3次作為平行對(duì)照。以氯仿-乙酸乙酯-甲酸(9∶5∶1)為展開(kāi)劑展開(kāi)，取出并晾干，置于紫外光燈(365nm)下檢視。供試品色譜中在與對(duì)照品色譜相對(duì)應(yīng)的位置上，顯示相同顏色的熒光斑點(diǎn)，且陰性無(wú)干擾(圖1)。

2.2赤芍薄層鑒別

取參絨潔陰泡沫劑10mL，通過(guò)處理好的D101大孔樹(shù)脂柱(內(nèi)徑1.5cm，柱高10cm)，用200mL水洗脫，再用50mL乙醇洗脫，蒸干，殘?jiān)訜o(wú)水乙醇2mL使其溶解，作為供試品溶液。取芍藥苷對(duì)照品，加無(wú)水乙醇制成0.5mg/mL的溶液，作為對(duì)照品溶液。按照薄層色譜法進(jìn)行試驗(yàn)，吸取上述2種溶液各4μL，分別點(diǎn)于同一硅膠G板上，其中供試品溶液重復(fù)點(diǎn)樣3次作為平行對(duì)照。用氯仿-乙酸乙酯-甲醇-甲酸(40∶5∶10∶0.2)[3]作為展開(kāi)劑，展開(kāi)，取出并晾干，噴以5%香草醛硫酸溶液，加熱至斑點(diǎn)顯色清晰。供試品色譜中，與對(duì)照品色譜相應(yīng)的位置上，顯相同顏色的斑點(diǎn)，且陰性無(wú)煩擾，重現(xiàn)性較好(圖2)。

2.3鶴虱薄層鑒別

取參絨潔陰泡沫劑10mL蒸干，加石油醚(60℃～90℃)50mL，超聲萃取45min，濾過(guò)，取濾液濃縮至2mL。再取按處方量及制備工藝制備的陰性樣品制成陰性樣品溶液。另取對(duì)照藥材1g，同供試品方法制備，作為對(duì)照品。吸取上述供試品溶液、對(duì)照藥材溶液、陰性對(duì)照品各4μL，分別點(diǎn)于同一硅膠G薄層板上，其中供試品溶液重復(fù)點(diǎn)樣3次作為平行對(duì)照。以石油醚(60～90℃)-醋酸乙酯(3∶2)為展開(kāi)劑，預(yù)飽和15min，展開(kāi)，取出，晾干，置紫外光燈(365nm)下檢視。供試品色譜中，在與對(duì)照藥材色譜相應(yīng)的位置上，顯相同顏色的熒光斑點(diǎn)，陰性無(wú)干擾(圖3)。

2.4白鮮皮薄層鑒別

取10mL參絨潔陰泡沫劑蒸干，加甲醇50mL，超聲30min，濾過(guò)，取濾液濃縮至1mL，作為供試品溶液。再取按處方量及制備工藝制備的陰性樣品制成陰性樣品溶液。取腀酮對(duì)照品，加甲醇制成1mg/mL的溶液，作為對(duì)照品溶液。取上述3種溶液各4μL，分別點(diǎn)于同一硅膠G板上，其中供試品溶液重復(fù)點(diǎn)樣3次作為平行對(duì)照。以石油醚(60℃～90℃)-乙酸乙酷(8∶2)為展開(kāi)劑，展開(kāi)，取出并晾干，噴以10%硫酸乙醇溶液，在105℃條件下加熱至斑點(diǎn)顯色清晰[4]。供試品色譜中，在與對(duì)照藥材色譜相應(yīng)的位置上，顯相同顏色的熒光斑點(diǎn)，陰性無(wú)干擾(圖4)。

2.5參絨潔陰泡沫劑中苦參堿的含量測(cè)定

2.5.1高效液相色譜條件以氨基鍵合硅膠為填充劑；流動(dòng)相中有機(jī)相為乙腈-無(wú)水乙醇(80∶10)，水相為3%磷酸溶液，將有機(jī)相與水相以94.6∶5.4的比例作為流動(dòng)相；檢測(cè)波長(zhǎng)220nm。理論塔板數(shù)按苦參堿峰計(jì)算應(yīng)不低于2000。

2.5.2對(duì)照品溶液的制備取苦參堿對(duì)照品適量，加乙腈-無(wú)水乙醇(80∶10)混合溶液制成0.1mg/mL的苦參堿溶液。

2.5.3供試品溶液的制備精確量取10mL參絨泡沫劑溶液，蒸干，加入濃氨水0.5mL，精密加入三氯甲烷20mL，密封，稱重。超聲30min，用三氯甲烷補(bǔ)足重量，搖勻，過(guò)濾。取續(xù)濾液10mL，置水浴鍋上蒸干。用無(wú)水乙醇溶解，轉(zhuǎn)移至10mL容量瓶中，定容，備用。

2.5.4線性范圍考察精密稱取減壓干燥4h的苦參堿標(biāo)準(zhǔn)品適量，配制成0.1004mg/mL的苦參堿對(duì)照品溶液。分別精密吸取該對(duì)照品溶液5μL、10μL、15μL、20μL、25μL注入液相色譜儀中進(jìn)行測(cè)定(表1)。

表1苦參堿線性測(cè)定結(jié)果

Table 1The result for the linear relationship of matrine

以進(jìn)樣量為橫坐標(biāo)、峰面積值為縱坐標(biāo)作圖，得一條直線(圖5)?；貧w方程為y=38 469.45x+35 944.466，R=0.999 52。結(jié)果表明，苦參堿進(jìn)樣量在0.502μg～2.51μg范圍內(nèi)，進(jìn)樣量與峰面積呈良好的線性關(guān)系。

2.5.5精密度考察取同一供試品溶液10μL，重復(fù)進(jìn)樣6次，計(jì)算相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差，RSD為0.4005%(表2)。結(jié)果表明本實(shí)驗(yàn)方法精密度良好。

表2精密度考察

Table 2Precision inspection

2.5.6重現(xiàn)性實(shí)驗(yàn)取參絨潔陰泡沫劑10mL，6份，精密稱定，按“2.5.3”項(xiàng)下方法制備試品溶液，進(jìn)樣量為10μL，測(cè)定苦參堿的含量(表3)。RSD值為0.9165%，結(jié)果表明本實(shí)驗(yàn)方法重現(xiàn)性良好。

表3重現(xiàn)性實(shí)驗(yàn)結(jié)果

Table 3Reproducible test results

2.5.7穩(wěn)定性實(shí)驗(yàn)分別取放置2h、4h、6h、12h、16h、24h的供試品溶液，測(cè)定苦參堿含量，以考察其穩(wěn)定性。RSD值為0.8307%，表明供試品溶液至少在24h內(nèi)穩(wěn)定(表4)。

表4穩(wěn)定性考察

Table 4The stability test

2.5.8加樣回收率實(shí)驗(yàn)取精密稱定的苦參堿對(duì)照品，加入已知苦參堿含量的樣品制劑5mL(苦參堿含量為0.3052mg/mL，詳見(jiàn)重現(xiàn)性試驗(yàn))，蒸干，按“2.5.3”項(xiàng)下方法操作，制備供試品溶液，測(cè)定苦參堿的含量，計(jì)算回收率(表5)。結(jié)果表明平均回收率為99.8%，RSD值為1.002%，本實(shí)驗(yàn)方法回收率良好。

表5苦參堿回收率實(shí)驗(yàn)結(jié)果

Table 5The recovery result of the matrine

2.5.9參絨潔陰泡沫劑中苦參堿的含量測(cè)定按“2.5.3”項(xiàng)下方法制備供試品溶液，測(cè)定3批參絨潔陰泡沫劑中苦參堿的含量(表6)。結(jié)果表明，參絨潔陰泡沫劑中苦參堿含量穩(wěn)定，可作為本制劑含量測(cè)定的標(biāo)準(zhǔn)。

表6參絨潔陰泡沫劑中苦參堿的含量測(cè)定結(jié)果

Table6ThequantitativedeterminationofShenRongJie-Yinfoam

NO苦參堿的含量(mg/mL)Thecontentofmatrine每瓶泡沫劑含苦參堿的量(mg)Thecontentofmatrineinperbottle103059153202960148303289164平均average03103155

3 分析與討論

3.1 原處方中蒲公英鑒別陰性樣品會(huì)產(chǎn)生干擾，故作者采用多種展開(kāi)劑進(jìn)行試驗(yàn)。首先使用乙酸丁酯-甲酸-水(7∶2.5∶2.5)[3]的上層液為展開(kāi)劑，但發(fā)現(xiàn)Rf值并不理想；隨后采用苯-乙酸乙酯-甲醇-甲酸(5∶1∶1.5∶5)[5]展開(kāi)劑進(jìn)行展開(kāi)，能有效去除陰性樣品的干擾，但是由于苯為毒性試劑，不提倡使用；氯仿-甲醇-甲酸(9∶3∶1)極性過(guò)大，氯仿-乙酸乙酯-甲酸(9∶5∶1)又有陰性干擾。最終本實(shí)驗(yàn)加長(zhǎng)了以氯仿-乙酸乙酯-甲酸(9∶5∶1)作為展開(kāi)劑的展開(kāi)距離，有效除去了陰性干擾，使用效果更好，提高了蒲公英薄層鑒別的鑒定效果。

3.2 赤芍鑒別中陰性樣品產(chǎn)生干擾，故作者采用了多種展開(kāi)劑，包括氯仿-甲醇(1∶1)[6]、醋酸乙酯-冰醋酸-甲酸-水(15∶1∶1∶2)[7]等，效果均不理想?？紤]到原提取方法繁瑣，干擾因素較多，故采用大孔樹(shù)脂的方法進(jìn)行乙醇洗脫，蒸干。結(jié)果顯示，此方法簡(jiǎn)單，分離效果好。

3.3 由于藥典收載的鶴虱的薄層鑒別方法是采用乙醚萃取，以甲苯-乙酸乙酯-甲酸(8∶1∶1)為展開(kāi)劑，顯色，效果明顯，但是由于試驗(yàn)中使用甲苯，不如本試驗(yàn)使用的展開(kāi)劑安全性高，故不選用此方法。

3.4 由于藥典收載的白鮮皮的薄層鑒別方法是采用甲醇進(jìn)行提取，以甲苯-環(huán)己烷-乙酸乙酯(3∶3∶3)為展開(kāi)劑，顯色，效果明顯，但是由于試驗(yàn)中使用甲苯，不如本試驗(yàn)使用的展開(kāi)劑安全性高，故不選用此方法。

3.5 本實(shí)驗(yàn)建立的參絨潔陰泡沫劑質(zhì)量控制方法穩(wěn)定、可靠，能準(zhǔn)確地進(jìn)行定性、定量檢測(cè)，可用于參絨潔陰泡沫劑的質(zhì)量控制。

[1]張金萍,毛麗超,王詩(shī)惠，等.參絨潔陰洗液的處方研究[J].特產(chǎn)研究,2012,(1):44-46.

[2]馮婉姍,黃杰偉,徐志偉，等.滴通鼻炎水的薄層色譜鑒別[J].現(xiàn)代食品與藥學(xué)雜志,2007,17(1):51-52.

[3]國(guó)家藥典委員會(huì).中華人民共和國(guó)藥典[K].北京:中國(guó)醫(yī)藥科技出版社,2010:188.

[4]劉麗麗.參芍潔陰泡沫劑的研究[D].長(zhǎng)春:吉林大學(xué),2010.

[5]陳美紅,曾曉英.復(fù)方制劑中苦參與蒲公英的鑒別[J].湖南中醫(yī)雜志,1997,13(2):89-90.

[6]高東藩,楊勝華.赤芍及幾種中成藥中赤芍的薄層層析鑒別[J].華西藥學(xué)雜志,1992,7(4):213-215.

[7]鄧開(kāi)英.桂枝合劑中芍藥甙和甘草的薄層色譜鑒別[J].中國(guó)藥業(yè),2000,9(6):19.