李大鵬　呂丹　李震等

摘要：目的 設(shè)計添加谷氨酰胺的血液保存抗凝劑及探討對紅細(xì)胞的影響，總結(jié)其臨床意義。方法 選取標(biāo)本分實(shí)驗組A和對照組B，每組均為相對應(yīng)的1～10管，A組抗凝劑為標(biāo)準(zhǔn)枸櫞酸鈉溶液和丙氨酰谷氨酰胺注射液稀釋液，B組抗凝劑為標(biāo)準(zhǔn)枸櫞酸鈉液，比較兩組標(biāo)本在采血后第3、6、9、12d的血K+檢測結(jié)果，并予以統(tǒng)計分析。結(jié)果 兩組標(biāo)本第3、6、9、12d血K+均高于正常值，A與B組內(nèi)比較均有顯著性差異（P<0.05）；A與B組間比較，第3d檢測值有顯著性差異（P<0.05）。結(jié)論標(biāo)準(zhǔn)枸櫞酸鈉溶液加入丙氨酰谷氨酰胺注射液制成新型血液保存抗凝劑，對紅細(xì)胞抗凝及保護(hù)作用優(yōu)于標(biāo)準(zhǔn)枸櫞酸鈉溶液。

關(guān)鍵詞：血液；抗凝劑；丙氨酰谷氨酰胺；谷氨酰胺；枸櫞酸鈉

枸櫞酸鈉為常用的血液抗凝劑，枸櫞酸鈉、枸櫞酸、無水葡萄糖可制成常用的ACD配方血液保存液。血液抗凝劑是影響采集存儲紅細(xì)胞的主要因素[1-2]，為提高血液抗凝及紅細(xì)胞保存效果，筆者選擇添加谷氨酰胺（glutamine，Gln）方式制成新型血液保存抗凝劑，并通過采集存儲血液中血K+指標(biāo)研究不同抗凝劑對采集紅細(xì)胞影響，現(xiàn)報道如下。

1 資料與方法

1.1新型抗凝劑制備 由于Gln較難溶于水，且丙氨酰谷氨酰胺在血液中可迅速分解為丙氨酸和Gln，故添加Gln方式選取丙氨酰谷氨酰胺注射液（四川科倫，50ml：10g），加入0.9%氯化鈉注射液50ml稀釋。

按丙氨酰谷氨酰胺使用時其在與載體溶液混合液中最大濃度不能超過3.5%的要求，丙氨酰谷氨酰胺注射液稀釋液按1：2比例加入標(biāo)準(zhǔn)枸櫞酸鈉溶液制成新型血液保存抗凝劑。新型抗凝劑按其中標(biāo)準(zhǔn)枸櫞酸鈉溶液與全血1：9體積比進(jìn)行采血，4℃～6℃條件下保存。

1.2新型抗凝劑評價

1.2.1方法 選擇添加與未添加Gln的血液保存抗凝劑采集血液并進(jìn)行對照比較。

選20只試管均分為A、B組。A組為實(shí)驗組，1～10管中分別加入3.8%枸櫞酸鈉溶液0.2ml和丙氨酰谷氨酰胺注射液稀釋液0.1ml；B組為對照組，1～10管分別加入3.8%枸櫞酸鈉溶液0.2ml。采集10名男性無償獻(xiàn)血官兵未抗凝靜脈血，分別對應(yīng)加入A、B兩組1～10試管中，均加入1.8ml，充分搖勻并放置到4℃～6℃冰箱中保存待檢。

采血后第3、6、9、12d，應(yīng)用OlympusPu-2400全自動生化分析儀及其配套試劑，按操作規(guī)程進(jìn)行標(biāo)本血K+測定，正常范圍3.5～5.5mmol/L。

1.2.2統(tǒng)計學(xué)方法 檢驗數(shù)據(jù)以均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差（x±s）表示。選擇SPSS13.0統(tǒng)計學(xué)軟件進(jìn)行處理，組間及組內(nèi)比較采用均數(shù)t檢驗，P<0.05為具有顯著性差異。

2 結(jié)果

采血后第3、6、9、12d檢測血K+，A、B兩組標(biāo)本血K+均高于正常范圍。

A、B兩組組內(nèi)不同時間檢測數(shù)據(jù)均分為①～④組，以（x±s）表示。組內(nèi)均按時間進(jìn)行①②、②③、③④比較，均存在顯著性差異（P<0.05）（見表1），提示血K+隨標(biāo)本放置時間延長而不斷升高。

A、B兩組組間均按①～④分別采用兩樣本t檢驗（見表1）：①t=3.088、P<0.05，有顯著性差異；②t=0.792、P<0.5，無顯著性差異；③t=0.168、P<0.5，無顯著性差異；④t=0.331、P<0.5，無顯著性差異。提示2種抗凝劑在采集血液3d內(nèi)對紅細(xì)胞影響存在顯著性。

A、B兩組紅細(xì)胞外觀檢測：采血后第16dB組發(fā)生肉眼可見溶血，第19dA組發(fā)生肉眼可見溶血。見表1。

3 討論

枸櫞酸鈉是國際上最通用的抗凝劑，是血液保存液中基本抗凝物質(zhì)，具有抗凝及阻止溶血發(fā)生作用，應(yīng)用十分廣泛[3-4]?？茖W(xué)改良現(xiàn)有血液保存抗凝劑，提高臨床輸血及檢驗工作質(zhì)量，成為當(dāng)前重要研究課題[1，5]。

Gln可減少和對抗自由基對機(jī)體組織器官的損傷，提高血漿中谷胱甘肽水平及機(jī)體抗氧化水平[6，7]，其被酶解產(chǎn)生NH4增加紅細(xì)胞膜的流動性及對機(jī)械壓的抗性，減少自由基對紅細(xì)胞膜的損傷而產(chǎn)生保護(hù)作用。為此，本文設(shè)計添加Gln的新型抗凝劑并選擇紅細(xì)胞外血K+作為評價指標(biāo)，研究不同抗凝劑對采集存儲紅細(xì)胞的影響。

血液保存液是影響血液采集存儲的主要因素，紅細(xì)胞膜是最易受自由基攻擊的目標(biāo)。隨血液存儲時間延長，血液中自由基明顯增多，導(dǎo)致細(xì)胞膜脂質(zhì)過氧化，紅細(xì)胞膜過氧化脂質(zhì)顯著增高，紅細(xì)胞膜Na+K+-ATP酶和Ca2+Mg2+-ATP酶活性顯著下降[8]，使 Na+、Ca2+等轉(zhuǎn)運(yùn)失常，紅細(xì)胞內(nèi)Na+、Ca2+含量升高和鉀離子外流，紅細(xì)胞內(nèi)鉀離子降低，其膜上脂蛋白和脂質(zhì)逐漸喪失，紅細(xì)胞內(nèi)2.3二磷酸甘油酸也逐漸降低，紅細(xì)胞逐漸變形且脆性增加易發(fā)生溶血[9-10]，細(xì)胞外血K+成為反映紅細(xì)胞膜穩(wěn)定及代謝程度的重要標(biāo)志，本文A、B兩組組內(nèi)不同時間檢測血K+結(jié)果證明了這一點(diǎn)。

本文血液采集3d內(nèi)A、B2組組間比較存在顯著性差異（P<0.05），表明新型血液抗凝劑和標(biāo)準(zhǔn)枸櫞酸鈉溶液對紅細(xì)胞保護(hù)作用存在顯著性，新型抗凝劑對紅細(xì)胞保護(hù)作用優(yōu)于傳統(tǒng)抗凝劑；采血后第6、9、12d兩組組間數(shù)據(jù)比較均無顯著性差異（P<0.5），可能與2種抗凝劑均未加入葡萄糖有關(guān)，因保存期內(nèi)全血紅細(xì)胞代謝所需能量主要由葡萄糖提供[11]。

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