鞠守勇 曹志林 李金山

摘要

[目的]篩選并鑒定納豆芽胞桿菌。[方法]篩選芽胞桿菌，顯微鏡觀察其菌落形態(tài)，生理生化鑒定，測(cè)定其生長(zhǎng)曲線及產(chǎn)納豆激酶的酶活力。[結(jié)果]篩選到一株產(chǎn)納豆激酶的納豆芽胞桿菌ZD023。該菌最高酶活力可以達(dá)263.38 IU/ml。[結(jié)論] 篩選到一株產(chǎn)納豆激酶的納豆芽胞桿菌ZD023，為下一步開發(fā)成具有溶栓功能的食品或藥品奠定基礎(chǔ)。

關(guān)鍵詞 納豆激酶；芽胞桿菌；分離

中圖分類號(hào) S182 文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼 A 文章編號(hào) 0517-6611（2014）13-03784-03

Abstract [Objective] The research aimed to isolate and identify a Bacillus strain producing Nattokinase. [Method] Isolated Bacillus strain， observed its colony morphology， measured its growth curve and enzyme activity of Nattokinase produced by the strain [Result] Isolation and identification of a Bacillus strain produced Nattokinase， named ZD023. Its highest enzyme activity was 263.38 IU/ml. [Conclusion] Isolation and identification of a Bacillus natto ZD023 could provide the foundation for the development of functional food or drugs with thrombolytic acitivity.

Key words Nattokinase； Bacillus； Isolation

血栓疾病是一類嚴(yán)重危害人類健康和生命的疾病，包括心血栓、腦血栓、肺栓塞和末梢動(dòng)靜脈血栓等常見疾病[1]。隨著我國(guó)人們生活水平的提高，膳食中高脂肪、高蛋白被過量攝取，血栓性疾病已超過癌癥和糖尿病成為第一大健康殺手，每年約有350萬人死于心血管病，占總死亡原因的41%[1]。因此，研究開發(fā)治療血栓性疾病的藥物一直是醫(yī)學(xué)上的熱點(diǎn)。

1987年須見洋行[2]博士首先發(fā)現(xiàn)了溶解血栓的生物武器——納豆激酶（Nattokinase，NK）。它是由納豆芽胞桿菌（Bacillus natto）產(chǎn)生的一種具有纖溶活性的中性絲氨酸蛋白酶。它可用于治療和預(yù)防血栓病，通過口服直接溶解血栓，被認(rèn)為是一種非常有前途的溶血栓和抗血栓藥物。由于納豆激酶的優(yōu)點(diǎn)，近年圍繞納豆激酶生產(chǎn)菌株篩選的工作方興未艾。該研究從湖北武漢市土壤中篩選到一株產(chǎn)納豆激酶的納豆芽胞桿菌ZD023，研究了菌落形態(tài)，進(jìn)行生理生化鑒定及16S rRNA基因比對(duì)，采用纖維蛋白平板法測(cè)定了其產(chǎn)納豆激酶的酶活力，為下一步開發(fā)成具有溶栓功能的食品或者藥品奠定基礎(chǔ)。

對(duì)該菌株進(jìn)行菌落形態(tài)、細(xì)胞形態(tài)觀察。通過生理生化分析及16S rRNA基因分析，初步認(rèn)定該菌為納豆芽胞桿菌；同時(shí)，測(cè)定了30 ℃ LB液體培養(yǎng)基中生長(zhǎng)曲線以及發(fā)酵時(shí)間與產(chǎn)納豆激酶的關(guān)系，該菌最高酶活力可以達(dá)263.38 IU/ml。這為下一步研究其液體發(fā)酵產(chǎn)納豆激酶進(jìn)行溶栓藥物的研究且開發(fā)具有自主知識(shí)產(chǎn)權(quán)的生物溶栓藥物奠定基礎(chǔ)。

參考文獻(xiàn)

[1]心血管防治研究中心.中國(guó)心血管病報(bào)告[M].北京：中國(guó)大百科全書出版社，2013：8.

[2] SUMI H，HAMADA H，TSUSHIMA H，et al.A novel fibrinolytic enzyme （nattokinase） in the vegetable cheese Natto； a typical and popular soybean food in the Japanese diet[J].Experientia，1987，43（10）：1110-1111.

[3] 趙斌，何紹江.微生物學(xué)實(shí)驗(yàn)[M].北京：科學(xué)出版社，2002.

[4] 李妍.產(chǎn)納豆激酶細(xì)菌的篩選及酶學(xué)性質(zhì)的研究[D].泰安：山東農(nóng)業(yè)大學(xué)，2012.

[5] ASTRUP T，MULLERTZ S.The fibrin plate method for estimating fibrinolytic activity[J].Archives of Biochemistry and Biophysics，1952，40（2）：346-351.

[6] 李小麗.納豆芽胞桿菌分離及納豆激酶活性的研究[D].合肥：安徽農(nóng)業(yè)大學(xué)，2009.

[7] 奚曉琦，王加啟，卜登攀，等.納豆芽胞桿菌的分離鑒定及納豆激酶高產(chǎn)菌株的篩選[J].東北農(nóng)業(yè)大學(xué)學(xué)報(bào)，2009（11）：75-81.

[8] 王萍，杜連祥，路福平，等.溶栓納豆芽胞桿菌的篩選鑒定及產(chǎn)納豆激酶條件的研究[J].食品與發(fā)酵工業(yè)，2006（2）：74-77.