吳瓊，馬宏達(dá)，孫學(xué)惠，胡北，賈輝，陳宇峰

(沈陽(yáng)軍區(qū)總醫(yī)院藥劑科，沈陽(yáng) 110840)

野菊花水提物對(duì)小鼠的鎮(zhèn)痛作用

吳瓊，馬宏達(dá)，孫學(xué)惠，胡北，賈輝，陳宇峰

(沈陽(yáng)軍區(qū)總醫(yī)院藥劑科，沈陽(yáng) 110840)

目的 觀察野菊花水相萃取物(AF)對(duì)小鼠的鎮(zhèn)痛作用。方法采用辣椒素致痛小鼠模型,以小鼠舔足時(shí)間為指標(biāo),觀察小鼠5 min內(nèi)舔足總時(shí)間;采用小鼠熱水甩尾法疼痛模型,記錄甩尾潛伏期;進(jìn)行開(kāi)場(chǎng)實(shí)驗(yàn),考察AF對(duì)小鼠自主活動(dòng)和探索行為的影響;對(duì)閾下劑量戊巴比妥鈉協(xié)同睡眠的作用,以翻正反射消失和恢復(fù)為指標(biāo),記錄小鼠睡眠潛伏期及睡眠時(shí)間。結(jié)果AF可顯著減少小鼠舔足時(shí)間,使熱水所致小鼠甩尾潛伏期明顯延長(zhǎng),對(duì)小鼠自主活動(dòng)無(wú)影響,對(duì)小鼠閾下劑量戊巴比妥鈉協(xié)同睡眠無(wú)影響。結(jié)論AF對(duì)小鼠有明顯的鎮(zhèn)痛作用,這種鎮(zhèn)痛作用與自主活動(dòng)和鎮(zhèn)靜作用無(wú)關(guān)。

野菊花；戊巴比妥鈉；鎮(zhèn)痛作用；甩尾實(shí)驗(yàn)；開(kāi)場(chǎng)實(shí)驗(yàn)

野菊花為菊科植物野菊(Chrysanthemum indicumL.)的干燥頭狀花序,其性涼,味苦、辛,歸肝、心經(jīng),具有清熱解毒、瀉火平肝之功效,用于疔瘡癰腫、目赤腫痛、頭痛眩暈[1-3],藥用歷史悠久。研究證明:野菊花具有抗病毒、降壓、清除氧自由基等作用[2],文獻(xiàn)報(bào)道野菊花水相萃取物(AF)在實(shí)驗(yàn)中表現(xiàn)出潛在的鎮(zhèn)痛活性[3]。筆者在本研究中通過(guò)辣椒素致痛小鼠模型、小鼠熱水甩尾法疼痛模型,開(kāi)場(chǎng)實(shí)驗(yàn)及閾下劑量戊巴比妥鈉協(xié)同睡眠實(shí)驗(yàn)考察野菊花鎮(zhèn)痛作用,為探討其藥理作用提供理論基礎(chǔ)。

1 材料與方法

1.1 動(dòng)物 SPF級(jí)昆明種小鼠[合格證號(hào):SCXK(遼) 2010-0001,遼寧長(zhǎng)生生物技術(shù)有限公司提供],體質(zhì)量(20±2)g,雌雄兼用。自由飲食飲水,適應(yīng)性飼養(yǎng)3 d后用于實(shí)驗(yàn)。

1.2 藥物及樣品制備 野菊花購(gòu)自河北省安國(guó)市健仁藥材有限公司,產(chǎn)地:湖北,批號(hào):090103,經(jīng)沈陽(yáng)藥科大學(xué)孫啟時(shí)教授鑒定為菊科植物野菊(Chrysanthemum indicumL.)的干燥頭狀花序。藥材標(biāo)本保存于沈陽(yáng)軍區(qū)總醫(yī)院藥劑科實(shí)驗(yàn)室。AF的制備:將野菊花的干花和花蕾(3 kg)用75%乙醇在80℃回流提取,將提取液減壓濃縮回收乙醇,得到濃縮稠膏459.4 g,將稠膏先后用石油醚、二氯甲烷、正丁醇和水萃取。將水相萃取液減壓濃縮,得到殘?jiān)?00.1 g,用于鎮(zhèn)痛活性測(cè)定,即每克水相萃取物相當(dāng)于野菊花生藥29.97 g。

1.3 試劑 辣椒素(美國(guó)SIGMA CHEMICAL公司,批號(hào):123H78341)；地西泮注射液(上海旭東海普藥業(yè)有限公司,規(guī)格:2 mg∶10 mL,批號(hào):AH111101,臨用前用0.9%氯化鈉溶液配成所需濃度)；鹽酸嗎啡注射液(青海制藥廠,規(guī)格:每支0.5 mg,批號(hào):2004-02-19,臨用前溶解在0.9%氯化鈉溶液中)；戊巴比妥鈉(上海西悅生物科技有限公司,批號(hào):20110826)；水為超純水,其他試劑均為分析純。

1.4 儀器 HH-2數(shù)顯恒溫水浴鍋(金壇市杰瑞爾電器有限公司)。

1.5 對(duì)辣椒素致痛小鼠的鎮(zhèn)痛作用 取小鼠50只,雌雄各半,隨機(jī)分為5組,每組10只,分組依次灌胃給予AF 75,150,300 mg·kg-1,空白對(duì)照組給予等體積的溶媒。于給藥1 h后(陽(yáng)性藥組于皮下注射嗎啡30 min后,10 mg·kg-1),右足足底注射辣椒素(1.6 μg,25 μL)。記錄每只小鼠在給予足底注射辣椒素后5 min內(nèi)的舔足總時(shí)間[4]。

1.6 對(duì)小鼠熱水甩尾法疼痛模型的鎮(zhèn)痛作用 在室溫26℃條件下,取小鼠,雌雄兼用,將小鼠尾端3 cm浸入(54±1)℃恒溫水浴中,以甩尾潛伏期為指標(biāo),給藥前潛伏期測(cè)3次,間隔為25 min。求其平均值,取潛伏期≤4 s為合格鼠。取合格小鼠50只,隨機(jī)分為5組,每組10只,分組依次灌胃給予AF 75,150, 300 mg·kg-1,空白對(duì)照組給予等體積的溶媒。于給藥1 h后(嗎啡陽(yáng)性藥組于皮下注射30 min后, 10 mg·kg-1)進(jìn)行正式測(cè)試,記錄甩尾潛伏期,為了盡量減少組織損傷截止時(shí)間為8 s[5-8]。

1.7 開(kāi)場(chǎng)實(shí)驗(yàn) 考察AF對(duì)自主活動(dòng)和探索行為的影響,進(jìn)行開(kāi)場(chǎng)實(shí)驗(yàn),參照TSUDA等[9]方法,記錄動(dòng)物5 min內(nèi)直立次數(shù),由底面中心開(kāi)始走動(dòng)的穿越格數(shù),及不動(dòng)的總時(shí)間。取小鼠50只,雌雄各半,隨機(jī)分為5組,每組10只,分別給予AF 75,150, 300 mg·kg-1,空白對(duì)照組給予等體積的溶媒。于給藥1 h后(陽(yáng)性藥組于腹腔注射地西泮30 min后, 1 mg·kg-1)進(jìn)行實(shí)驗(yàn)[5,9-10]。

1.8 對(duì)閾下劑量戊巴比妥鈉協(xié)同睡眠的作用 取小鼠50只,雌雄各半,隨機(jī)分為5組,每組10只,分組依次灌胃給予AF 75,150,300 mg·kg-1,空白對(duì)照組給予等體積的溶媒。于給藥1 h后(陽(yáng)性藥組于腹腔注射地西泮30 min后,1 mg·kg-1)腹腔注射戊巴比妥鈉45 mg·kg-1,以翻正反射消失和恢復(fù)為指標(biāo),記錄小鼠睡眠潛伏期及睡眠時(shí)間(翻正反射消失達(dá)1 min以上者確定為陽(yáng)性,即已入睡)[5,11-12]。

1.9 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法 實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)采用SPSS17.0版軟件統(tǒng)計(jì)分析,各組數(shù)據(jù)以均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差(±s)表示,組間均數(shù)比較采用單因素方差分析。

2 結(jié)果

2.1 AF對(duì)辣椒素致痛小鼠的鎮(zhèn)痛作用 結(jié)果顯示,對(duì)辣椒素引起的傷害性刺激,AF各劑量組及嗎啡組均可顯著減少小鼠舔足時(shí)間。說(shuō)明AF對(duì)辣椒素致痛小鼠有一定的鎮(zhèn)痛作用。見(jiàn)表1。

表1 AF對(duì)辣椒素致痛小鼠的鎮(zhèn)痛作用Tab.1 Analgesic activity of AF on capsaicin-induced pain in mice ±s

表1 AF對(duì)辣椒素致痛小鼠的鎮(zhèn)痛作用Tab.1 Analgesic activity of AF on capsaicin-induced pain in mice ±s

與空白對(duì)照組比較,*1P＜0.001Compared with blank control group,*1P＜0.001

組別小鼠/只劑量/(mg·kg-1)舔足時(shí)間/s AF低劑量組107569.9±11.8*1中劑量組1015066.7±5.4*1高劑量組1030045.3±4.7*1嗎啡組1010 2.9±1.2*1空白對(duì)照組100105.8±12.3

2.2 AF對(duì)小鼠熱水甩尾法疼痛模型的鎮(zhèn)痛作用 結(jié)果顯示,與空白對(duì)照組比較,AF中、高劑量組及嗎啡組可延長(zhǎng)傷害性刺激小鼠的甩尾反應(yīng)時(shí)間(P＜0.01)。說(shuō)明AF對(duì)小鼠熱水甩尾法疼痛模型有鎮(zhèn)痛作用。見(jiàn)表2。

表2 AF對(duì)小鼠熱水甩尾法疼痛的影響Tab.2 Analgesic activity of AF on hot water-induced tail-flick in mice ±s

表2 AF對(duì)小鼠熱水甩尾法疼痛的影響Tab.2 Analgesic activity of AF on hot water-induced tail-flick in mice ±s

與空白對(duì)照組比較,*1P＜0.001Compared with blank control group,*1P＜0.001

組別小鼠/只劑量/(mg·kg-1)甩尾潛伏期/s AF低劑量組10753.35±0.18中劑量組101506.19±0.22*1高劑量組103004.32±0.27*1嗎啡組10106.98±0.21*1空白對(duì)照組1003.17±0.30

2.3 AF對(duì)小鼠開(kāi)場(chǎng)實(shí)驗(yàn)的影響 結(jié)果顯示,AF各劑量組小鼠自主活動(dòng)未受影響,5 min內(nèi)直立次數(shù),由底面中心開(kāi)始走動(dòng)的穿越格數(shù),及不動(dòng)的總時(shí)間與空白對(duì)照組比較差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。陽(yáng)性藥地西泮(1 mg·kg-1)組與空白對(duì)照組比較,顯著影響小鼠自主活動(dòng)。說(shuō)明AF對(duì)小鼠自主活動(dòng)無(wú)影響。

2.4 AF對(duì)閾下劑量戊巴比妥鈉協(xié)同睡眠的作用 結(jié)果表明,AF各劑量組對(duì)閾下劑量戊巴比妥鈉協(xié)同睡眠的睡眠潛伏期和睡眠時(shí)間與空白對(duì)照組比較無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義,僅地西泮組睡眠潛伏期明顯短于空白對(duì)照組,且睡眠時(shí)間顯著延長(zhǎng)(P＜0.001)。說(shuō)明AF對(duì)小鼠閾下劑量戊巴比妥鈉協(xié)同睡眠無(wú)影響。見(jiàn)表3。

表3 AF對(duì)小鼠閾下劑量戊巴比妥鈉協(xié)同睡眠的作用Tab.3 Synergism of AF on sleeping time induced by pentobarbital sodium of subthreshold dose ±s

表3 AF對(duì)小鼠閾下劑量戊巴比妥鈉協(xié)同睡眠的作用Tab.3 Synergism of AF on sleeping time induced by pentobarbital sodium of subthreshold dose ±s

與空白對(duì)照組比較,*1P＜0.001Compared with blank control group,*1P＜0.001

組別小鼠/只劑量/(mg·kg-1)睡眠潛伏期睡眠時(shí)間min AF低劑量組10755.48±0.6059.36±7.34中劑量組101505.46±0.5059.97±9.00高劑量組103005.58±0.4655.00±4.39地西泮組1013.44±0.22*1142.17±11.65*1空白對(duì)照組1005.38±0.7553.81±4.94

3 討論

野菊花作為一種傳統(tǒng)的抗炎中藥已被許多古代醫(yī)書(shū)記載?，F(xiàn)代藥理研究表明,野菊花的乙醇提取物可以減少一氧化氮(NO)和前列腺素在炎性組織中的合成[13]。野菊花的抗炎特性已被廣泛研究,但其鎮(zhèn)痛活性可能被忽視了,因此,筆者研究野菊花的乙醇提取物的鎮(zhèn)痛活性,并先后用石油醚、二氯甲烷、正丁醇和水萃取,收集萃取液,分別研究其鎮(zhèn)痛活性。

本研究通過(guò)兩種經(jīng)典的疼痛模型觀察AF的鎮(zhèn)痛作用。其中熱水浴甩尾致痛為中樞鎮(zhèn)痛模型,辣椒素致痛為外周鎮(zhèn)痛模型。中樞鎮(zhèn)痛模型實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明, AF在150,300 mg·kg-1劑量可延長(zhǎng)傷害性刺激小鼠的甩尾反應(yīng)時(shí)間。在外周鎮(zhèn)痛模型實(shí)驗(yàn)中,AF75, 150,300 mg·kg-1組可顯著減少小鼠舔足時(shí)間。提示AF的鎮(zhèn)痛作用可能通過(guò)中樞及外周發(fā)揮鎮(zhèn)痛作用。開(kāi)場(chǎng)實(shí)驗(yàn)和戊巴比妥鈉誘導(dǎo)的睡眠時(shí)間的測(cè)試表明, AF對(duì)小鼠的自主活動(dòng)等行為沒(méi)有顯著影響。

研究表明,從野菊花的乙醇提取物中分離出來(lái)的大量的類黃酮苷和酚苷類有顯著的抗炎特性[14],這些化學(xué)物很容易地分布在野菊花的水相萃取物中。野菊花的水相萃取物能抑制炎性因子的釋放和增強(qiáng)痛閾值,這可能與抗炎和鎮(zhèn)痛作用有關(guān)。因此,該研究表明,鎮(zhèn)痛活性可能與黃酮苷類化合物和酚苷有關(guān)。

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DOI 10.3870/yydb.2014.04.009

Analgesic Effect of Water Extract from Chrysanthemum Indicum on Mice

WU Qiong,MA Hong-da,SUN Xue-hui,HU Bei,JIA Hui,CHEN Yu-feng
(Department of Pharmacy, General Hospital of Shenyang Military Area Command,Shenyang 110840,China)

Objective To study the analgesic effect of the water extract fromChrysanthemum indicumon mice.MethodsAlgogenic model of mice was induced by injection of capsaicine in the paws.Total time of paws-licking in 5 min after injection of capsaicin was observed from the mice.The analgesic effects of the extract were respectively observed by subplantar capsaicin injection and tail-flick test.The open-field test and pentobarbital sodium-induced sleeping time test were observed.ResultsGiven orally,the extract produced significant inhibition on chemical nociception induced by subplantar capsaicin injection and on thermal nociception in the tail-flick test.In the pentobarbital sodium-induced sleeping time test and the open-field test,the extract neither significantly enhanced the pentobarbital sodium-induced sleeping time nor impaired the motor performance.ConclusionChrysanthemum indicumhas analgesic effects that are unlikely related to sedation or motor abnormality.

Chrysanthemum indicum;Pentobarbital sodium;Analgesic effect;Tail-flick test;Open-field test

R282.71;R285.5

A

1004-0781(2014)04-0446-03

2013-03-29

2013-11-20

吳瓊(1984-),女,黑龍江人,藥師,碩士,研究方向:中藥新藥研發(fā)及中藥藥理。電話:024-28851751,E-mail：wuqiongbaby@gmail.com。

陳宇峰(1978-),男,黑龍江人,主管藥師,博士,研究方向:中藥新藥研發(fā)及中藥藥理。電話:024-28851750,E-mail：yufengchen1978@163.com。