徐 清 周靜萍 柳 海

（皖南醫(yī)學院口腔醫(yī)學院，安徽蕪湖241002）

口腔鱗癌居口腔惡性腫瘤之首，病死率高，易轉移導致患者死亡。Ezrin蛋白是腫瘤轉移研究中新發(fā)現(xiàn)的一個相關因子，可調控細胞生長、抗細胞凋亡、促細胞增殖，激活后參與腫瘤細胞的運動、遷移和黏附，在腫瘤生發(fā)和轉移中扮演重要角色[1]。CD44v6是細胞表面黏附分子CD44的變異體，參與細胞特異性粘連，可增強腫瘤細胞的遷移和運動能力，促進腫瘤擴散和轉移。本文采用SP法分別檢測口腔鱗癌中Ezrin蛋白和CD44v6的表達，探討兩者的相關性及臨床意義。

1 資料和方法

1.1 標本

口腔鱗癌39例，女17例，男22例，≥60歲23例，＜60歲16例，淋巴結轉移16例，無淋巴結轉移23例，病理分級Ⅰ級17例、Ⅱ級14例、Ⅲ級8例。另取來自非腫瘤患者手術邊緣28例正?？谇火つ吮厩衅?。所用病例切片隨機取自附屬醫(yī)院近5年的口腔鱗癌手術切除標本。

1.2 試劑

S－P超敏試劑盒（鼠／兔）、DAB顯色劑、鼠抗人Ezrin蛋白免疫組化單克隆抗體，均購自福建邁新生物技術開發(fā)公司；兔抗人CD44v6多克隆抗體，購自武漢博士德生物工程有限公司。

1.3 檢測指標

運用免疫組織化學法對所有切片染色，每組染色設陽、陰性對照，綜合陽性細胞率和染色強度的判定，檢測Ezrin蛋白和CD44v6的表達。

1.4 結果判定

染色結果經2位病理科醫(yī)師行雙盲閱片。每張切片按Kim等[2]半定量法對陽性細胞數(shù)和染色強度進行綜合評分。陽性細胞數(shù)評分：0分（無陽性細胞）；1分（陽性細胞數(shù)≤1／3）；2分（陽性細胞數(shù)占1／3～2／3）；3分（陽性細胞數(shù)≥2／3）。染色強度評分：0分（不著色）、1分（淺黃色）、2分（棕黃色）、3分（棕褐色）；將陽性細胞數(shù)和染色強度的評數(shù)相加算出總分，總分≥2分為陽性，分值2～4分是低表達（＋），分值5～6分是高表達（?）。低表達（＋）、高表達（?）均列入陽性組。

1.5 統(tǒng)計學方法

應用SPSS13.0統(tǒng)計軟件進行分析。

2 結果

2.1 Ezrin蛋白和CD44v6分別在口腔鱗癌和正?？谇火つそM織中的表達

Ezrin蛋白的陽性著色呈淺黃或棕黃色顆粒，見于細胞質和細胞膜內，在口腔鱗癌中的表達水平顯著高于正常口腔黏膜組（P＜0.01）；CD44v6的陽性著色呈淺黃或棕黃色顆粒，見于細胞膜和細胞質，在口腔鱗癌中的表達水平高于正?？谇火つそM（P＜0.05）。見表1。

表1 Ezrin蛋白和CD44v6在口腔鱗癌和正?？谇火つそM織中的表達

2.2 口腔鱗癌中Ezrin蛋白、CD44v6的表達與臨床參數(shù)之間的關系

口腔鱗癌中Ezrin蛋白的表達：與病理分級有關，病理分級越高表達水平就越高（P＜0.01）；與淋巴結轉移有關，Ezrin蛋白表達水平在有淋巴結轉移組高于在無淋巴結轉移組（P＜0.01）；與患者的年齡、性別無關（P＜0.05）?？谇击[癌中CD44v6的表達：與淋巴結轉移有關，在有淋巴結轉移組的表達水平高于無淋巴結轉移組（P＜0.05）；與患者的年齡、性別、病理分級均無關（P＞0.05）。見表2、圖1－4。

采用Fisher確切概率法。

表2 口腔鱗癌中Ezrin蛋白、CD44v6的表達與臨床參數(shù)之間的關系（n，%）

圖1 Ezrin在無淋巴結轉移口腔鱗癌（SP×400）

圖2 Ezrin在有淋巴結轉移口腔鱗癌中的表達SP×400中的表達（SP×400）

圖3 CD44V6在無淋巴結轉移口腔鱗癌（SP×400）

圖4 CD44V6在有淋巴結轉移口腔鱗癌中的表達SP×400中的表達（SP×400）

2.3 Ezrin蛋白和CD44v6在口腔鱗癌中表達的相關性分析

經過Pearson相關分析，Ezrin蛋白和CD44v6在口腔鱗癌中的表達呈正相關（r＝0.626，P＜0.01）。見表3。

表3 Ezrin蛋白和CD44v6在口腔鱗癌中表達的相關性

3 討論

口腔鱗癌易轉移、預后差，患者5a生存率約50%，提高生存率、研究口腔鱗癌的轉移是如今臨床研究的關鍵[3]。

Ezrin蛋白是膜－細胞骨架連接蛋白，其在腫瘤細胞中發(fā)生亞細胞定位改變，之后產生信號轉導和細胞黏附等功能改變，引起腫瘤轉移。近年在膽管癌[4]、食管鱗癌[5]等研究中發(fā)現(xiàn)有Ezrin蛋白的異常表達。本文結果顯示：Ezrin蛋白在正?？谇火つぶ胁槐磉_或顯示為弱陽性，Ezrin蛋白在口腔鱗癌中表達顯著增高（P＜0.01），并且越接近癌巢中心其表達越強，提示Ezrin蛋白可作為口腔鱗癌診斷的參考指標；Ezrin蛋白的表達水平隨著口腔鱗癌病理分級的增高而增高（P＜0.01），提示其與口腔鱗癌的分化程度有關，當其表達越高，腫瘤惡性度就越高；Ezrin蛋白在有淋巴結轉移的口腔鱗癌中表達水平明顯高于無淋巴結轉移組（P＜0.01），提示檢測Ezrin蛋白可對口腔鱗癌的轉移潛能進行評估。

CD44v6是最早被發(fā)現(xiàn)與腫瘤轉移有關的CD44變異體，可使腫瘤細胞與宿主細胞及基質黏附，促進腫瘤擴散。近年研究發(fā)現(xiàn)，CD44v6表達異常與多種惡性腫瘤如食管癌、胃癌、乳腺癌等的發(fā)展和轉移有關。本文結果顯示：CD44v6在口腔鱗癌中的表達高于正?？谇火つぃ≒＜0.05），提示CD44v6可能參與了口腔鱗癌的進展；口腔鱗癌中CD44v6的表達水平在有淋巴結轉移者高于無淋巴結轉移者（P＜0.05），提示CD44v6高表達的口腔鱗癌更容易發(fā)生淋巴結轉移，患者預后較差，CD44v6高表達可作為判斷患者預后不良的因素之一。

有研究發(fā)現(xiàn)，Ezrin蛋白與CD44v6連接，共同參與了腫瘤細胞的轉移過程，尤其是Ezrin蛋白與CD44v6兩者同時高表達時，常出現(xiàn)在腫瘤浸潤和轉移中。在結腸癌[6]中發(fā)現(xiàn)，CD44v6與Ezrin蛋白發(fā)生連接并且兩者在淋巴結轉移中有相互協(xié)同作用。本文結果顯示：在口腔鱗癌中，Ezrin蛋白和CD44v6的表達之間呈顯著正相關（r＝0.626，P＜0.01），提示兩者具有協(xié)同作用共同參與了口腔鱗癌的發(fā)生和轉移，當兩者同時高表達時，預示著腫瘤的高侵襲性、高轉移性，聯(lián)合檢測Ezrin蛋白和CD44v6的表達，有助于早期預測口腔鱗癌的轉移情況。

本文結果顯示Ezrin蛋白和CD44v6均與口腔鱗癌的生長和轉移有關，且兩者的陽性表達成正相關，兩者均高表達的口腔鱗癌更易發(fā)生淋巴結轉移。因此對Ezrin蛋白和CD44v6的聯(lián)合檢測可作為口腔鱗癌早期診斷及臨床預后評估的有效指標。

[1]Moelatehey AI.Merlin and ERM proteins：unappreciated roles in cancer development[J].Cancer，2003，3（11）：877－884.

[2]Kim MS，Song WS，Cho WH，et al.Ezrin expression predicts survival in stageⅡB osteosarcomas[J].Clin Orthop Relat Res，2007，459（7）：229－236.

[3]Favier J，Plouin PF，Corvol P，et al.Angiogenesis and vascular architecture in pheochromocytomas：distinctive traits in malignant turmors[J].Am J Pathol，2002，161（4）：1235－1246.

[4]Zhang Y，Meng XL，Zhu LX，et al.Expression of ezrin and CD44v6in the extrahepatic cholangiocarcinoma and its relationship with cancerous invasion，metastasis and prognosis[J].Acta Universitatis Medicinalis Anhui，2009，44（1）：96－98.

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[6]Lu HQ，Zhen J.Ezrin Protein：Biological characteristic and its influence in tumor metastasis[J].Cytobiology Magazine，2005，27（3）：257－262.