藍(lán)保毅，梁振昌，唐龍，祝紅梅

（廣東省中山市石岐蘇華贊醫(yī)院檢驗科，廣東 中山 524800 E－mail：liuzhoulby＠foxmail.com）

電化學(xué)發(fā)光免疫測定（electro－chemiluminescence immunoassay，ECLIA），采用先進的化學(xué)原理和生物醫(yī)學(xué)工程技術(shù)，與酶免疫技術(shù)、放射免疫技術(shù)相比，它具有檢測靈敏度高、檢測線性范圍寬、檢測試劑穩(wěn)定、無污染以及快速的檢測時間等優(yōu)點，并且對患者及檢測的工作人員沒有放射性傷害，目前已被醫(yī)學(xué)檢驗運用于肝炎病毒、激素類、腫瘤標(biāo)志物、藥物濃度監(jiān)測及冠狀動脈疾病等方面的檢測，是免疫分析重要的發(fā)展方向和趨勢［1－2］。

但其檢測成本相對昂貴，一個試劑盒的價格從上千元至上萬元不等，被稱為“金水”。因此降低檢測成本成為用戶最關(guān)心的問題［3］。試驗過程觀察發(fā)現(xiàn)，試劑本身經(jīng)發(fā)光儀的編碼掃描后進行樣本檢測，100（或200）人份的試劑做完后，儀器會自動報警用完試劑（提示要更新試劑才能繼續(xù)下一步的檢測），但試劑實際剩余的量還足以進行多個（7～15）人次的測試。本研究旨在通過“反掃描法”充分利用剩余試劑再進行檢測，并對其可行性進行評價，以達到既降低測試成本，又保證檢測結(jié)果的準(zhǔn)確性。

1 材料與方法

1.1 儀器和試劑 ①羅氏Cobas e411電化學(xué)發(fā)光免疫分析儀。②新試劑為羅氏Cobas e411電化學(xué)發(fā)光免疫分析儀配套試劑；③用“反掃描法”利用的剩余試劑。③定標(biāo)液和質(zhì)控物由羅氏原裝配套提供。定標(biāo)液和質(zhì)控血清：分低、中、高三個不同濃度。

1.2 標(biāo)本收集 中山市石岐蘇華贊醫(yī)院檢驗科收集檢測血清，分低、中、高三個濃度的標(biāo)本，于干凈容器內(nèi)混勻，少量分裝置低溫保存?zhèn)溆谩＞芏葴y試用臨床常規(guī)檢測后病人的新鮮混合血清。

1.3 方法

1.3.1 剩余試劑的“反掃描” 已報警“用完試劑”的試劑盒（最好在盒上標(biāo)注“反”字），反向置于儀器的試劑盤上（即黑瓶的條碼朝向掃描窗一側(cè)），進行“試劑掃描”，掃描后，儀器顯示試劑的量跟原裝新試劑的量是一樣的，因此可進行常規(guī)檢測操作。

1.3.2 實驗項目 AFP、CEA、CA19－9、T3、T4、FT3、FT4、TSH。應(yīng)注意的是檢測均在各項目的同批號試劑內(nèi)，并在有效期內(nèi)進行。

1.3.3 精密度測定

1.3.3.1 批內(nèi)精密度 精密度測定樣本10份，置室溫30min后，取5份樣本與常規(guī)標(biāo)本一起，用原裝試劑檢測AFP、CEA、CA19－9、T3、T4、FT3、FT4、TSH。隨后另取5份標(biāo)本用反掃描的剩余試劑檢測同樣的項目。記錄所得數(shù)據(jù)，并計算兩組試劑檢測項目的（±s）和變異系數(shù)（CV）。

1.3.3.2 批間精密度 每天用原裝試劑對 AFP、CEA、CA19－9、T3、T4、FT3、FT4、TSH 進行一次精密度測試，再用反掃描法的剩余試劑檢測相同的項目進行一次精密度檢測。共10次后，收集所得數(shù)據(jù)，計算兩組試劑檢測的（±s）和CV。

1.3.4 質(zhì)控血清測定 分別用原裝試劑和反掃描的剩余試劑做質(zhì)控分析，檢測低、中、高三個水平質(zhì)控品的 AFP、CEA、CA19－9、T3、T4、FT3、FT4、TSH結(jié)果對比，見表3。

1.3.5 回收試驗 取廣東省臨床檢驗中心提供的室間質(zhì)評樣本7份（各100μl）作為基礎(chǔ)樣本，分別加入等量的AFP、CEA、CA19－9、T3、T4、FT3、FT4、TSH 定值值標(biāo)準(zhǔn)品作為分析樣本，先用“反掃描”的剩余試劑檢測基礎(chǔ)樣本中AFP、CEA、CA19－9、T3、T4、FT3、FT4、TSH 各項目的值，再檢測分析樣本各3次，各取平均值，再算其回收率。

1.4 統(tǒng)計學(xué)分析 統(tǒng)計學(xué)處理運用SPSS數(shù)據(jù)統(tǒng)計分析軟件進行，計量資料用（±s）表示，組間比較用t檢驗，計數(shù)資料采用χ2檢驗，以P＜0.05為差異有統(tǒng)計學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 兩組試劑的精密度試驗 具體數(shù)據(jù)見表1和表2。兩組試劑檢測AFP等項目的批內(nèi)精密度比較發(fā)現(xiàn)P＞0.05。批間精密度比較，P＞0.05。

表1 兩組試劑檢測各項目的批內(nèi)精密度

2.2 兩組試劑的質(zhì)控血清檢測結(jié)果 分別用原裝試劑和“反掃描法”的剩余試劑做質(zhì)控分析，低、中、高三水平的質(zhì)控樣品測定值均在規(guī)定的參考范圍內(nèi)，兩組試劑各項目檢測結(jié)果，見表3。

2.3 “反掃描法”利用剩余試劑做回收試驗 回收試驗的結(jié)果，見表4。

3 討論

研究相關(guān)電化學(xué)發(fā)光免疫分析儀的工作原理及其運行的規(guī)律，發(fā)現(xiàn)：羅氏公司生產(chǎn)的全自動電化學(xué)發(fā)光免疫分析儀有E170、Elecsys1010、Elecsys 2010以及改良的Cobas e411、E401、E601等，其生產(chǎn)的配套試劑均通用于這一系列的儀器上。根據(jù)這個工作原理，本研究經(jīng)過多次實驗，創(chuàng)造出“反掃描法”，即三聯(lián)試劑瓶的掃描側(cè)反方向轉(zhuǎn)至內(nèi)側(cè)，即R2瓶側(cè)的條碼轉(zhuǎn)至外側(cè)，運行試劑掃描，掃描完畢后，把試劑瓶轉(zhuǎn)至原正常位置，即可進行樣本測試。

表2 兩組試劑檢測各項目的批間精密度

表3 兩組試劑檢測低、中、高水平質(zhì)控血清的結(jié)果比較 （±s）

表3 兩組試劑檢測低、中、高水平質(zhì)控血清的結(jié)果比較 （±s）

原裝試劑項目“反掃描法”的剩余試劑低值 中值 高值 低值 中值 高值A(chǔ)FP（μg／L） 24.0±7.4 103.7±33.3 236.4±55 23.6±6.4 104.1±40.3 239.1±61 CEA（μg／L） 2.2±0.7 14.2±5.4 45.9±14.9 1.8±0.8 10.2±7.0 45.2±15.4 CA19－9（U／ml） 43.3±13.4 122.0±34.6 341±70.2 40.7±16.0 127.0±38.2 350±71.1 T3（nmol／L） 1.5±0.4 5.7±2.0 11.1±2.5 1.3±0.5 5.3±2.8 10.7±2.7 T4（nmol／L） 71.8±22.2 162.3±39.6 300±65 70.7±25.2 165.5±34.6 305±67 FT3（pmol／L） 3.8±1.4 8.4±4.2 20.6±6.8 4.2±1.7 8.1±4.6 23.0±7.8 FT4（pmol／L） 10.5±3.5 36.0±10.3 60.1±20.1 10.5±3.5 36.9±11.1 60.5±15.1 TSH（mIU／L） 0.77±0.18 5.6±1.8 30.1±9.7 0.90±0.13 6.0±2.4 28.4±10.9

表4 “反掃描法”回收實驗結(jié)果

通過批CV分析，本文在兩組試劑各項目的批內(nèi)和批間精密度CV均小于10%，且兩組試劑檢測結(jié)果差異無統(tǒng)計學(xué)意義（P＞0.05），實驗結(jié)果顯示，“反掃描法”利用剩余試劑具有很好的重復(fù)性和精密度［4］。兩組試劑做質(zhì)控血清分析，低、中、高三個水平的質(zhì)控樣品測定結(jié)果差異無統(tǒng)計學(xué)意義（P＞0.05），各項目測定值均在范圍內(nèi)，說明“反掃描法”利用的剩余試劑在低、中、高水平的樣品檢測均和原裝試劑差異無統(tǒng)計學(xué)意義，各項目的回收率均能控制在90%～110%之間，實測值與理論值呈高度相關(guān)。因此，“反掃描法”利用剩余試劑的實驗結(jié)果顯示其重復(fù)性、精密度、回收率和線性范圍均能達到臨床應(yīng)用的要求。

有部分文獻報道FT3、FT4結(jié)果差異有統(tǒng)計學(xué)意義，試劑不可回收利用［5］。而本文的實驗中，卻不存在類似現(xiàn)象，經(jīng)分析推測，可能的原因是：剩余試劑回收的方法不同，本文采用的是“反掃描法”，試劑保持與原裝高度的一致性，而文獻報道［5］中采用的是不同試劑盒中剩余試劑的混合液，其中的微粒子可能因不能充分搖勻?qū)е略囼灲Y(jié)果的較大差異。

經(jīng)多次實驗的觀察，本人認(rèn)為，在運用“反掃描法”利用的剩余試劑操作中，為避免因失誤而導(dǎo)致檢測結(jié)果出錯，需注意以下幾點：①剩余試劑需保證在有效期內(nèi)使用；②反掃描后的試劑盒要作好明確標(biāo)注，以區(qū)別于新的原裝試劑盒；③反掃描后切記把試劑盒反轉(zhuǎn)至正常位置后才能進行常規(guī)檢測。

綜上所述，羅氏Cobas e411分析儀“反掃描法”充分利用剩余試劑不僅極大地削減醫(yī)學(xué)資源的費用，節(jié)約檢測成本，而且操作簡便，保持與原裝試劑有高度一致性，檢測結(jié)果穩(wěn)定準(zhǔn)確，值得在臨床醫(yī)學(xué)檢驗領(lǐng)域推廣應(yīng)用。

［1］ 譚浩.電化學(xué)發(fā)光免疫分析系統(tǒng)E170的應(yīng)用評價［J］.實用預(yù)防醫(yī)學(xué)，2011，18（3）：527－528.

［2］ 馬紅霞，曹偉娟，張雪梅，等.羅氏E170全自動電化學(xué)發(fā)光免疫分析儀剩余試劑再利用結(jié)果分析［J］.檢驗醫(yī)學(xué)，2012，27（3）：206－209.

［3］ 張葵.定量檢測系統(tǒng)方法學(xué)性能驗證實驗的基本方法［J］.檢驗雜志，2009，27（5）：321－323.

［4］ 徐立根.ELISA、MAIA、CLIA和TRFIA試劑盒質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)探討［J］.放射免疫學(xué)雜志，2006，19（3）：230－233.

［5］ 樊錦秀，李伯利，沈樹標(biāo)，等.ACCESS全自動微粒子化學(xué)發(fā)光儀回收試劑的利用與評價［J］.實用醫(yī)學(xué)雜志，2001，17（11）：1113－1114.