瞿勝　程麗娟

【摘要】目的：對(duì)抑郁癥首次發(fā)病的患者的內(nèi)皮祖細(xì)胞數(shù)量和功能變化進(jìn)行初步研究。方法：根據(jù)國(guó)際疾病分類(lèi)第十次修訂本首發(fā)重性抑郁癥的診斷標(biāo)準(zhǔn)判斷中年抑郁癥患者20例是否合格，結(jié)果表明，24項(xiàng)HAMD抑郁量表評(píng)分>35分，定為觀(guān)察組。選擇正常志愿者20例，判斷24項(xiàng)HAMD抑郁量表，評(píng)分<8分，要求志愿者的性別、年齡、受教育程度均與觀(guān)察組相當(dāng)，設(shè)為對(duì)照組。分離外周血內(nèi)皮祖細(xì)胞并進(jìn)行體外培養(yǎng)，對(duì)于EPC生長(zhǎng)情況進(jìn)行觀(guān)察和記錄，通過(guò)分析多項(xiàng)指標(biāo)分析EPC各項(xiàng)，判斷具有分化為內(nèi)皮細(xì)胞的特性，進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)分析。結(jié)果：觀(guān)察組外周血EPC細(xì)胞數(shù)量和細(xì)胞增殖率低于對(duì)照組，觀(guān)察組血清白細(xì)胞介素水平超過(guò)對(duì)照組，超敏反應(yīng)蛋白水平高于對(duì)照組，兩個(gè)數(shù)據(jù)差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（均P<0.05）；（2）Spearman相關(guān)分析顯示，患者組IL-6和TNF—d水平與循環(huán)EPCs的數(shù)量和增殖率呈負(fù)相關(guān)（均P<0.05）；（3）多元線(xiàn)性逐步回歸分析顯示，HAMD總分和IL-6水平是循環(huán)EPC數(shù)量的獨(dú)立影響因素（均P<0.05）。結(jié)論：抑郁癥首次發(fā)病患者EPC數(shù)量減少，從而證明內(nèi)皮祖細(xì)胞數(shù)量減少、功能減退。

【關(guān)鍵詞】抑郁癥、內(nèi)皮祖細(xì)胞數(shù)量及功能

【key words 】changes in the number and function of endothelial progenitor cells in patients with first onset of depression were studied. Methods： The revised according to the International Classification of Diseases， Tenth diagnostic criteria for major depression of the first judgment of 20 patients aged depression is qualified， the results showed that 24 HAMD depression scale score> 35 points， as the observation group. Choose healthy volunteers， 20 cases judged 24 HAMD depression scale， score <8 points， requiring volunteers gender， age， educational level and the observation group were quite， as the control group. Peripheral blood progenitor cells isolated and cultured in vitro for EPC growth were observed and recorded， analyzed a number of indicators by analyzing the EPC to determine the characteristics differentiate into endothelial cells， were statistically analyzed. Results： The number of peripheral blood EPC cells and cell proliferation rate than the control group， serum interleukin observation group than in the control group levels， hypersensitivity higher protein levels， two data differences were statistically significant （both P <0.05）； （2） Spearman correlation analysis showed that patients IL-6 and TNF-d levels and the number of circulating EPCs and the proliferation rate was negatively correlated （all P <0.05）； （3） Multiple linear Stepwise regression analysis showed that， HAMD total score and IL-6 levels were independent predictors of the number of circulating EPC （all P <0.05）. Conclusion： The number of EPC first onset of depression in patients with reduced， thereby reducing the number of permits Mingneipizu cell dysfunction.

【key words 】depression， the number and function of endothelial progenitor cells

【中圖分類(lèi)號(hào)】R714.6 【文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼】B【文章編號(hào)】1004-4949（2014）04-0051-01

隨著社會(huì)不斷發(fā)展，人們生活壓力與日劇增，越來(lái)越多的人患各種心理精神疾病，抑郁癥是較為嚴(yán)重的一種心理疾病，抑郁患者通常表現(xiàn)為遇事消極怠慢，思考問(wèn)題不樂(lè)觀(guān)，生活態(tài)度消極低沉。有資料顯示，抑郁癥自殺死亡者占所有自殺的1/3-1/2。病人通常表現(xiàn)為心境低落、悲傷、無(wú)希望、興趣和愉快感喪失。患者在治療方面會(huì)有巨大的難度，而且會(huì)給家庭和家人帶來(lái)巨大的壓力。自20世紀(jì)中期以后，，其發(fā)病率逐年升高，已成為一個(gè)主要的全球性精神問(wèn)題。經(jīng)過(guò)多年的深入研究，學(xué)者發(fā)現(xiàn)抑郁癥的發(fā)病因素不僅與心理問(wèn)題有關(guān)，其血管內(nèi)皮損傷與免疫炎癥激活存在著某種相關(guān)性，可促進(jìn)心血管病的發(fā)生與發(fā)展。EPC可以在血管修復(fù)的過(guò)程中起到非常積極的作用，通過(guò)整合到血管中幫助血管再生。EPC是內(nèi)皮細(xì)胞的前體細(xì)胞，，機(jī)體EPC的表達(dá)和生長(zhǎng)機(jī)理在病理、生理、病生多種角度都有深入的研究。本文旨在研究抑郁癥首次發(fā)病患者外周血EPC數(shù)量和功能的關(guān)系?，F(xiàn)將研究結(jié)果作如下匯報(bào)。

1資料與方法

1.1一般資料 選取2011年2月-2013年2月到我院就診的抑郁癥患者20例作為觀(guān)察組，年齡45-58歲，平均年齡49.5歲。性別為女，按照國(guó)際疾病分類(lèi)第十次修訂本（ICD-10）重性抑郁癥的診斷標(biāo)準(zhǔn)，判斷24項(xiàng)HAMD抑郁量表評(píng)分>35分，均為首次發(fā)作。志愿者應(yīng)保證身體健康，精神狀態(tài)良好，無(wú)任何頭部外傷史、神經(jīng)系統(tǒng)疾病和其他精神障礙性疾病或藥物、酒精依賴(lài)者；患者與志愿者都不能有肢體缺陷，無(wú)任何磁共振掃描禁忌癥；保證志愿者不能參加其他臨床藥物研究；保證志愿者性別與患者一致，不能處于哺乳期。選取同期與患者居住環(huán)境相同或相似的患者，要求：年齡范圍一致，精神狀態(tài)良好，無(wú)其他心理疾病，無(wú)酗酒吸毒現(xiàn)象，經(jīng)過(guò)標(biāo)準(zhǔn)判斷24項(xiàng)HAMD抑郁量表評(píng)分<8分，符合對(duì)照要求。

在開(kāi)始研究之前，與志愿者及其家屬說(shuō)明實(shí)驗(yàn)方式及過(guò)程中存在的風(fēng)險(xiǎn)，并獲得書(shū)面的同意證明。

1.2試驗(yàn)方法

1.2.1分離、培養(yǎng)內(nèi)皮祖細(xì)胞 利用15毫升外周血分離內(nèi)皮祖細(xì)胞的方法采用密度梯度離心法，密度梯度離心方法是利用成分血之間的密度差異來(lái)分開(kāi)不同成分。這種方法可以得到含EPC的單個(gè)核細(xì)胞，單個(gè)核細(xì)胞包括淋巴細(xì)胞核單核細(xì)胞。用經(jīng)過(guò)離心后的細(xì)胞應(yīng)培養(yǎng)在特別的培養(yǎng)基中，培養(yǎng)基組成為胎牛血清和生長(zhǎng)因子。第7天隨機(jī)計(jì)數(shù)各組EPC集落和細(xì)胞數(shù)目，然后收集部分培養(yǎng)的EPC分別進(jìn)行下列實(shí)驗(yàn)。細(xì)胞密度根據(jù)需要進(jìn)行調(diào)整，接種到纖維連接蛋白包被的培養(yǎng)板，培養(yǎng)30min，在細(xì)胞貼壁狀態(tài)下進(jìn)行計(jì)數(shù)。將細(xì)胞密度做適當(dāng)調(diào)整，利用細(xì)胞毒性試劑盒測(cè)定EPC的增殖能力。最后進(jìn)行遷移方法計(jì)數(shù)，調(diào)整細(xì)胞密度24小時(shí)的培養(yǎng)后，用法，計(jì)算改良的Boyden小室小室下層的細(xì)胞數(shù)。

1.2.2染色、鑒定內(nèi)皮祖細(xì)胞 將分離純化后的含高密度EPC的內(nèi)皮祖細(xì)胞放在無(wú)菌蓋玻片，加入蛋白進(jìn)行溶解，在與人體體溫相同狀態(tài)下進(jìn)行孵育，將蛋白進(jìn)行吸棄后準(zhǔn)備使用。將分離的單個(gè)核細(xì)胞接種于放入24孔細(xì)胞培養(yǎng)板，每孔加入0.5ml，用蓋玻片覆蓋，培養(yǎng)箱中培養(yǎng)四天培養(yǎng)，將非貼壁細(xì)胞用PBS洗脫，換培養(yǎng)液至7天。在乙酞化低密度脂蛋白培養(yǎng)狀態(tài)下繼續(xù)37攝氏度孵育1h。固定細(xì)胞10min，浸洗PBS6分鐘，分為三次，。在標(biāo)本上加入FITC標(biāo)記的荊豆凝集素，繼續(xù)在37oC下孵育lh，同樣用PBS浸洗3次，每次2min，90%甘油封片。

1.2.3通過(guò)染色變化測(cè)定祖細(xì)胞衰老 根據(jù)研究發(fā)現(xiàn)，大多數(shù)細(xì)胞并不是能夠連續(xù)不斷分裂增殖的，他們被認(rèn)為增值能力有限，而不能分裂增殖的細(xì)胞就成為進(jìn)入衰老期。在衰老狀態(tài)下，細(xì)胞并未失去生命活性，但是從內(nèi)在來(lái)看，其基因組成和蛋白質(zhì)氨基酸表達(dá)形式已經(jīng)不再和正常細(xì)胞一致。衰老細(xì)胞的細(xì)胞周期長(zhǎng)短分配發(fā)生變化，這類(lèi)細(xì)胞不能再一些常規(guī)刺激下繼續(xù)進(jìn)行分裂，這種狀態(tài)并不同于一些損傷誘導(dǎo)的細(xì)胞休眠，也不同于細(xì)胞生長(zhǎng)接觸抑制的情況。關(guān)于細(xì)胞衰老的研究中，認(rèn)為這是生物體滋生避免發(fā)生腫瘤的一種自衛(wèi)方法。細(xì)胞進(jìn)入衰老期首先得表現(xiàn)為體積變大，在酸堿狀態(tài)pH6.O時(shí)，p一半乳糖普酶活性非常高。，細(xì)胞衰老事實(shí)上是生物體老化的一種潛在原因。細(xì)胞衰老狀態(tài)下p一半乳糖營(yíng)酶會(huì)被催化為深藍(lán)色。通過(guò)光學(xué)顯微鏡下觀(guān)察可以看到變成藍(lán)色的細(xì)胞或組織。

2結(jié)果

EPC進(jìn)行試驗(yàn)的時(shí)間基本為七天，鑒定也將在此時(shí)間段進(jìn)行，細(xì)胞數(shù)量可以直接反應(yīng)實(shí)驗(yàn)結(jié)果，所以我們將統(tǒng)計(jì)內(nèi)皮祖細(xì)胞的數(shù)量和增值功能，另外統(tǒng)計(jì)各種炎癥因子存在的差異，來(lái)反映抑郁癥患者首次發(fā)病時(shí)內(nèi)皮祖細(xì)胞數(shù)量和功能的變化。

2.1采用SPSS12.0軟件包對(duì)所有數(shù)據(jù)進(jìn)行分析，觀(guān)察組與對(duì)照組內(nèi)皮祖細(xì)胞各項(xiàng)因子指數(shù)差異存在統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05），具體數(shù)據(jù)見(jiàn)下表。

3討論

1997年，Asahara通過(guò)實(shí)驗(yàn)研究發(fā)現(xiàn)了內(nèi)皮祖細(xì)胞（endothelialprogenitorcells，EpC）。自此開(kāi)始打開(kāi)了內(nèi)皮祖細(xì)胞治療血管損傷和缺血區(qū)域血管再生研究的大門(mén)。抑郁癥是心血管疾病的獨(dú)立危險(xiǎn)因素，EPC參與血管內(nèi)皮損傷后修復(fù)、血管新生和損傷血管再內(nèi)皮化過(guò)程，對(duì)維持血管穩(wěn)定的生物學(xué)功能具有重要作用[8，9，10]。首先從外周血中分離提純EPC細(xì)胞，EPC細(xì)胞是內(nèi)皮祖細(xì)胞的前體，是多種表型的表達(dá)形式。分離方法采用密度梯度離心法，分離后的到單個(gè)核細(xì)胞，經(jīng)過(guò)培養(yǎng)和選擇最終得到高密度EPC。有了吩咐的實(shí)驗(yàn)原料，才能進(jìn)行嚴(yán)謹(jǐn)周密的實(shí)驗(yàn)。到目前為止，學(xué)者們并未給EPC做出一個(gè)明確的定義，也沒(méi)出現(xiàn)任何一個(gè)統(tǒng)一的分離鑒定標(biāo)準(zhǔn)。就目前來(lái)看，能夠進(jìn)行增生分化的成熟內(nèi)皮細(xì)胞和能過(guò)分化為造血干細(xì)胞的細(xì)胞定義為EPC。關(guān)于EPC還有待研究，但是可以肯定的是，在血管再生領(lǐng)域內(nèi)皮祖細(xì)胞的損傷修復(fù)占有一席之地，可以根據(jù)這個(gè)進(jìn)行心腦血管疾病的研究與治療[11，12，13]。

綜上所述，抑郁癥可減少骨髓來(lái)源的循環(huán)EPC數(shù)量和功能，影響內(nèi)皮的修復(fù)能力，并增加機(jī)體的免疫炎癥反應(yīng)，兩者可共同促進(jìn)心血管疾病的發(fā)生和發(fā)展。而EPCs作為心血管疾病的一個(gè)新型細(xì)胞學(xué)生物標(biāo)記物，其數(shù)量和功能的變化靈敏地反映人群罹患心血管疾病的危險(xiǎn)性[14]。因此，抑郁癥首次發(fā)病患者的內(nèi)皮祖細(xì)胞數(shù)量降低，功能減弱，而EPC的數(shù)量與之密切相關(guān)，可以證明抑郁癥會(huì)誘導(dǎo)產(chǎn)生心血管疾病。腦血管病血管損傷修復(fù)和再生治療領(lǐng)域完全可能以?xún)?nèi)皮祖細(xì)胞培養(yǎng)的方法治愈。

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