唐興華

【摘要】目的：采取差異式的方法探究膠體金試紙條與ELISA法檢測HBsAg的I臨床應(yīng)用價值及優(yōu)點(diǎn)和特點(diǎn)，為臨床積累寶貴資料。

【關(guān)鍵詞】 ELISA法 膠體金試紙條檢測HBsAg 差異分析

【中圖分類號】R446.6 【文獻(xiàn)標(biāo)識碼】B【文章編號】1004-4949（2014）03-0349-02

我國是世界公認(rèn)的乙肝大國，乙肝病毒人群攜帶率約10% ，乙型肝炎是目前流行最廣泛、危害最嚴(yán)重的病毒性肝炎診部從2009年主動來檢測乙肝五項(xiàng)指標(biāo)的4183人中，對未感染者實(shí)施預(yù)防接種，以降低人群發(fā)病率；對406陽性標(biāo)本進(jìn)行了膠體金試紙條與ELISA法進(jìn)行比較，分析二者在結(jié)果上的差異性，并將強(qiáng)陽性的20份標(biāo)本做倍比稀釋分析二者的靈敏度。

1 ELISA法特點(diǎn)

1.1靈敏性高

該測定法的靈敏度來自作為報告集團(tuán)的酶。眾所周知， 酶是一種有機(jī)催化劑，很少量的酶即可誘導(dǎo)大量的催化反應(yīng) ，產(chǎn)生可供觀察的顯色反應(yīng)現(xiàn)象。因此該體系常被稱為酶放大體系。ELISA實(shí)現(xiàn)了在細(xì)胞或亞細(xì)胞水平上示蹤抗原或抗體的所在部位，或在微克、甚至納克水平上對其進(jìn)行定量。

1.2特異性強(qiáng)

其特異性來自抗體或抗原的選擇性?？乖贵w的結(jié)合實(shí)質(zhì)上只發(fā)生在抗原的抗原決定簇與抗體的抗原結(jié)合位點(diǎn)之間。由于兩者在化學(xué)結(jié)構(gòu)和空間構(gòu)型上呈互補(bǔ)關(guān)系，所以抗原抗體反應(yīng)具有高度的特異性。

膠體金試紙條診斷技術(shù)

2膠體金試紙

膠體金試紙條診斷是采用膠體金免疫層 析技術(shù)研制而成，該技術(shù)是90 90年代初在免疫 析技術(shù)研制而成，該技術(shù)是90年代初在免疫 滲濾技術(shù)的基礎(chǔ)上建立的一種簡易快速的免 疫學(xué)檢測技術(shù)， 疫學(xué)檢測技術(shù)，最先用于人絨毛膜促性腺激 HCG） 素 （ HCG） 的測定和乙型肝炎病毒表面抗原 HBsAg）等檢測。 （HBsAg）等檢測。gold） 膠 體 金 （ Colloidal gold） 是 氯 金 酸 的水溶膠， （HAuCl4）的水溶膠，氯金酸在還原劑的作 用下，聚合成特定大小的金顆粒， 用下，聚合成特定大小的金顆粒，并由于靜 電作用成為一種穩(wěn)定的膠體狀態(tài)。 電作用成為一種穩(wěn)定的膠體狀態(tài)。

3膠體金的質(zhì)量判定標(biāo)準(zhǔn)

質(zhì)量好的膠體金：溶液呈紅色， 質(zhì)量好的膠體金：溶液呈紅色，膠體金顆粒為球 大小均一，無棱角。 形，大小均一，無棱角。 質(zhì)量差的膠體金：溶液呈紫色，大小不一， 質(zhì)量差的膠體金：溶液呈紫色，大小不一，形狀 各異。 各異。

4膠體金標(biāo)記的原理：

膠體金標(biāo)記的原理：膠體金在堿性條件下帶 負(fù)電荷， 負(fù)電荷，與蛋白質(zhì)分子的正電荷基團(tuán)藉靜電 吸引而形成牢固結(jié)合。 吸引而形成牢固結(jié)合。 膠 體 金 標(biāo) 記 技 術(shù) （ Immunogold labeling technique） technique） 是以膠體金作為示蹤標(biāo)記物應(yīng) 用于抗原抗體反應(yīng)的一種新型免疫標(biāo)記技術(shù)。 用于抗原抗體反應(yīng)的一種新型免疫標(biāo)記技術(shù)。

6膠體金試紙條診斷技術(shù)的原理

以硝酸纖維素膜為載體， 以硝酸纖維素膜為載體 ， 利用了微孔膜 的毛細(xì)血管作用， 的毛細(xì)血管作用 ， 滴加在膜條一端的液體慢 慢向另一端滲移， 通過抗原抗體結(jié)合， 慢向另一端滲移 ， 通過抗原抗體結(jié)合 ， 并利 用膠體金呈現(xiàn)顏色（紅色）反應(yīng)，檢測抗原/ 用膠體金呈現(xiàn)顏色（紅色）反應(yīng)，檢測抗原/ 抗體。 抗體。

7資料與方法

試紙條為英科新創(chuàng)（廈門）科技有限公司乙肝病毒表面抗原（HBsAg）膠體金法診斷試劑，酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)試劑為3v生物工程集團(tuán)有限公司乙肝病毒表面抗原診斷試劑，所有試劑均在有效期內(nèi)。標(biāo)本來源：2009年門診部檢測的4183人中，將用ELISA法篩查出的406例乙肝陽性標(biāo)本，再行膠體金試紙法檢測，并取HBsAg強(qiáng)陽性標(biāo)本20例，用生理鹽水做倍比稀釋（原液1：2、1：4～1：512）。

8方法：

兩種方法均嚴(yán)格按照試劑說明書進(jìn)行操作。結(jié)果判斷：①膠體金試紙條：按說明書判斷結(jié)果。②ELISA法：樣品A值s/C.O≥1.0者HBsAg為陽性。

9結(jié)果

用ELISA法檢測出的406份HBsAg條檢測HBsAg，僅有3份標(biāo)本未檢出，檢出率99.01%。將倍比稀釋后的標(biāo)本再行膠體金試紙條檢測HBsAg，結(jié)果一致。

10討論

ELISA法具有靈敏度較高、特異性強(qiáng)、重復(fù)性好、可進(jìn)行定量和半定量測定等優(yōu)點(diǎn)，可以在酶免疫分析儀上做批量檢測，是目前實(shí)驗(yàn)室最常用的檢測HBsAg的方法，但是該方法易受加樣、反應(yīng)溫度、反應(yīng)時問、洗滌徹底性等諸多因素的影響，而且操作步驟較多，整個試驗(yàn)過程至少需要2小時左右，因此不適用于急診及無償獻(xiàn)血現(xiàn)場篩查。膠體金試紙條法是在ELISA法基礎(chǔ)上發(fā)展起來的一種快速檢測技術(shù)，具有操作簡便、快捷、可單份檢測、便于保存、不需特殊設(shè)備等優(yōu)點(diǎn)，也廣泛應(yīng)用于臨床對HBsAg進(jìn)行初篩，對急診及無償獻(xiàn)血的現(xiàn)場的篩查有其實(shí)用價值，可避免無效采血所造成的浪費(fèi)，節(jié)省了大量的人力、物力。目前，國產(chǎn)的HBsAg膠體金試紙條檢測靈敏度已達(dá)到1ng/ml。但是膠體金試紙條在HBsAg檢測中也有一定的欠缺。由于膠體金顯色需要較高濃度的標(biāo)記物，故其靈敏度會受到一定限制，在HBsAg濃度較低時易出現(xiàn)假陰性。因此，盡管該操作簡便、快速、無需特殊設(shè)備，肉眼可以直接觀察結(jié)果，但對于低滴度HBsAg感染者極易造成漏檢。為避免假陰性的產(chǎn)生，最好用ELISA法進(jìn)行HBsAg測定，另外溶血標(biāo)本也會影響到試紙條的檢測結(jié)果。ELISA法與膠體金試紙條法各自具有一定的優(yōu)缺點(diǎn)，在臨床檢驗(yàn)工作中，可根據(jù)具體情況進(jìn)行選擇。

從以上結(jié)果可以看出，與ELISA法相比，存在一定的漏檢率，不能完全代替ELISA法，ELISA法仍是臨床免疫學(xué)診斷的主要依據(jù)[2]。造成膠體金試紙條法漏檢的原因主要有原理及方法學(xué)上的差異、試劑本身的靈敏度較ELISA法低、個別標(biāo)本可能存在HBsAg亞型以及溫度、觀測結(jié)果的時間短等[1]。筆者建議在使用膠體金試紙條檢測HBsAg觀察結(jié)果時，若陰性，應(yīng)適當(dāng)延長反應(yīng)時間再觀察結(jié)果，以60 min為宜，以免造成HBsAg弱陽性的漏檢。

11結(jié)論

綜合性醫(yī)院一般不宜使用膠體金試紙條法檢測患者的HBsAg，對于膠體金試紙條法篩查陰性的臨床標(biāo)本，建議用ELISA復(fù)檢，以防漏檢造成人為差錯而延誤診斷甚至引起醫(yī)患矛盾或醫(yī)療糾紛。

參考文獻(xiàn)

[1]紅.ELISA法與膠體金試紙條檢測Hb—sAg差異分析.公企醫(yī)刊，2010：O1.

[2]陳向陽.膠體金免疫層析法與ELISA檢測HbsAg的比較.上海醫(yī)學(xué)檢驗(yàn)雜志，2001：05.

[3] 楊靜.抗乙型肝炎病毒藥物靶標(biāo)的篩選和驗(yàn)證.中國人民解放軍軍事醫(yī)學(xué)科學(xué)院，2005.經(jīng)