華海俠,董玉寶,王曉華,姚 薇,王 玲,付占昭*,顧 濤,趙 敏
(秦皇島市第一醫(yī)院1.腫瘤內(nèi)科;3.老年病科;4.急診科;5.病理科,河北秦皇島066000;2.撫寧縣人民醫(yī)院腫瘤科,河北秦皇島066300)
Snail和SRF在人惡性腦膠質(zhì)瘤中的表達(dá)及其與微血管密度的關(guān)系
華海俠1,董玉寶2,王曉華3,姚 薇1,王 玲4,付占昭1*,顧 濤1,趙 敏5
(秦皇島市第一醫(yī)院1.腫瘤內(nèi)科;3.老年病科;4.急診科;5.病理科,河北秦皇島066000;2.撫寧縣人民醫(yī)院腫瘤科,河北秦皇島066300)
膠質(zhì)瘤是神經(jīng)系統(tǒng)常見腫瘤,手術(shù)和傳統(tǒng)放化療手段效果不佳[1]。膠質(zhì)瘤的發(fā)生機(jī)制尚未完全闡明,但是目前認(rèn)為腫瘤細(xì)胞獲得侵襲和轉(zhuǎn)移的能力,以及產(chǎn)生放化療耐藥能力是腫瘤復(fù)發(fā)和生存率低的分子基礎(chǔ)[2]。本研究通過檢測(cè)鋅指蛋白轉(zhuǎn)錄因子Snail和血清反應(yīng)因子(SRF),觀察二者與微血管密度(MVD)之間的關(guān)系,為探討膠質(zhì)瘤發(fā)生機(jī)制提供一定的實(shí)驗(yàn)依據(jù)。
1.1 臨床標(biāo)本 收集秦皇島市第一醫(yī)院2010年6月至2012年6月間手術(shù)切除,經(jīng)病理確診的腦膠質(zhì)瘤石蠟標(biāo)本80例,并按照2007年WHO中樞神經(jīng)系統(tǒng)腫瘤分類及分級(jí)標(biāo)準(zhǔn)復(fù)診并進(jìn)行病理組織學(xué)分級(jí),其中Ⅰ級(jí)5例,Ⅱ級(jí)32例,Ⅲ級(jí)25例,Ⅳ級(jí)18例。對(duì)照組腦組織15例,均來自癌旁正常腦組織。
1.2 方法 所有石蠟切片均常規(guī)行HE染色,均由2名病理科醫(yī)師分別進(jìn)行組織學(xué)觀察,5μm連續(xù)切片,分別行Snail、SRF和CD34免疫組織化學(xué)染色,抗體濃度均為1∶100,采用枸鹽酸熱修復(fù),實(shí)驗(yàn)中分別設(shè)立陰性對(duì)照和陽(yáng)性對(duì)照。
1.3 結(jié)果判定 由2名病理科醫(yī)師獨(dú)立閱片,在400倍視野下觀察10個(gè)視野,每視野計(jì)數(shù)100個(gè)細(xì)胞,計(jì)算陽(yáng)性細(xì)胞百分比,按照以下4級(jí)進(jìn)行計(jì)分:0分:陽(yáng)性細(xì)胞數(shù)<10%;1分:10%-25%;2分:26%-50%;3分:51%-75%;4分:>75%。染色強(qiáng)度評(píng)分標(biāo)準(zhǔn):無(wú)色0分;淡黃色1分;棕黃色2分;棕色或棕褐色3分。以兩者乘積作為陽(yáng)性評(píng)判標(biāo)準(zhǔn),其中4分以上定義為陽(yáng)性。CD34表達(dá)以血管內(nèi)皮細(xì)胞胞漿棕黃色著色,計(jì)數(shù)標(biāo)準(zhǔn)為:棕黃色的單個(gè)、數(shù)個(gè)內(nèi)皮細(xì)胞可計(jì)數(shù)為1個(gè)血管,計(jì)數(shù)5個(gè)不連續(xù)高倍視野內(nèi)的微血管數(shù),取其平均值作為該病例的微血管密度值。
1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理 用SPSS13.0進(jìn)行統(tǒng)計(jì),不同組別間比較采用χ2檢驗(yàn),MVD兩組間采用t檢驗(yàn),相關(guān)性分析采用spearman相關(guān)系數(shù)法,以P<0.05表示差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。
2.1 Snail、SRF在兩組中的表達(dá) Snail、SRF在膠質(zhì)瘤中陽(yáng)性表達(dá)率分別為70.00%、45.00%,顯著高于對(duì)照組的26.67%、13.33%,兩組間比較差異均具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。
2.2 CD34染色結(jié)果及MVD測(cè)定 膠質(zhì)瘤組織中血管壁CD34免疫組織化學(xué)染色呈棕黃色,微血管形態(tài)呈芽狀、管狀、條索狀。腦膠質(zhì)瘤組中MVD值為42.12±12.18,顯著高于對(duì)照組的13.14±3.26,差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。
2.3 Snail、SRF、MVD在腦膠質(zhì)瘤中表達(dá)的臨床意義 如表2所示,Snail、SRF、MVD在腦膠質(zhì)瘤中的差異表達(dá),與性別、年齡、腫瘤大小均無(wú)關(guān)(P>0.05);而與腫瘤級(jí)別和1年復(fù)發(fā)率密切相關(guān),差異均具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。
表1 Snail、SRF在對(duì)照組及腦膠質(zhì)瘤組中的表達(dá)
表2 Snail、SRF和MVD在腦膠質(zhì)瘤組織中表達(dá)的臨床意義
2.4 Snail、SRF與MVD在腦膠質(zhì)瘤組織中表達(dá)的相關(guān)性分析 Snail陽(yáng)性組MVD值為48.24± 14.73,顯著高于陰性組的38.12±7.45,差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(t=3.187,P=0.002);SRF陽(yáng)性組MVD值為47.28±10.34,顯著高于陰性組的36.38± 9.25,差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(t=4.972,P=0.000)。
研究表明,腦膠質(zhì)瘤的復(fù)發(fā)和放化療耐性與上皮-間質(zhì)轉(zhuǎn)化(EMT)關(guān)系密切[5]。在腦膠質(zhì)瘤SHG-44細(xì)胞中過表達(dá)整連素相關(guān)蛋白激酶能夠誘導(dǎo)Snail蛋白表達(dá)上調(diào),細(xì)胞獲得更強(qiáng)的遷移和侵襲能力。在本研究中發(fā)現(xiàn)Snail在膠質(zhì)瘤組織中高表達(dá),并與腫瘤級(jí)別和復(fù)發(fā)關(guān)系密切,提示Snail在膠質(zhì)瘤中的高表達(dá)多提示預(yù)后不良。而轉(zhuǎn)錄因子SRF在EMT中發(fā)揮重要調(diào)控作用,能夠調(diào)控惡性腫瘤的進(jìn)行性進(jìn)展,破壞細(xì)胞連接,使腫瘤細(xì)胞松散獲得遷移可能,并能夠促進(jìn)腫瘤細(xì)胞增殖,上調(diào)基質(zhì)金屬蛋白酶(MMP)-2、-9的表達(dá),使腫瘤細(xì)胞更易浸潤(rùn)和侵襲;SRF的轉(zhuǎn)錄能夠誘導(dǎo)腫瘤細(xì)胞獲得間質(zhì)細(xì)胞表型,促進(jìn)遷移和侵襲的能力提高,提示SRF在腫瘤的發(fā)生、發(fā)展進(jìn)程中起到了較為重要的調(diào)控作用,其對(duì)膠質(zhì)瘤細(xì)胞的遷移亦具有重要的調(diào)控作用[6]。
[1]Chang L,Su J,Jia X,et al.Treating malignant glioma in Chinese patients:update on temozolomide[J].Onco Targets Ther,2014,7:235.
[2]Miyazono K,Ehata S,Koinuma D.Tumor-promoting functions of transforming growth factor-βin progression of cancer[J].Ups J Med Sci,2012,117(2):143.
[3]Chiang C,Ayyanathan K.Snail/Gfi-1(SANG)family zinc finger proteins in transcription regulation,chromatin dynamics,cell signaling,development,and disease[J].Cytokine Growth Factor Rev,2013,24(2):123.
[4]Zhao M,Xu H,He X,et al.Expression of serum response factor in gastric carcinoma and its molecular mechanisms involved in the regulation of the invasion and migration of SGC-7901cells[J].Cancer Biother Radiopharm,2013,28(2):146.
[5]Xi H,Hong X,Min Z,et al.Serum response factor is overexpressed in esophageal squamous cell carcinoma and promotes Eca-109cell proliferation and invasion[J].Oncol Let,2012,5(3):819.
[6]Ziv-Av A,Taller D,Attia M,et al.RTVP-1expression is regulated by SRF downstream of protein kinase C and contributes to the effect of SRF on glioma cell migration[J].Cell Signal,2011,23(12):1936.
2013-07-19)
1007-4287(2014)07-1092-02
*通訊作者
中國(guó)實(shí)驗(yàn)診斷學(xué)2014年7期