魏志雄,劉丹丹

(東莞市食品藥品檢驗所，廣東 東莞 523109)

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HPLC法測定抗過敏類健康產(chǎn)品中非法添加的馬來酸氯苯那敏含量

魏志雄*,劉丹丹

(東莞市食品藥品檢驗所，廣東 東莞 523109)

目的：建立HPLC法測定抗過敏類健康產(chǎn)品中非法添加的馬來酸氯苯那敏含量。方法：采用 Diamonsil C18(4.6mm×250mm，5μm)色譜柱，以0.05mol/L磷酸二氫鉀溶液(含1%三乙胺和0.005mol/L的庚烷磺酸鈉，用磷酸調(diào)節(jié)pH至3.0)-甲醇(45∶55)為流動相，流速為1.0mL·min-1，柱溫為30℃，檢測波長為262nm。結(jié)果：馬來酸氯苯那敏在0.100 4～4.016 0μg范圍內(nèi)與峰面積呈良好線性關(guān)系(r2=0.999 7)，平均回收率為97.8%，RSD=1.6%(n=6)；31批供試品有3批檢測到非法添加的馬來酸氯苯那敏。結(jié)論：該方法專屬性強(qiáng)、靈敏度高，適用于測定抗過敏類健康產(chǎn)品中非法添加的馬來酸氯苯那敏含量。

抗過敏類健康產(chǎn)品；馬來酸氯苯那敏；高效液相色譜

馬來酸氯苯那敏又稱撲爾敏，是一種重要的抗過敏類非處方藥品，臨床上廣泛用于治療各種過敏性疾病，但其本身可引發(fā)交叉過敏，亦可引起嗜睡、心悸、出血傾向以及肝損傷等副作用。一些不法分子在抗過敏類健康產(chǎn)品中非法添加馬來酸氯苯那敏，給人民群眾的身體健康帶來極大威脅。

本文采用高效液相色譜法測定抗過敏類健康產(chǎn)品中馬來酸氯苯那敏的含量，結(jié)果表明，該方法重復(fù)性好，回收率高，可用于此類產(chǎn)品中非法添加的馬來酸氯苯那敏檢測。

1 儀器與試藥

島津LC-20AT液相色譜儀(配二極管陣列檢測器)；賽多利斯BP211D電子天平；色譜柱：Diamonsil C18(4.6mm×250mm，5μm)；馬來酸氯苯那敏對照品(中國食品藥品檢定研究院，批號100047-200606，含量99.7%)；甲醇、庚烷磺酸鈉為色譜純，水為純化水，其余試劑均為化學(xué)純?？惯^敏類健康產(chǎn)品為市購滴鼻劑(共31批)。

2 方法與結(jié)果

2.1 色譜條件

色譜柱為Diamosil C18(4.6mm×250mm，5μm)；流動相為0.05mol/L磷酸二氫鉀溶液(含1%三乙胺和0.005mol/L的庚烷磺酸鈉，用磷酸調(diào)節(jié)pH至3.0)-甲醇(45∶55)；流速為1.0mL/min；進(jìn)樣量為20μL；柱溫為30℃；檢測波長為262nm。在上述色譜條件下理論板數(shù)按氯苯那敏峰計不低于6 000，與周圍其他色譜峰分離良好。對照品、供試品及陰性等色譜見圖1。

圖1 馬來酸氯苯那敏對照品(A)、供試品(B-7～B-24)及陰性供試品HPLC色譜

注：*峰1為氯苯那敏。

2.2 對照品溶液制備

精密稱取經(jīng)105℃干燥3h的馬來酸氯苯那敏對照品0.010 07g，置25mL量瓶中，加甲醇溶解并定容至刻度，配成濃度約為0.4mg/mL的標(biāo)準(zhǔn)儲備液。

精密吸取馬來酸氯苯那敏標(biāo)準(zhǔn)儲備液適量，加甲醇稀釋制成濃度分別為0.2、0.1、0.04、0.02、0.01及0.005mg/mL的標(biāo)準(zhǔn)曲線系列溶液。

2.3 樣品溶液制備

精密吸取樣品適量體積置分液漏斗中，加40%氫氧化鈉溶液10mL，搖勻，用石油醚(60～90℃)振搖提取4次(1次30mL)，合并提取液，蒸干，殘渣用甲醇溶解，并定容至10～50mL量瓶中，搖勻，濾過，取續(xù)濾液，即得(制得供試品濃度在0.005～0.2mg/mL)。

2.4 線性關(guān)系考察

取不同濃度的對照品溶液20μL注入液相色譜儀，測定峰面積，以濃度為橫坐標(biāo)(X)，以峰面積為縱坐標(biāo)(Y)繪制回歸方程，結(jié)果表明馬來酸氯苯那敏進(jìn)樣量在0.100 4～4.016 0μg范圍內(nèi)峰面積與進(jìn)樣量線性關(guān)系良好(Y=1.2×107X+14 210,R2=0.999 7)。

2.5 進(jìn)樣精密度試驗

精密吸取0.005及0.1mg/mL的對照品溶液各20μL分別連續(xù)6次注入高效液相色譜儀，記錄峰面積，RSD為1.1%及0.7%，表明進(jìn)樣精密度良好。

2.6 穩(wěn)定性實驗

按上述制備方法制得供試品溶液，分別在0、2、4、8、16及24h進(jìn)樣20μL，記錄峰面積，結(jié)果RSD為0.3%，表明供試品溶液在24h內(nèi)穩(wěn)定。

2.7 重復(fù)性試驗

精密吸取樣品2 mL置分液漏斗中，按上述制備方法制得6份供試品溶液，取續(xù)濾液20μL注入高效液相色譜儀，記錄峰面積，RSD為0.5%，表明重復(fù)性良好。

2.8 加樣回收試驗

精密移取已知含量的樣品溶液6份各1mL，各加入對照品儲備溶液2mL，按上述制備方法制成供試品溶液，測定計算回收率，結(jié)果見表1。

表1 加樣回收率試驗結(jié)果

2.9 樣品測定

取31批樣品，按上述制備方法制備供試品溶液，在上述色譜條件下進(jìn)樣20μL，記錄色譜見圖1，按標(biāo)準(zhǔn)曲線法計算其含量，結(jié)果見表2。

表2 樣品測定結(jié)果

3 討論

3.1 色譜峰識別

在選定的流動相pH值內(nèi)，馬來酸氯苯那敏會出現(xiàn)兩色譜峰[1]，考慮到馬來酸出峰時間短且易與供試品中其它雜質(zhì)及溶劑峰相互干擾，故選擇氯苯那敏峰來定量。

3.2 檢測波長確定

對馬來酸氯苯那敏對照品溶液的紫外吸收光譜進(jìn)行測定，發(fā)現(xiàn)氯苯那敏在226nm及262nm處有最大吸收峰。考慮到226nm波長下雜質(zhì)干擾較為嚴(yán)重，同時參照《中國藥典》2010版二部品種馬來酸氯苯那敏片的含量測定所采用的檢測波長，選擇262nm 為檢測波長。

3.3 流動相條件選擇

分別考察了1%乙酸銨溶液-甲醇、0.05mol/L磷酸二氫鉀溶液-甲醇、1%磷酸溶液-乙腈及0.05mol/L磷酸二氫鉀溶液(含1%三乙胺和0.005mol/L的庚烷磺酸鈉，用磷酸調(diào)節(jié)pH至3.0)-甲醇等多種系統(tǒng)，最終選定0.05mol/L磷酸二氫鉀溶液(含1%三乙胺和0.005mol/L的庚烷磺酸鈉，用磷酸調(diào)節(jié)pH至3.0)-甲醇 (45∶55)為流動相。結(jié)果顯示加入適量的三乙胺有利于消除氯苯那敏中的氨基與C18固定相中的游離硅羥基相互作用而造成的峰拖尾現(xiàn)象[2]，在此條件下，氯苯那敏峰形較好，能達(dá)到基線分離，響應(yīng)值較高，保留時間適中。

3.4 提取方法選擇

由于抗過敏類健康產(chǎn)品成分復(fù)雜，提取方法選用不當(dāng)很容易對準(zhǔn)確定性及定量造成干擾。參照《中國藥典》2010版一部品種鼻炎康片的含量測定所采用前處理方法[4]，本方法利用馬來酸氯苯那敏易溶于水，加入強(qiáng)堿后氯苯那敏易游離，用石油醚(60～90℃)萃取，蒸干以后用甲醇溶解進(jìn)樣，這樣可有效地消除相關(guān)雜質(zhì)的干擾，方法準(zhǔn)確度良好。

4 結(jié)語

本實驗建立了抗過敏類健康產(chǎn)品中非法添加馬來酸氯苯那敏的HPLC測定方法，并對33批樣品進(jìn)行測定，發(fā)現(xiàn)有5批樣品非法添加馬來酸氯苯那敏。該方法專屬性強(qiáng)、靈敏度高，結(jié)果準(zhǔn)確，可用于抗過敏類健康產(chǎn)品中非法添加馬來酸氯苯那敏的定性及定量測定。

[1] 紀(jì)宇.關(guān)于馬來酸氯苯那敏色譜峰的識別[J].中國藥品標(biāo)準(zhǔn),2004,5(1):31.

[2] 馬春梅,趙變,席榮英,等.高效液相色譜法測定馬來酸氯苯那敏[J].理化檢驗：化學(xué)分冊,2012,48(10):1244-1246.

(責(zé)任編輯：李嵐春)

Detection of Chlorphenamine Maleate in Anti-hypertensive Traditional Chinese Medicine and Health Foods by HPLC

Wei Zhixiong, Liu Dandan

(Dongguan Institute for Food and Drug Control，Guandong Dongguan 523109)

Objective:To establish an HPLC method for the detection of chlorphenamine maleate which were illegally added into antihytensive health products. Methods:Diamosil C18(4.6 mm×250 mm, 5 μm) was adopted with the mobile phase of 0.05 mol/L KH2PO4(1% triethylamine and 0.005 mol/L potassium dihydrogen phosphate, pH was adjusted to 3.0 with phosphoric acid)-methanol (45∶55). The flow rate was 1.0 mL·min-1. The column temperature was 30℃. The detection wavelength was set at 262nm. Results:The method showed a good linear relationship within the range of chlorphenamine maleate 0.100 4～4.016 0 μg (r2=0.999 7). The average recovery was 97.8% with RSD=1.6% (n=6). Chlorphenamine maleate was found in 3 samples.Conclusion:The method is selective and sensitive and can be employed in the detection of chlorphenamine maleate in antihypertensive Traditional Chinese Medicine and Health Foods.

Antihypertensive Traditional Chinese Medicine and Health Foods; Chlorphenamine Maleate; HPLC

2014-03-21

廣東省促進(jìn)科技服務(wù)業(yè)發(fā)展計劃項目(2012B040304001)

魏志雄(1983-)，男，中藥學(xué)博士，廣東省東莞市食品藥品檢驗所工程師，研究方向為保健食品及藥品檢驗。

R941.1

A

1673-2197(2014)12-0019-03