陳志勇 李 偉 周海輝 崔 友 夏小秋 王恒彩

（浙江天瑞藥業(yè)有限公司，浙江 瑞安 325200）

阿加曲班注射液的測(cè)定方法研究

陳志勇 李 偉 周海輝 崔 友 夏小秋 王恒彩

（浙江天瑞藥業(yè)有限公司，浙江 瑞安 325200）

目的用高效液相色譜法測(cè)定阿加曲班注射液的含量。方法采用氰基硅烷鍵合硅膠為填充劑，以甲醇-水-10%四丁基氫氧化銨-磷酸（700∶300∶13∶0.68），用氨溶液（1→20）調(diào)節(jié)pH值至6.5為流動(dòng)相，流速為0.8 mL/min，檢測(cè)波長(zhǎng)257 nm，柱溫為40 ℃。結(jié)果阿加曲班在10.1～151.6 μg/mL范圍內(nèi)，濃度與峰面積呈良好的線性關(guān)系，r=0.9998，平均回收率為99.65%，RSD=0.42%。結(jié)論該方法簡(jiǎn)便、快速、準(zhǔn)確，可用于阿加曲班注射液的含量測(cè)定。

阿加曲班；高效液相色譜法；含量測(cè)定

阿加曲班是由日本三菱化學(xué)研究所研制合成的抗血栓藥，于1990年2月最先上市，首先被應(yīng)用于臨床治療周圍動(dòng)脈閉塞性疾病，然后開始將其用于治療急性腦血栓形成，以及心肌梗死溶栓的輔助治療，并用于在抗凝血酶（AT）缺乏患者進(jìn)行血透時(shí)的抗凝處理。它是一種活性強(qiáng)、高度選擇性的直接凝血酶抑制劑，具有起效迅速、療效顯著、副作用小、安全性高的優(yōu)點(diǎn)。筆者采用高效液相法測(cè)定阿加曲班的含量，結(jié)果表明該方法專屬性強(qiáng)、簡(jiǎn)便、快速、準(zhǔn)確，可用于阿加曲班注射液的含量測(cè)定[1-3]。

1 材 料

1.1 儀器

日本島津高效液相色譜儀（島津LC-20AD），電子電平（Sartorius BP211D）。

1.2 藥品與試劑

阿加曲班對(duì)照品（天津煒捷制藥有限公司，批號(hào)：W3017-01.R.0）。阿加曲班注射液（浙江天瑞藥業(yè)有限公司，批號(hào):313071601313071602，313071603，規(guī)格：20 mL∶10 mg）。甲醇：色譜純；四丁基氫氧化銨：分析純；氨溶液：分析純；磷酸：分析純；水：自制注射用水。

2 方 法

2.1 色譜條件

色譜柱為氰基鍵合硅膠柱（250 mm×4.6 mm，5 μm）；流動(dòng)相為甲醇-水-10%四丁基氫氧化銨-磷酸（700∶300∶13 ∶0.68），用氨溶液（1→20）調(diào)節(jié)pH值至6.5；檢測(cè)器為UV檢測(cè)器（檢測(cè)波長(zhǎng)為257 nm）；進(jìn)樣量為20 μL；流速為0.8 mL/min；柱溫為40 ℃。

2.2 測(cè)定方法

精密量取本品溶液2 mL，置10 mL量瓶中，加流動(dòng)相稀釋至刻度，搖勻，精密量取20 μL，注入液相色譜儀，記錄色譜圖；另取阿加曲班對(duì)照品適量，精密稱定，加流動(dòng)相制成每1 mL中約含阿加曲班0.1 mg的溶液，同法測(cè)定。按外標(biāo)法以峰面積計(jì)算[4-5]。

3 方法學(xué)考察

3.1 專屬性

按處方取空白輔料適量（約相當(dāng)于阿加曲班10mg），置25mL量瓶中，加流動(dòng)相溶解定容，取2mL置10mL量瓶中，加流動(dòng)相定容，作為空白輔料溶液。照擬定的測(cè)定法配制對(duì)照品溶液和樣品溶液并分別取3種溶液各20 μL注入液相色譜儀，記錄色譜圖，HPLC圖譜見圖1。結(jié)果表明理論塔板數(shù)按阿加曲班計(jì)算為8250，空白輔料不干擾供試品溶液的測(cè)定，能夠較好的滿足本品的檢測(cè)要求[6]。

3.2 線性關(guān)系試驗(yàn)

圖1 各樣品HPLC色譜圖

取對(duì)照品加流動(dòng)相溶解并稀釋制成每1 mL含0.5 mg的溶液，作為貯備液。分別精密量取貯備液1 mL分別至50 mL、25 mL量瓶，加流動(dòng)相稀釋至刻度，搖勻，制備濃度為10%和20%溶液，另分別精密量取貯備液1.0、1.6、2.0、2.4、3.0 mL分別至10 mL量瓶中，加流動(dòng)相稀釋至刻度，搖勻，分別作為50%、80%、100%、120%、150%濃度溶液。精密量取上述溶液各20 μL分別注入液相色譜儀，記錄色譜圖，以濃度為橫坐標(biāo)，峰面積為縱坐標(biāo)，得回歸方程為：A=22357C-9808.7，r =0.9998。可見在10.1～151.6 μg/mL范圍內(nèi)，峰面積與濃度的線性關(guān)系良好。

3.3 溶液穩(wěn)定性

取313071601批樣品，照含量測(cè)定方法配制樣品，在第0，1，2，4，6，8 h后測(cè)定峰面積，測(cè)得阿加曲班峰面積的相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差為0.27%，結(jié)果表明本品含量測(cè)定溶液在8 h內(nèi)穩(wěn)定，適合常規(guī)分析[7]。

3.4 方法精密度試驗(yàn)

3.4.1 重復(fù)性：取313071601批樣品，照含量測(cè)定方法平行配制六份樣品，測(cè)定樣品中阿加曲班含量，結(jié)果平均含量為99.53%，RSD值為0.96%，說明本法重復(fù)性良好。

3.4.2 中間精密度：取313071601、313071602、313071603批樣品，分別于不同時(shí)間，不同儀器，由不同的操作者試驗(yàn)，照前述含量測(cè)定方法依法測(cè)定樣品含量，結(jié)果測(cè)得3批樣品含量的相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差分別為0.75%，0.82%和0.79%，表明本品含量測(cè)定方法的重現(xiàn)性較好，準(zhǔn)確可靠。

3.5 回收率

為了考察所選含量測(cè)定方法的準(zhǔn)確度，進(jìn)行回收率測(cè)定。本品回收率試驗(yàn)設(shè)計(jì)按含量測(cè)定濃度的80%、100%、120%進(jìn)行試驗(yàn)。供試品溶液配制：取阿加曲班10.0、12.5和15.0 mg各三份，并按處方稱取空白輔料（約相當(dāng)于阿加曲班12.5 mg）9份，精密稱定，分別置25 mL量瓶中，加流動(dòng)相溶解并稀釋至刻度，搖勻，濾過，各取續(xù)濾液2 mL，置10 mL量瓶中，加流動(dòng)相稀釋至刻度，搖勻，即得。對(duì)照溶液的配制：取阿加曲班約10 mg，精密稱定，置100 mL量瓶中，加流動(dòng)相溶解并稀釋至刻度，搖勻，即得。分別精密量取供試品溶液和對(duì)照品溶液各20 μL注入液相色譜儀，記錄色譜圖。按外標(biāo)法以峰面積計(jì)算回收率。

實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明：采用高、中、低3個(gè)濃度各測(cè)定3次，平均回收率為99.65%，RSD值為0.42%，表明回收率較好，方法的準(zhǔn)確度高。

3.6 耐用性

考察色譜條件進(jìn)行微小變化，測(cè)定結(jié)果不受影響的程度，為方法可用于常規(guī)檢查提供依據(jù)。本品耐用性考察主要針對(duì)本品色譜條件中流速、柱溫、比例、pH和色譜柱進(jìn)行試驗(yàn)。參考《中華人民共和國(guó)藥典》2010年版二部附錄ⅪⅩ A藥品質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)分析方法驗(yàn)證指導(dǎo)原則，對(duì)本測(cè)定方法進(jìn)行以下耐用性試驗(yàn)。流速采用0.75、0.85和0.8mL/min，測(cè)得含量的RSD為0.87%；柱溫采用35、40和45 ℃，測(cè)得含量的RSD為0.81%；流動(dòng)相中對(duì)甲醇與水的比例調(diào)整為65∶35、70∶30和75∶25，測(cè)得含量的RSD為0.26%；pH采用6.0、6.5和7.0，測(cè)得含量的RSD為0.36%；色譜柱采用Kromasil CN、Diamonsil? CN和月旭XB CN，測(cè)得含量的RSD為0.24%。說明阿加曲班含量檢測(cè)方法的耐用性很好[8-9]。

3.7 樣品含量測(cè)定

取本品連續(xù)試制的3批樣品（313071601，313071602，313071603），采用高效液相色譜法測(cè)定阿加曲班的含量，測(cè)定結(jié)果分別為99.71%，99.74%，99.75%。

4 討 論

本實(shí)驗(yàn)對(duì)高效液相色譜法測(cè)定阿加曲班注射液含量方法學(xué)進(jìn)行了研究，結(jié)果表明：阿加曲班在10.1～151.6 μg/mL范圍內(nèi)，濃度與峰面積呈良好的線性關(guān)系，回歸方程為A=22357C-9808.7，r=0.9998，平均回收率為99.65%，RSD=0.42%，耐用性好。結(jié)論：該方法專屬性強(qiáng)、簡(jiǎn)便、快速、準(zhǔn)確，可用于阿加曲班注射液的含量測(cè)定。

[1] 國(guó)家藥典委員會(huì).中國(guó)藥典二部[S].北京:中國(guó)醫(yī)藥科技出版社,2010.

[2] 天津藥物研究院藥業(yè)有限責(zé)任公司阿加曲班注射液說明書(達(dá)貝)[S].

[3] 戴曉嵐.阿加曲班聯(lián)合依達(dá)拉奉治療房顫合并腦栓塞的臨床療效評(píng)價(jià)[J].中國(guó)藥房,2011,22(22):2075.

[4] 進(jìn)口藥品注射標(biāo)準(zhǔn)[S].JX20000058.

[5] 國(guó)家食品藥品監(jiān)督管理總局.YBH11142005阿加曲班[S].2005-05-10.

[6] 國(guó)家食品藥品監(jiān)督管理總局.YBH11142005阿加曲班注射液[S].2005-05-10.

[7] 國(guó)家食品藥品監(jiān)督管理總局.JX20090312阿加曲班注射液[S].2009-03-12.

[8] 郭旭光,鄭子棟.RP-HPLC法測(cè)定阿加曲班注射液的含量[J].中國(guó)藥房,2013,24(33):3141.

[9] 劉東,蔣新利.HPLC測(cè)定阿加曲班注射液的含量[J].食品與藥品,2013,15(5):337.

R927.2

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1671-8194（2014）16-0091-02