張丹

【摘要】目的：通過檢測乙肝患者血清中乙肝病毒表面抗原大蛋白（LHBs）、HBV DNA以及HBeAg，探討LHBs與HBV DNA的關(guān)系，研究LHBs反映HBV復(fù)制情況的可靠性，揭示HBeAg陰性乙肝患者檢測HBeAg的臨床意義。方法 采用酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)（ELISA）對LHBs和HBeAg進(jìn)行檢測；采用熒光定量PCR方法對HBV DNA進(jìn)行檢測。結(jié)果 171份乙肝患者HBV DNA、LHBs的檢測結(jié)果顯示：LHBs的檢測結(jié)果與HBV DNA的檢出結(jié)果差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P>0.05）。不同HBV M模式的HBV DNA與LHBs的檢出結(jié)果差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P>0.05）。HBV DNA拷貝數(shù)的對數(shù)值與LHBs含量具有相關(guān)關(guān)系，相關(guān)系數(shù)r=0.917。結(jié)論 LHBs能夠反映出乙肝病毒的復(fù)制情況，血清中的LHBs與HBV DNA具有較好的相關(guān)性，是反映HBeAg陰性乙肝患者病毒復(fù)制情況的新的血清免疫學(xué)指標(biāo)。

【關(guān)鍵詞】 慢性；乙型 ；肝炎

【中圖分類號】R512.62 【文獻(xiàn)標(biāo)識碼】B【文章編號】1004-4949（2014）04-0197-01

乙肝病毒S基因編碼的表面大蛋白（Hepatitis B Virus Large Surface Protein，LHBs）在空間上具有2種不同的跨膜構(gòu)象，作為HBV的包膜蛋白，內(nèi)側(cè)可以和HBV核殼體膜結(jié)合，外側(cè)可與病毒受體結(jié)合，是HBV顆粒成熟包裝的關(guān)鍵。近年來，隨著對LHBs中PreS抗原的研究，發(fā)現(xiàn)PreS區(qū)的特有拓?fù)浣Y(jié)構(gòu)在乙肝病毒感染與復(fù)制等過程中起重要作用。我國慢性HBV感染患者，尤其是肝硬化患者中HBeAg陰性者高達(dá)60%以上，評估HBV復(fù)制的指標(biāo)主要有HBV DNA和HBeAg，但是HBeAg陰性的乙肝患者除HBV DNA外，無其他標(biāo)志物可反映HBV復(fù)制程度。本研究旨在探討將LHBs用于反映HBeAg陰性乙肝患者HBV復(fù)制程度的可靠性。

1 對象與方法

1.1 對象 乙肝患者血清標(biāo)本來自我院2010年8月～2012年9月門診或住院乙肝患者171例，其中男92例，女79例。年齡18～68，平均41.3歲。

1.2 檢測方法 乙型肝炎血清標(biāo)志物檢測試劑盒（河南華美生物工程有限公司）；LHBs定量檢測試劑盒（北京熱景生物技術(shù)有限公司）；HBV DNA實(shí)時(shí)熒光聚合酶反應(yīng)（PCR）定量檢測試劑盒（深圳匹基生物工程有限公司）。

1.3 統(tǒng)計(jì)分析 采用SPSS 12.0軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)，計(jì)量資料組間差異采用χ2檢驗(yàn)，計(jì)數(shù)資料組間差異采用方差分析。

2 結(jié)果

2.1 HBeAg陰性和陽性組中LHBs及HBV DNA的陽性率 檢測171例慢性乙肝患者血清標(biāo)本，LHBs和HBV DNA的總陽性率均為74.9%。在46例HBeAg陽性乙肝患者中LHBs和HBV DNA的陽性率分別為97.8%和100%，二者的檢出率無明顯差異；在125例HBeAg陰性的乙肝患者中LHBs和HBV DNA的陽性率分別為66.4%和65.6%，二者的檢出率差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（χ2=0.02，P>0.05）。

2.2 HBeAg陰性乙肝患者中LHBs和HBV DNA檢出符合率 在HBeAg陰性但是HBV DNA陽性的82份標(biāo)本中，LHBs陽性率為82.2%（68+82），在HBeAg陰性乙肝患者中LHBs與HBV DNA的檢出符合率為（68/28）/125=76.8%。

2.3 LHBs陽性率及含量與HBV DNA拷貝數(shù)之間的比較 HBV DNA拷貝數(shù)對數(shù)值與LHBs含量（ng）的相關(guān)系數(shù)r=0.917，回歸方程為Y=10822X，P<0001，R Square=0.841，表明HBV DNA拷貝數(shù)的對數(shù)值與LHBs含量（ng）具有相關(guān)關(guān)系（表1）。 表1 LHBs陽性率以及含量與HBV DNA拷貝數(shù)比較（略）

3 討論

HBV形成包膜過程中，LHBs起著關(guān)鍵作用，LHBs前S區(qū)具有拓?fù)浣Y(jié)構(gòu)，并具有反式激活病毒復(fù)制作用，檢測LHBs具有重要意義。以往是通過檢測LHBs獨(dú)有片段PreS1實(shí)現(xiàn)，但其PreS區(qū)具有復(fù)雜拓?fù)浣Y(jié)構(gòu)，導(dǎo)致PreS1多肽為免疫源的單抗檢出率較低，不能很好地反映HBV復(fù)制。本研究使用包被針對構(gòu)象型前S區(qū)的單抗的試劑檢測LHBs。結(jié)果表明，LHBs能反映HBV復(fù)制情況，171例患者中LHBs陽性率和HBV DNA陽性率無統(tǒng)計(jì)學(xué)差異（P>0.05）。LHBs含量與HBV DNA拷貝數(shù)具有較好相關(guān)關(guān)系（r=0.917）。在HBeAg陰性但HBV DNA陽性患者中，LHBs陽性率為82.2%（68/82）。在HBeAg陰性患者中有12%（15/125）的患者為LHBs陽性而HBV DNA陰性，分析有3個(gè)原因：（1）由于HBV具有變異性傾向，導(dǎo)致基因變異頻繁；（2）含有LHBs的管狀顆粒的數(shù)量是Dane顆粒的10000倍，血液中消退時(shí)間也晚于HBV DNA；（3）抗病毒藥物只抑制病毒cccDNA再復(fù)制，并不抑制已形成的病毒表達(dá)蛋白，即以DNA為模板的轉(zhuǎn)錄和病毒蛋白的轉(zhuǎn)譯表達(dá)不受影響。如果肝內(nèi)cccDNA仍然較多存在，則LHBs仍在一段時(shí)間內(nèi)存在，而血液中DNA可能是陰性。由于LHBs具有反式激活作用，LHBs的殘留是否與病毒持續(xù)復(fù)制或乙肝病毒慢性持續(xù)性感染相關(guān)，需要進(jìn)行深入的研究。

參考文獻(xiàn)

[1]李曉玲 王陽陽 孫麗娜 慢性乙型肝炎患者乙肝病毒大蛋白檢測分析 現(xiàn)代臨床醫(yī)學(xué) 2010，8（9）：189-190

[2]車吉森 付麗娜 白芯蕊 乙型肝炎的臨床表現(xiàn) 健康大視野 2011，3（9）345-346

[3]張怡 李爽 李紅茹 檢測乙肝病毒大蛋白的臨床意義 中外健康指南 2011，3（5）234-235