侯相山 （山東省東營(yíng)職業(yè)學(xué)院生物與生態(tài)工程學(xué)院 257091）

犬乳腺癌的病理組織學(xué)分析

侯相山 （山東省東營(yíng)職業(yè)學(xué)院生物與生態(tài)工程學(xué)院 257091）

通過(guò)對(duì)病犬腫瘤的病理組織學(xué)檢查來(lái)確定腫瘤的性質(zhì)、癌巢結(jié)構(gòu)、腫瘤細(xì)胞的形態(tài)(異型性)，惡性程度等。探討用犬來(lái)作為研究乳腺腫瘤的模型對(duì)以后研究新的治療方案的意義。利用蘇木素-伊紅(HE)染色與過(guò)碘酸Schiff氏液(PAS)染色，在光學(xué)顯微鏡下進(jìn)行觀察。發(fā)現(xiàn)該病犬患有乳腺癌(碰撞癌)、硬癌。根據(jù)病理切片和相關(guān)資料分析此病犬腫瘤為腺癌、鱗狀上皮癌、鱗化腺癌、軟骨瘤等所組成的混合瘤，且其惡性程度較高，與人類及其它哺乳動(dòng)物乳腺腫瘤有較大的差異。

乳腺癌 混合瘤 犬

乳腺癌是獸醫(yī)臨床上犬常發(fā)的惡性腫瘤，母犬乳腺瘤發(fā)病率約占全部腫瘤性疾病25%～42%，這種疾病在公犬很少發(fā)病(低于3%)[1]。乳腺惡性腫瘤(癌)是犬死亡的重要原因，犬乳腺腫瘤形態(tài)多種多樣，在不同個(gè)體的腫瘤之間或同一個(gè)體腫瘤標(biāo)本的形態(tài)學(xué)特征相差很大，即使在同一切片標(biāo)本上，也可同時(shí)表現(xiàn)為乳頭狀、管狀和髓樣癌，肌上皮增生和軟骨形成等[2-3]。根據(jù)不同的統(tǒng)計(jì)數(shù)據(jù)，母犬一生當(dāng)中發(fā)生這種腫瘤的幾率從2%～20%不等，而發(fā)生良性乳腺腫瘤的幾率則會(huì)高出2～5倍。最近有兩個(gè)大樣本統(tǒng)計(jì)的有關(guān)發(fā)病率的報(bào)告發(fā)表，一個(gè)報(bào)告是對(duì)英國(guó)的病例進(jìn)行統(tǒng)計(jì)，其報(bào)道的發(fā)病率為每年每10萬(wàn)只犬中有205只會(huì)發(fā)生乳腺腫瘤，第二個(gè)報(bào)告則對(duì)瑞典有保險(xiǎn)的8萬(wàn)只母犬進(jìn)行了母犬進(jìn)行了統(tǒng)計(jì)，發(fā)現(xiàn)每年每1萬(wàn)只犬中有111只會(huì)發(fā)生乳腺腫瘤。良性和惡性乳腺腫瘤在犬的某個(gè)特定種群中的發(fā)病率和犬的預(yù)期壽命有關(guān)，而且如果犬在年輕的時(shí)候進(jìn)行過(guò)子宮卵巢摘除手術(shù)，發(fā)病率能夠大大降低。如果犬曾經(jīng)使用過(guò)孕激素防止發(fā)情，則乳腺腫瘤的發(fā)生幾率會(huì)進(jìn)一步升高。

最近幾十年對(duì)人類乳腺腫瘤的研究和報(bào)道比較多，但仍有許多問(wèn)題沒(méi)有解決，盡管已經(jīng)在裸鼠上建立人類的伴侶動(dòng)物犬分享著人類生活得很多方面，如在與人相同的環(huán)境中，接觸的致癌物了人乳腺腫瘤的模型，但是犬是一類患自發(fā)性乳腺腫瘤幾率較高的動(dòng)物(嚙齒類動(dòng)物除外)，并且作為質(zhì)與人類也極其相近，經(jīng)研究已表明，犬惡性乳腺癌的發(fā)病率比女性還要高[4-5]。隨著醫(yī)學(xué)的發(fā)展，對(duì)犬常見腫瘤的形態(tài)學(xué)、組織學(xué)和臨床特征已有相當(dāng)?shù)牧私?，根?jù)病史，臨床癥狀組織學(xué)檢查，可確診常見表在性腫瘤，有條件時(shí)配合X線檢查，超聲檢查，免疫診斷和放射性同位素標(biāo)記，則更利于診斷，但許多腫瘤特別是惡性腫瘤則常在手術(shù)切除后經(jīng)組織學(xué)檢查后才得以確診[6]。對(duì)犬的腫瘤往往采取手術(shù)切除方法進(jìn)行治療，有時(shí)也采取冷凍療法和放射線療法。

此次觀察與研究分析，是對(duì)2000年5月24日黑龍江省雙鴨山市興達(dá)畜禽疾病研究所送檢的一條雜種犬的乳腺腫瘤組織做病理學(xué)觀察與回顧性病理學(xué)分析。根據(jù)提供的犬乳腺腫瘤組織進(jìn)行了病理組織學(xué)與組織化學(xué)檢查，在HE、PAS染色，借助顯微鏡觀察發(fā)現(xiàn)，該病犬乳腺癌組織中同時(shí)存在腺癌、鱗狀上皮癌、鱗化腺癌、軟骨瘤等。腫瘤組織異型性大，腫瘤細(xì)胞形態(tài)也呈現(xiàn)多樣性，細(xì)胞核分裂相多見，多種癌與瘤變組織構(gòu)成的混合瘤，惡化程度極高。此種病例在獸醫(yī)臨床中報(bào)道較少，對(duì)腫瘤病理學(xué)學(xué)、比較病理學(xué)、獸醫(yī)臨床病理學(xué)研究有很大的臨床參考價(jià)值。

1 材料與方法

1.1 材料

1.1.1 腫瘤組織 三塊犬乳腺腫瘤組織由雙鴨山市興達(dá)畜禽疾病研究所提供，病犬，雌性，5歲半。

1.1.2 染色材料 10%的福爾馬林、石蠟、甲醛、飽和碳酸鋰、伊紅、蘇木素、蒸餾水、70%酒精、75%酒精、80%酒精、85%酒精、90%酒精、95%酒精、無(wú)水乙醇、二甲苯、中性樹膠。過(guò)碘酸(HIO4.2H2O)、醋酸鈉、堿性品紅、鹽酸、偏重硫酸鈉、Schiff氏液、純酒精、蒸餾水。萊卡切片機(jī)、恒溫箱、干燥箱、濕盒、Leitz光學(xué)顯微鏡。

1.2 試驗(yàn)方法

1.2.1 HE染色 病理組織切片的制備與HE染色按龔志錦、詹容洲主編《病理組織制片和染色技術(shù)》所敘方法進(jìn)行[7]。

1.2.2 PAS染色 將切片放入0.5%～1%高碘酸氧化20min，schiff氏液避光染色1h，0.5%偏重亞硫酸鈉浸洗，Harris蘇木精染色15min，自來(lái)水沖洗1～2min，1%鹽酸酒精分化1min，1%氨水返藍(lán)5min,自來(lái)水沖洗15min，待干。脫水、透明和封固同HE染色法。

2 結(jié)果

2.1 臨床檢查與處理

該犬為雜種犬，雌性，5歲半，肩高0.5m，體重35kg，毛色灰黑。據(jù)畜主敘述，從發(fā)現(xiàn)至就診已半個(gè)月。該患犬腹下最后一對(duì)乳房皮下觸診有馬鈴薯狀瘤樣物。即左側(cè)乳頭皮下，有長(zhǎng)約14.5cm，橫徑約8.5cm瘤樣物，表皮緊繃，瘤體凸凹不平，近地面有直徑1.5cm擦傷，瘤樣物觸診堅(jiān)硬，右側(cè)乳頭皮下有直徑為3cm 扣狀瘤樣物，表面不平、堅(jiān)硬。該瘤樣物生長(zhǎng)極快，其余未見異常。畜主要求給犬進(jìn)行手術(shù)，對(duì)腫物做病理學(xué)檢查。

經(jīng)手術(shù)鈍性剝離瘤樣物，切面可見明顯包膜。左側(cè)長(zhǎng)14cm，橫徑8cm大型瘤樣物一個(gè)，蠶豆?fàn)盍鰳游?個(gè)，米粒大硬結(jié)(懷疑是腫瘤)6個(gè)，全部摘除。右側(cè)有3cm直徑瘤樣物一個(gè)，米粒大瘤2個(gè)，全部摘除，摘除的瘤樣物，灰白色，擊之有聲，堅(jiān)硬如石，刀切有痕，切角有淺粉色大理石花紋。臨床摘除后，創(chuàng)處皮膚袋狀松弛，并有滲出，順創(chuàng)梭形切除皮膚，結(jié)節(jié)縫合，引流。由于畜主未帶其復(fù)診，故預(yù)后不詳。

2.2 組織學(xué)觀察

2.2.1 HE染色組織學(xué)觀察 常規(guī)HE染色觀察，乳腺瘤樣物中乳腺正常結(jié)構(gòu)完全被破壞。其中有大小不同形態(tài)各異的癌灶。有的癌巢呈塊狀、菊花狀、腺管狀、篩狀、團(tuán)塊狀、小梁狀排列，無(wú)包膜。有的癌巢呈類似膠樣物質(zhì)結(jié)構(gòu)的癌細(xì)胞團(tuán)存在，周圍繞以大量結(jié)締纖維，有的有成片粉紅色細(xì)胞角化灶。間質(zhì)纖維結(jié)締組織廣泛增生，有平滑肌纖維存在。腫瘤細(xì)胞在各個(gè)時(shí)期呈現(xiàn)不同形態(tài)，圓形、橢圓形、梭形、三角形、腺管管腔上皮細(xì)胞由單層變?yōu)閺?fù)層，向管腔內(nèi)突起生長(zhǎng)，越往管腔中心，腫瘤細(xì)胞越大，胞漿越豐富，核越大，核分裂相多見，有的腫瘤細(xì)胞核發(fā)生顆粒變性和空泡變性。間質(zhì)纖維細(xì)胞變大，胞漿豐富，核變大，肌纖維細(xì)胞呈橢圓形，有的發(fā)生顆粒變性，核內(nèi)有兩核仁或多核仁現(xiàn)象，可見核分裂相，癌巢周圍未見炎性細(xì)胞浸潤(rùn)。有髓樣癌灶，癌灶內(nèi)的癌細(xì)胞密集，纖維很少，并有大量淋巴樣細(xì)胞。

圖1 狗乳腺癌癌灶呈塊狀、菊花狀、腺管狀、篩狀 HE 10×

圖2 癌灶呈類似軟骨樣結(jié)構(gòu)。有包膜。纖維組織增生HE 33×

圖3 部分癌巢中心部分呈粉紅色細(xì)胞角化灶HE 10×

圖4 腫瘤細(xì)胞呈圓形、橢圓形、梭形、三角形HE 25×

圖5 狗乳腺癌成片粉紅色細(xì)胞角化灶 HE 10×

圖6 狗乳腺癌腫瘤細(xì)胞呈圓形、橢圓形、梭形、三角形 HE 25×

圖7 疑似髓樣癌

圖8 軟骨瘤大量結(jié)締組織

圖9 軟骨瘤

圖10 軟骨瘤

圖11 鱗化腺癌, 共壁現(xiàn)象

圖12 低分化腺癌的髓樣癌，癌細(xì)胞緊密排列，多邊形，胞漿咯嗜堿性，核仁明顯，排列成片狀。間質(zhì)結(jié)締組織少，其內(nèi)大量淋巴細(xì)胞浸潤(rùn)。

圖13 鱗化腺癌，邊緣癌細(xì)胞已鱗狀化生。

圖14 癌巢小而少，間質(zhì)結(jié)締組織多的硬癌

2.2.2 PAS染色組織學(xué)檢查 PAS染色組織學(xué)檢查呈陰性，其組織形態(tài)類似骨樣組織物質(zhì)，淡染，可見腫瘤細(xì)胞核呈桔黃色。間質(zhì)組織中纖維極其豐富明顯。

圖15 狗乳腺癌 PAS 33×

圖16 狗乳腺癌 PAS 132×

3 討論與結(jié)論

（1）病料組織塊中腺管上皮細(xì)胞發(fā)生癌變，形成腺癌。部分腺癌中發(fā)生角化，出現(xiàn)角化珠，這是上皮組織鱗狀癌的特征[8]。部分軟骨瘤被周圍的腺癌包圍形成較復(fù)雜的結(jié)構(gòu)，并且其癌細(xì)胞及細(xì)胞核異型性極強(qiáng)，核分裂相多見。還有的形成纖維肉瘤，部分發(fā)生骨化。癌巢中有高分化鱗化腺癌。有的癌細(xì)胞或癌細(xì)胞片塊密集，纖維很少，常有大量淋巴細(xì)胞浸潤(rùn)，疑似髓樣癌。PAS染色組織學(xué)檢查呈陰性，這就排除了粘液瘤的可能。（2）乳腺腫瘤是母犬最常見的一類疾病，美國(guó)的一項(xiàng)調(diào)查發(fā)現(xiàn)，犬乳腺腫瘤占所有犬腫瘤發(fā)生率的52%，且41%～53%乳腺腫瘤為惡性的，科學(xué)家認(rèn)為，研究這些腫瘤與種屬之間有很大的相關(guān)性，也有學(xué)者認(rèn)為各種環(huán)境因素和遺傳因素影響犬乳腺腫瘤的發(fā)生[9]。而這些對(duì)人類腫瘤的研究都能夠有所啟發(fā)。而本文此病犬的腫瘤充分體現(xiàn)了犬乳腺腫瘤的特點(diǎn)，其惡性程度極高，且結(jié)構(gòu)復(fù)雜，是多種癌變混合在一起的腫瘤結(jié)構(gòu)。相對(duì)與人類的乳腺腫瘤有較大的差異。據(jù)很多資料表明，犬惡性腫瘤大多為混合瘤[10]，而人類的乳腺腫瘤的類型雖然很多，但很少見類似犬腫瘤這種混合性極強(qiáng)的現(xiàn)象。因此是什么原因?qū)е氯橄倌[瘤如此高的惡性程度，還有如此多樣化的癌巢結(jié)構(gòu)，都有待將來(lái)的進(jìn)一步研究。（3）該犬患有乳腺癌，且該癌巢為乳腺腺癌、高度分化鱗化腺癌與鱗狀上皮癌、軟骨瘤所混合在一起的混合癌(碰撞癌)、硬癌。

本研究將會(huì)對(duì)治療人類乳腺腫瘤提供理論依據(jù)，對(duì)戰(zhàn)勝人類惡性腫瘤提供獨(dú)特的幫助，所以將來(lái)用犬來(lái)作為研究乳腺腫瘤的模型對(duì)以后研究人類乳腺腫瘤新的治療方案有重要意義。

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2014–02–25）