郝紅英 周芳 周彩榮 葉文見
摘要 [目的] 為了尋找適合于標準植酸的測定及微量測定的方法。[方法] 采用可見分光光度法, 測定植酸的含量。[結果] 在標準曲線下,植酸濃度在0~32 μg/ml范圍內與吸光度呈良好線性關系,方程為:Y=-2.284 2X+0.384 1(R=0.997 3),平均回收率為97.35%,RSD為4.82%(n=4)。[結論]該方法操作簡便、快速、準確,可作為植酸的定量分析方法。
關鍵詞 植酸;含量;可見分光光度法
中圖分類號S121文獻標識碼A文章編號0517-6611(2014)07-01907-01
植酸是一種重要的有機磷系添加劑,具有獨特的生理功能和化學性質,在食品、醫(yī)藥、金屬防腐、日化工業(yè)及塑料加工等方面具有廣泛的應用[1]。植酸的測定方法主要有硝酸釷滴定法、測磷分光光度法、高壓液相色譜法、測鐵分光光度法[2-5]。其中,硝酸釷滴定法操作簡單快速,但結果偏高;測磷分光光度法測定準確度高, 精密度好,但硝化較麻煩;高壓液相色譜法測定結果準確,但儀器昂貴;測鐵分光光度法采用植酸為標準,測定準確度與測磷法相近, 但它無需硝化,操作簡便,適合于有標準植酸的測定及微量測定。該研究采用三氯化鐵比色法測定植酸含量。
1材料與方法
以磺基水楊酸為顯色劑,在505 nm波長下,pH為2~3左右的酸性介質中,磺基水楊酸與Fe3+形成紫紅色絡合物,可滿足鐵含量測定的要求。在酸性介質中植酸能與三價鐵鹽專一定量沉淀,沉淀形式為[(C6H6)(OH)H3(PO4)5]3Fe7,而不受其他酸溶性磷的影響。濾去沉淀物,用紫外分光光度計測定剩下鐵的濃度,即可測得與菲丁結合的鐵濃度[6-7]。
取植酸提取液2 ml,加入濃度15%TCA 2 ml,在10 ml硬質玻璃試管中混勻,于4 ℃冰箱中靜置2 h后,4 000 r/min離心30 min;吸取上清2 ml,用0.75 mol/L NaOH調節(jié)pH為6.0~6.5,加蒸餾水至30 ml,混勻。取3 ml稀釋液,加1 ml濃度0.3%磺基水楊酸、濃度0.03%FeCl3·6H2O試劑,混勻后于505 nm處比色。
植酸含量=100×0.384 1-吸光度12.284 2
2結果與分析
2.1入射光波長的選擇入射光的波長應根據(jù)吸收光譜曲線,以選擇溶液具有最大吸收時的波長為宜。取7號液,以1號空白液為參比溶液,掃描出最大吸收波長為505 nm。
2.2顯色時間的選擇準確吸取一定量的試樣,每次只改變一個時間因素,測定吸光度(A),選出適宜的顯色時間。由圖1可知,顯色時間以15~20 min為宜。
圖1吸光度與顯色時間的關系2.3酸度的影響酸度對測定結果有較大的影響。隨著pH的變化,磺基水楊酸與Fe3+的顯色反應呈現(xiàn)不同的顏色。在pH為2~3時,生成紫紅色絡合物;在pH為4~7時,生成棕橙色絡合物;在pH為8~10時,生成黃色絡合物。所以,在顯色反應時,應嚴格控制pH。該試驗選用的pH為2~3。
2.4 工作曲線分別取0.1 g/L 植酸標準液0、0.2、0.4、0.6、0.8、1.0、1.4 ml于10 ml 玻璃試管中,分別加蒸餾水3.0、2.8、2.6、2.4、2.2、2.0、1.6 ml,分別加1 ml濃度0.03%FeCl3·6H2O、濃度0.3%磺基水楊酸試劑,搖勻,待測。 在505 nm處,以1號為參比溶液,測定所配制的2~9號溶液的吸光度,并作出工作曲線(圖2)。按照確定的試驗條件,加入標準植酸,測定回收率。由表1可知,4個樣品的添加量的回收率范圍為93.3%~104.0%,總平均為97.35%,表明采用三氯化鐵比色法測定標準植酸的含量時回收率較好,結果穩(wěn)定。