趙衛(wèi)華 羅立勇 解士海 黃小雄

【摘要】目的 研究尖銳濕疣復(fù)發(fā)與其皮損中Livin表達(dá)的關(guān)系，探討CA的復(fù)發(fā)機(jī)制。方法 根據(jù)CA患者治療后的轉(zhuǎn)歸，將CA患者分為復(fù)發(fā)組和未復(fù)發(fā)組。采用免疫組化SP法檢測(cè)Livin蛋白在22例復(fù)發(fā)組CA患者的復(fù)發(fā)疣體組織中的表達(dá)，并與24例未復(fù)發(fā)組CA患者和復(fù)發(fā)組CA患者的初發(fā)皮損組織中Livin蛋白的表達(dá)進(jìn)行比較。結(jié)果 復(fù)發(fā)組CA患者的復(fù)發(fā)疣體組織中Livin蛋白陽(yáng)性表達(dá)率為95.45％(21,22)，未復(fù)發(fā)組CA患者和復(fù)發(fā)組CA患者的初發(fā)皮損組織中Livin蛋白陽(yáng)性表達(dá)率分別為70.83％(17,24) 、72.73％(16,22)，前者與后兩組的陽(yáng)性表達(dá)率差異分別具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)；復(fù)發(fā)組CA患者的復(fù)發(fā)疣體組織中Livin蛋白陽(yáng)性表達(dá)強(qiáng)度多為（++）～（+++），未復(fù)發(fā)組CA患者和復(fù)發(fā)組CA患者的初發(fā)皮損組織中Livin蛋白陽(yáng)性表達(dá)強(qiáng)度分別多為（+）～（++），前者與后兩組的陽(yáng)性表達(dá)強(qiáng)度差異分別具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)，未復(fù)發(fā)組CA患者和復(fù)發(fā)組CA患者的初發(fā)皮損組織中Livin蛋白陽(yáng)性表達(dá)率分別為70.83％(17,24)、72.73％(16,22)，陽(yáng)性表達(dá)強(qiáng)度分別均多為（+）～（++），差異均無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。結(jié)論CA復(fù)發(fā)患者皮損組織中存在Livin過(guò)表達(dá)，提示CA的復(fù)發(fā)可能與其皮損組織中存在Livin過(guò)表達(dá)有一定關(guān)系。

【關(guān)鍵詞】尖銳濕疣; Livin; 復(fù)發(fā); 免疫組化

【Abstract】 Objective To explore The relationship between the recurrence of condyloma acuminatum and the expression of Livin protein in CA local lesions and study the mechanism of the recurrence of condyloma acuminatum.Methods The expression oflivin protein in the recurrent lesions of 22 recurrent CA patients wasanalyzed by immunocytochemical stainwithstreptavidin and compared to that in the primary lesions of non- recurrent and recurrent CA groups. Results The detection rates of Livin in recurrent lesions of 22 recurrent CA patients was 95.45％(21,22) , The detection rates of Livin in the primary lesions of non- recurrent and recurrent CA groups were respectively 70.83％(17,24) 、72.73％(16,22), which were statistically different respectively; The expressions of Livin were strongly positive (+++) in the recurrent lesions of 22 recurrent CA patients .The expressions of Livin varied from positive (++) to strongly positive (+++) in the primary lesions of non- recurrent and recurrent CA groups. which were statistically different respectively(P<0.05);The detection rates of Livin in the primary lesions of non- recurrent and recurrent CA groups wererespectively 70.83％(17,24) ,72.73％(16,22),The expressions of Livin varied from positive (++) to strongly positive (+++) in the primary lesions of non- recurrent and recurrent CA groups,which were not statistically different respectively (P<0.05).Conclusion Recurrent CA patients showed overexpression of Livin in local lesions , overexpression of Livin in local lesions might play an role in the recurrence of condyloma acuminatum

【key words 】condyloma acuminatum； Livin；recurrence ；immunohistochemistry

【中圖分類號(hào)】R752.5 【文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼】B【文章編號(hào)】1004-4949(2014)06-0107-01

1 對(duì)象與方法

1.1 對(duì)象 收集我院皮膚性病科門診46例CA患者的外陰皮損組織標(biāo)本，其中男18例，女28例；年齡18-67歲，平均36.8歲；病程15-90天，平均26.9天；均經(jīng)組織病理學(xué)確診。取材前半年內(nèi)均未接受免疫性藥物、激光、冷凍等治療，且無(wú)其他系統(tǒng)疾病。CO2激光術(shù)后每周復(fù)診一次，四周后每月復(fù)診一次，共隨訪六個(gè)月，治愈標(biāo)準(zhǔn)為皮疹消退，恢復(fù)正常外形，無(wú)新發(fā)皮疹，隨訪六個(gè)月無(wú)復(fù)發(fā)。復(fù)發(fā)判斷標(biāo)準(zhǔn)為CO2激光術(shù)去除疣體后六個(gè)月內(nèi)，無(wú)再感染病史，在治療部位或其它部位出現(xiàn)新的皮疹，判斷為CA復(fù)發(fā)。根據(jù)目前對(duì)CA的診斷標(biāo)準(zhǔn)和復(fù)發(fā)判斷選擇本研究的對(duì)象，分為CA復(fù)發(fā)組（22例）和CA非復(fù)發(fā)組（24例）。非復(fù)發(fā)組男性10例，女性14例；年齡18-57歲，平均35.8歲；復(fù)發(fā)組男性8例，女14例；年齡18-56歲，平均34.6歲；末次復(fù)發(fā)的病程為4周至5個(gè)月，平均2.6個(gè)月。個(gè)組間年齡，性別和病程經(jīng)t檢驗(yàn)均P>0．05， 差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。所有標(biāo)本經(jīng)4%多聚甲醛固定，石蠟包埋，連續(xù)作4um厚度切片后覆于用多聚賴氨酸處理過(guò)的玻片上，60℃烤箱烤片4h以上，備用。

1.2 方法 免疫組化SP法檢測(cè)Livin蛋白的表達(dá)。兔抗Livin多克隆抗體(濃縮型)，通用型SP檢測(cè)試劑盒均購(gòu)于北京博奧森生物有限公司，DAB酶底物顯色劑購(gòu)自北京中杉生物有限公司。操作步驟均按試劑盒說(shuō)明進(jìn)行，抗體工作液Livin為1：80。所有切片染色均采用相同條件，每批染色均設(shè)陽(yáng)性對(duì)照、陰性對(duì)照。陽(yáng)性對(duì)照用已知染色陽(yáng)性的組織切片，陰性對(duì)照以PBS代替一抗孵育組織切片。

1.3 結(jié)果判定 Livin陽(yáng)性顯色為棕黃色顆粒，主要為胞質(zhì)著色，少量胞核著色，評(píng)分標(biāo)準(zhǔn)參照文獻(xiàn)［1］，根據(jù)組織切片中陽(yáng)性細(xì)胞百分比和著色強(qiáng)度進(jìn)行半定量分級(jí)評(píng)分。陽(yáng)性細(xì)胞百分比≤10％為0分，11％～25％為1分，26％～50％為2分，51％～75％為3分，≥76％為4分。著色強(qiáng)度：0分為不著色；1分為淺黃色；2分為黃色；3分為棕黃色。取上述兩項(xiàng)分值的乘積作為總積分：0分為陰性(－)，1～4分為弱陽(yáng)性(+)，6～8分為陽(yáng)性(++)，9～12分為強(qiáng)陽(yáng)性(+++)。

1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理 采用SPSS 13.0統(tǒng)計(jì)軟件包對(duì)所得數(shù)據(jù)進(jìn)行處理，采用χ2檢驗(yàn)，P<0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1復(fù)發(fā)組復(fù)發(fā)皮損和復(fù)發(fā)組初發(fā)皮損組織中Livin蛋白表達(dá) 陽(yáng)性反應(yīng)大多定位于胞膜和胞膜附近的胞漿，多呈黃色，棕黃色至棕褐色著色。陽(yáng)性細(xì)胞多呈魚網(wǎng)狀分布于棘層的中、上部和顆粒層。復(fù)發(fā)組復(fù)發(fā)皮損和復(fù)發(fā)組初發(fā)皮損的陽(yáng)性表達(dá)率分別為95.45％(21,22)、72.73％(16,22) ，兩組陽(yáng)性表達(dá)率差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(χ2=4.247，P<0.05)，且兩組表達(dá)強(qiáng)度差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(χ2=24.555，P<0.05)。見表1，圖1

圖1復(fù)發(fā)組復(fù)發(fā)皮損組織中Livin的表達(dá)，SP法 200 X

表1 Livin在CA復(fù)發(fā)組和未復(fù)發(fā)組組織中的表達(dá) (例數(shù))

組別 例數(shù) 表達(dá)強(qiáng)度 X2 P值- + ++ +++ 復(fù)發(fā)組 復(fù)發(fā)皮損

初發(fā)皮損 22

22 1 2 4 15

6 13 2 1 24.555

1.4450

0.695未復(fù)發(fā)組 24 7 11 5 1 *復(fù)發(fā)組皮損與未復(fù)發(fā)組的X2值為 23.048

2.2復(fù)發(fā)組復(fù)發(fā)皮損和未復(fù)發(fā)組初發(fā)皮損組織中Livin蛋白表達(dá)陽(yáng)性反應(yīng)定位于胞漿，陽(yáng)性著色多呈黃色，棕黃色，少數(shù)呈棕褐色，陽(yáng)性細(xì)胞多呈灶狀或片狀分布于棘層中上部和顆粒層，復(fù)發(fā)組復(fù)發(fā)皮損和未復(fù)發(fā)組初發(fā)皮損組織中Livin蛋白表達(dá)陽(yáng)性表達(dá)率分別為95.45％(21,22)、70.83％(17,24) ，兩組陽(yáng)性表達(dá)率差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(χ2=4.843,P<0.05)，且兩組表達(dá)強(qiáng)度差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(χ2=23.048,P<0.05)。見表1，圖2

圖2未復(fù)發(fā)組皮損組織中Livin的表達(dá)，SP法 200 X

2.3復(fù)發(fā)組初發(fā)皮損和未復(fù)發(fā)組皮損組織中Livin蛋白表達(dá)陽(yáng)性反應(yīng)定位于胞漿，陽(yáng)性著色多呈黃色，棕黃色，少數(shù)呈棕褐色，陽(yáng)性細(xì)胞多呈灶狀或片狀分布于棘層中上部和顆粒層，復(fù)發(fā)組初發(fā)皮損和未復(fù)發(fā)組初發(fā)皮損組織中Livin蛋白表達(dá)陽(yáng)性表達(dá)率分別為72.73％(16,22) 、70.83％(17,24)，兩組陽(yáng)性表達(dá)率差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(χ2=0.200,P>0.05)，且兩組表達(dá)強(qiáng)度差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(χ2=1.445，P>0.05)。見表1。

3討論

尖銳濕疣(CA)是臨床上常見的性傳播疾病(STD)，病原體是人乳頭瘤病毒(HPV)，屬DNA病毒，傳染性很強(qiáng)，發(fā)病率較高，易復(fù)發(fā)，是性傳播疾病中最容易傳播的一種。Livin是近年新發(fā)現(xiàn)的凋亡抑制基因。特異性表達(dá)于人的胚胎組織以及多數(shù)人類實(shí)體瘤組織，這種異常的表達(dá)與腫瘤的發(fā)生、發(fā)展、轉(zhuǎn)移甚至預(yù)后相關(guān)［2,3］。為探討Livin與CA發(fā)生、發(fā)展和復(fù)發(fā)的關(guān)系，我們用免疫組化SP法對(duì)CA組織Livin的表達(dá)進(jìn)行了研究。

Livin是近年來(lái)發(fā)現(xiàn)的一種新的凋亡抑制蛋白(inhibitor of apoptosis protein,

IAP)家族成員［4］，該蛋白是從人類基因組cDNA文庫(kù)中克隆得到，因其從人的胎腎cDNA文庫(kù)中發(fā)現(xiàn)，又被命名為KIAP（kidney inhibitor of apoptosis protein）［5］，特異的高表達(dá)于某些實(shí)體腫瘤組織和腫瘤細(xì)胞系，能抑制許多凋亡刺激劑誘發(fā)的細(xì)胞凋亡，提示該基因可能在腫瘤的發(fā)生和發(fā)展中起著重要作用［6］ 。近期研究表明，Livin在一些腫瘤組織中異常表達(dá)，與腫瘤的預(yù)后和復(fù)發(fā)有關(guān)。我們應(yīng)用免疫組化檢測(cè)CA組織中凋亡抑制蛋白Livin的表達(dá)，結(jié)果發(fā)現(xiàn)Livin蛋白在CA組織中高表達(dá)，Livin在CA組織中的表達(dá)增高，其可能直接通過(guò)抑制Caspase的細(xì)胞凋亡途徑，抑制細(xì)胞凋亡，導(dǎo)致細(xì)胞數(shù)目不斷增加，從而使疣體過(guò)度增生，參與CA的發(fā)生、發(fā)展。同時(shí)還發(fā)現(xiàn)，復(fù)發(fā)組復(fù)發(fā)皮損Livin蛋白陽(yáng)性表達(dá)率及陽(yáng)性表達(dá)強(qiáng)度均高于未復(fù)發(fā)組和復(fù)發(fā)組初發(fā)皮損，提示Livin在CA的復(fù)發(fā)機(jī)制中可能起著一定作用，這具有一定價(jià)值，有可能成為CA治療的一個(gè)嶄新的潛在的靶點(diǎn)，為降低CA的復(fù)發(fā)率提供一條新的途徑。

總之，Livin在CA組織中的表達(dá)尤其在復(fù)發(fā)組織中的高表達(dá)，提示該基因可能在CA的發(fā)生，發(fā)展和復(fù)發(fā)中起到重要作用。

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