宋寅偉 陳冬 玲張虹

作者簡介：宋寅偉，男，醫(yī)學博士，主要從事眼科學研究；陳冬玲，女，醫(yī)學博士，主要從事麻醉與循環(huán)研究；通訊作者：張虹，女，教授，博士生導師，主要從事眼科學研究【摘要】 目的 研究原發(fā)性翼狀胬肉組織中SPARC蛋白的表達的臨床意義。方法 收集15例原發(fā)性翼狀胬肉組織標本及5例對照組結膜組織標本，免疫組織化學法檢測胬肉及正常結膜組織內SPARC蛋白的表達及空間分布，并探討SPARC蛋白與微血管密度的相關性。結果 SPARC在原發(fā)性翼狀胬肉組織中的66.67%，平均計分為2.47±1.30，與結膜組織無顯著性差異（U=25.00，P=0.261）。SPARC分布于結膜組織上皮基底層細胞和成纖維細胞，少量內皮細胞也存在染色。SPARC與微血管密度存在負相關性（rSPARC=-0.551，P=0.0333）。結論 SPARC的低表達可能參與了原發(fā)性翼狀胬肉中的血管生成。

【關鍵詞】原發(fā)性翼狀胬肉組織；SPARC含量；意義

【中圖分類號】R777 【文獻標識碼】B【文章編號】1004-4949(2014)06-0049-01

原發(fā)性翼狀胬肉是位于眼表的纖維血管增生性疾病，其病因尚不十分清楚，目前認為與紫外線照射有密切關系。目前研究發(fā)現(xiàn)翼狀胬肉患者角膜中央上皮細胞減少而杯狀細胞和樹突狀細胞增多，其與翼狀胬肉的臨床分級密切相關，而這一過程受到免疫機制及脈管系統(tǒng)的參與和調控［1］。SPARC(secreted protein acidic and rich in cysteine)即富含半胱氨酸的酸性分泌蛋白，也稱骨連接蛋白，是一種多功能的小分子細胞基質-細胞酸性糖蛋白，它通過影響細胞黏附、細胞骨架的形成以及與細胞外基質蛋白的相互作用從而發(fā)揮多種生物活性作用。在一些組織修復的過程中，SPARC通常表現(xiàn)為生理性調控和抑制，而在腫瘤組織則更多表現(xiàn)為一種促進作用［2］。本研究擬通過免疫組織化學法檢測原發(fā)性翼狀胬肉組織和結膜組織中SPARC的表達與分布，以及其與微血管密度的相關性來探討SPARC在翼狀胬肉形成和發(fā)展中的可能作用，從而為翼狀胬肉的防治提供一些實驗依據。

1材料與方法

病例組標本15例，均為原發(fā)性翼狀胬肉術中切除胬肉組織，男性6例，女性9例，平均年齡56.27±6.63。病程最短為2年，最長達35年。球結膜組5例（5例均為結膜松弛癥手術術中切除的多余球結膜組織），平均年齡55.40±6.43。（均已于術前告知患者并獲得患者知情同意）。

采用免疫組織化學染色進行觀察微血管密度和SPARC表達情況。微血管密度的判斷：400倍視野下計數(shù)3個不重復視野中的陽性血管數(shù)，取其中位數(shù)作為每例的MVD計分。SPARC免疫組化結果的判斷：綜合染色強度和陽性細胞數(shù)進行分級，隨機選取3個高配鏡視野細胞計數(shù)選取中位數(shù)作為SPARC計分。

統(tǒng)計學方法均采用SPSS19.0統(tǒng)計軟件進行分析，以P<0.05為有統(tǒng)計學差異。

2結果

2.1 SPARC在翼狀胬肉組織及結膜組織中的表達差異細胞質和細胞核內黃染和棕黃染均計為SPARC表達陽性：實驗組陽性率為66.67%，平均評分為2.47±1.30，以成纖維細胞為主，少量上皮細胞和內皮細胞也可見著色。對照陽性率為60%，平均評分為4.60±3.51，以上皮基底層細胞和成纖維細胞為主，血管壁和管周也有表達。兩組SPARC的計分差別不具備統(tǒng)計學差異（采用兩獨立樣本的Mann-Whitney檢驗，U=25.00，P=0.261）。

表-1 SPARC在翼狀胬肉和對照組球結膜中的的表達情況

例數(shù) - + 陽性率（%）實驗組 15 5 10 66.67對照組 5 2 3 60.002.2 SPARC與微血管密度相關性分析經Pearson相關性分析發(fā)現(xiàn)實驗組中SPARC均與其微血管密度具有一定的相關性。其中rSPARC=-0.551，P=0.0333 (采用Pearson相關性檢驗)

表-2 實驗組各標本SPARC染色計分及微血管密度情況

N 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12 13 14 15 平均SPARC 3 5 2 3 1 4 1 1 1 3 4 1 3 2 3 2.47±1.30MVD 14 9 10 11 16 11 13 14 12 13 11 13 14 17 10 12.53±2.263討論

目前翼狀胬肉發(fā)病機制仍不十分清楚，以往的研究表明其發(fā)病機制可能與某些細胞因子的異常表達、正常細胞凋亡程序的破壞以及免疫因素的誘導等有關。然而研究發(fā)現(xiàn)新生血管形成參與翼狀胬肉的發(fā)生與發(fā)展過程［3］。正常情況下，由于生長抑制因子的作用，阻止了角膜緣血管長入透明角膜。一旦抑制因子被降解或者破壞，新生血管即可在刺激因子的作用下長入角膜，并向高濃度刺激因子部位生長。此后不斷有學者為這一理論提供依據，并進行了補充。多種因素，光照、缺氧、炎癥浸潤等都能誘發(fā)并加速新生血管的形成，也為其治療提供了很好的思路。

本實驗的結果提示SPARC蛋白則主要在成纖維細胞和上皮細胞內表達，并且血管壁周圍的一些細胞中陽性表達，包括部分內皮細胞，但染色強度和細胞陽性表達率較對照組球結膜組織低，雖然不具有統(tǒng)計學差異，但是介于樣本量的差別較大，仍推測SPARC可能一定程度上抑制了新生血管的長入。雖然不少活體或者體外實驗表明，新生血管生成（特別是在腫瘤組織中）時內皮細胞中SPARC的表達增加。可是也有很多實驗證實SPARC不僅能改變內皮細胞的形狀和抑制細胞周期，還能降低一些成血管因子如堿性成纖維因子、血小板衍生生長因子和血管內皮生長因子等的活性［4］，甚至通過影響這些生長因子與受體間的相互作用而影響血管的生成。這可能是不同分化階段、不同類型的細胞對于SPARC的反應不同，也可能是由于其時間性和空間性分布的差別導致。

參考文獻

［1］ 宋寅偉，蔡小軍.翼狀胬肉新生血管形成機制及其治療的研究進展.中華實驗眼科雜志，2012,30(2):172-175

［2］ 馮丹，蔡建，張穎一等. SPARC 結構與功能研究進展.現(xiàn)代生物醫(yī)學進展，2012,12(3):560-562

［3］ C Hill JC, Maske R.Pathogenesis of pterygium ［J］. Eye, 1989,3:218-226

［4］ 李瑩，李維業(yè)，龐國祥等.SPARC基因在角膜堿燒傷中的表達，2002,22(01):12-14