陳永菊

摘要：采用C18（250 mm×4.6mm×5μm）反相色譜柱，在流動(dòng)相為乙腈：水（88∶12，v/v），流速為1.0 ml/min，激發(fā)波長384 nm，發(fā)射波長406 nm，柱溫35 ℃，進(jìn)樣量10 μl 的條件下，建立高效液相色譜法快速測(cè)定植物油中苯并芘殘留量的方法。結(jié)果：本方法的檢出限為0.5μg/kg，加標(biāo)回收率95%～103%，相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差RSD≤2.7%。該法具有樣品預(yù)處理簡便，試劑消耗少，分析時(shí)間短、精密度高等優(yōu)點(diǎn)，適用于植物油中苯并芘殘留量的高效測(cè)定。

關(guān)鍵詞：植物油 苯并（а）芘 高效液相色譜

中圖分類號(hào)：TS20 文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼：A 文章編號(hào)：1672-5336（2014）06-0033-02

Abstract：A method for determination of benzopyrene in vegetable oil by High Performance Liquid Chromatography was established. Using C18 （250mm×4.6mm×5μm） reversed-phase column， with acetonitrile and H2O （88∶12，v/v） as mobile phase，flow rate was 1.0 ml/min， and excitation wavelength was 384nm and emission wavelength was 406 nm， and column temperature was 35℃， and injection volume was 10 μl. Results： The detection limit was 0.5μg/kg， and the recovery rate arange from 95% to 103%， and relative standard deviation RSD was ≤ 2.7%. This method is simple preparation， reagent consumption， short analysis time， precision advantages for vegetable oils and efficient determination of benzopyrene residues.

Key Words：vegetable oil benzopyrene High Performance Liquid Chromatography

苯并（а）芘（BaP）是一種由五個(gè)苯環(huán)構(gòu)成的多環(huán)芳烴，是公認(rèn)的強(qiáng)致癌物之一，已成為當(dāng)前環(huán)境污染中的重要監(jiān)測(cè)物質(zhì)[1，2，3]。苯并芘能夠引起皮膚、肺、食道等部位的腫瘤和癌變，廣泛存在于水、大氣、土壤、動(dòng)植物中。植物油中苯并芘的主要來源包括：油料作物在晾曬過程中可能受到苯并芘污染；在浸出階段溫度過高可能產(chǎn)生苯并芘；在油料焙烤時(shí)也可能產(chǎn)生苯并芘。目前，我國檢測(cè)植物油中苯并芘的國標(biāo)測(cè)定方法（GB/T22509-2008）中，操作過程復(fù)雜，費(fèi)時(shí)、費(fèi)溶劑、溶劑毒性大、回收率不穩(wěn)定、對(duì)試劑和人員要求較高等問題，以致我國很多基層檢驗(yàn)機(jī)構(gòu)不能很好地用此法對(duì)植物油中苯并芘殘留進(jìn)行有效檢測(cè)。因此，尋求更為準(zhǔn)確、快速、簡便的檢測(cè)方法，對(duì)植物油中苯并芘殘留進(jìn)行高效的定性定量分析具有重要意義。

1 材料與方法

1.1 試劑

乙腈、四氫呋喃均為色譜純（TEDIA）；水為去離子水；濾膜（0.22μm，有機(jī)相）；苯并（a）芘標(biāo)準(zhǔn)品購于國家標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)中心。

1.2 儀器與設(shè)備

Agilent1200高效液相色譜儀（配熒光檢測(cè)器FLD）；渦旋混合器。

1.3 色譜條件

色譜柱：Diamonsil C18色譜柱（250×4.6mm，5μm）；流速：1.0mL/min；流動(dòng)相：乙腈+水（88+12）；柱溫：35℃；進(jìn)樣量：10μL；激發(fā)波長384nm；發(fā)射波長406[4]。

1.4 樣品前處理

準(zhǔn)確稱取2.0g樣品，置于10ml容量瓶中，加入5ml四氫呋喃后，搖勻后用乙腈定容，搖勻后過0.22μm有機(jī)濾膜，供HPLC檢測(cè)分析。

1.5 回收率、精密度及檢出限的測(cè)定

稱取均勻破碎試樣約2g，添加定量的BaP標(biāo)準(zhǔn)品，混勻，余下操作按1.3～1.4進(jìn)行，計(jì)算回收率；將濃度為0.01μg/ml的標(biāo)準(zhǔn)樣品按最佳色譜條件重復(fù)測(cè)定6 次并取平均值計(jì)算精密度；對(duì)添加逐級(jí)稀釋得低濃度水平的BaP標(biāo)準(zhǔn)品的食用植物油進(jìn)行測(cè)定，得到方法的檢出限；采用本方法和國標(biāo)GB/T22509-2008兩種方法，對(duì)計(jì)算結(jié)果進(jìn)行分析比較。

2 結(jié)果與分析

2.1 檢測(cè)器的選擇

BaP在紫外和熒光下都有吸收峰。但熒光檢測(cè)器只對(duì)帶熒光基團(tuán)的物質(zhì)有響應(yīng)，因此可有效去除那些不帶有熒光基團(tuán)的雜質(zhì)對(duì)樣品測(cè)定的干擾，大大提高BaP的檢測(cè)靈敏度，故本文采用熒光檢測(cè)器檢測(cè)。

由于大多數(shù)有熒光的化合物在230nm波長下都能被激發(fā)，因此在230nm激發(fā)波長下選擇多波長發(fā)射，發(fā)現(xiàn)406nm為最佳發(fā)射波長，在固定406nm發(fā)射波長后選擇多波長激發(fā)，最終選擇激發(fā)波長384nm，發(fā)射波長為406nm（圖1）。

2.2 苯并芘高效液相色譜測(cè)定條件

比較了3種流動(dòng)相，分別為乙腈+水（84+16）、乙腈+水（88+12）、乙腈+水（90+10），發(fā)現(xiàn)乙腈+水（88+12）條件下苯并芘和樣品中干擾物能達(dá)到較好的基線分離；流速為1.0ml/min 時(shí)，苯并芘出峰時(shí)間約為12.5min，分析時(shí)間短，有利于快速分析且峰形較好，基本達(dá)到基線分離效果。

2.3 線性關(guān)系與檢測(cè)限

對(duì)BaP標(biāo)準(zhǔn)溶液逐級(jí)稀釋后，配制一系列標(biāo)準(zhǔn)溶液，濃度分別為0.5μg/L、2.5μg/L、5.0μg/L、10μg /L、25μg/L、50μg/L，進(jìn)樣高效液相色譜儀上機(jī)測(cè)定，以峰面積A對(duì)BaP濃度Amt（μg/L）作線性回歸方程，A=1.13136927Amt+2.2138403，線性相關(guān)系數(shù)r=0.99985，線性關(guān)系良好，可以依據(jù)此方程進(jìn)行定量分析。根據(jù)對(duì)添加低濃度水平的BaP樣品的測(cè)定，以3倍信噪比計(jì)算檢出限得到，本方法的檢出限為0.5μg/kg。

2.4 加標(biāo)回收率和精密度

為了計(jì)算檢測(cè)方法的回收率和考察本方法的實(shí)用性，向大豆油（圖2）和花生調(diào)和油（圖3）2份樣品中，分別加入2種不同濃度BaP標(biāo)樣（表1），經(jīng)樣品前處理后，采用HPLC檢測(cè)。結(jié)果顯示，選定的樣品經(jīng)處理后，樣品中BaP的加標(biāo)回收率在95%～103%之間，RSD≤2.7%，符合食品檢驗(yàn)分析的要求；與國標(biāo)GB/T22509-2008試驗(yàn)結(jié)果對(duì)比，結(jié)果說明：本方法樣品前處理簡便，且回收率和精密度均較高，方法高效實(shí)用。

3 討論

該研究建立了利用高效液相色譜法高效快速測(cè)定食用植物油中苯并芘殘留的方法。試驗(yàn)結(jié)果表明，其回收率為95%～103%，最低檢出量為2.5μg/kg，符合國標(biāo)中對(duì)食用植物油中苯并芘的檢測(cè)要求。該法樣品預(yù)處理簡單，試劑消耗少，分析時(shí)間短，明顯提高了檢測(cè)效率。且其準(zhǔn)確性和精密度好，是測(cè)定食用植物油中苯并芘含量的較理想方法。

參考文獻(xiàn)

[1]李偉紅，戴廷燦，周瑤敏 等.高效液相色譜法測(cè)定熟肉制品中的苯并（α）芘[J].江西農(nóng)業(yè)學(xué)報(bào)， 2008，20（1）： 86～88.

[2]劉福嶺，戴行均.食品物理與化學(xué)分析方法[M].北京： 輕工業(yè)出版社，1987：41l～425.

[3]Meudec A， Dussauze J，Jourdin M， et al. Gas chromatographic mass spectrometric method for polycyclic aromatic hydrocarbon analysis in plant biota[J].Journal of Chromatography A， 2006， 1108（2）：240-247.

[4]田曉玲，柏云江.高效液相色譜法測(cè)定飼料中的苯并（a）芘[J].飼料工業(yè)，2005，26（1）： 53～54.