鐘強(qiáng)等

【摘要】目的：考察白術(shù)茯苓湯高中低劑量對(duì)脾虛型克羅恩病（CD）大鼠促炎因子的影響；初步探討該方治療脾虛CD的最佳有效劑量。方法：采用破氣耗氣加饑飽失常之復(fù)因脾虛造模方法結(jié)合Morris方法復(fù)制脾虛型CD大鼠動(dòng)物模型，白術(shù)茯苓湯高中低劑量灌胃給藥，酶聯(lián)免疫吸附法（ELISA）檢測(cè)大鼠血清腫瘤壞死因子（TNF-α）、白介素-1（IL-1）、白介素-6（IL-6）含量。結(jié)果：與空白組相比，模型組TNF-α、IL-1、 IL-6升高（P<0.05）；與模型組相比，高劑量組TNF-α、IL-1降低（P<0.05）；中劑量組TNF-α、IL-1、 IL-6降低（P<0.05）；低劑量組TNF-α降低（P<0.05）。結(jié)論：白術(shù)茯苓湯高中低劑量對(duì)脾虛型克羅恩病（CD）大鼠促炎因子的影響不同。其中白術(shù)茯苓湯中劑量組對(duì)TNF-α、IL-1、 IL-6的調(diào)節(jié)作用全面且優(yōu)于高劑量組和低劑量組。

【關(guān)鍵詞】白術(shù)茯苓湯；脾虛型克羅恩病；影響

【中圖分類號(hào)】R222 【文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼】B【文章編號(hào)】1004-4949（2014）04-0223-01

克羅恩病（Crohns disease， CD）是一種病因及發(fā)病機(jī)制尚未明確的慢性非特異性炎性腸?。↖BD），病變主要影響結(jié)腸粘膜，且以潰瘍?yōu)橹?。目前認(rèn)為CD的發(fā)病是遺傳和環(huán)境因素相互作用的結(jié)果，且與免疫功能異常密切相關(guān)。西醫(yī)治療主要使用水楊酸類、類固醇類和免疫抑制劑等以控制急性發(fā)作，緩解病情，減少并發(fā)癥等，但療效不穩(wěn)定。迄今尚未有任何一種療法被認(rèn)為是治療CD的特效療法?，F(xiàn)今，中醫(yī)辨證論治以及中西醫(yī)結(jié)合治療對(duì)其有著較好療效[1]。研究表明CD的病機(jī)特點(diǎn)為脾虛夾濕[2]。白術(shù)茯苓湯由白術(shù)、茯苓組成，具有健脾祛濕的功效。是治療脾胃氣虛證、脾虛濕滯證等的經(jīng)典小方和常用藥對(duì)[3]。本研究觀察了白術(shù)茯苓湯高中低劑量對(duì)脾虛型CD大鼠血清TNF-α、IL-1、 IL-6水平的影響，探索白術(shù)茯苓湯高中低劑量調(diào)控脾虛型CD大鼠細(xì)胞因子的藥效相關(guān)性，為中醫(yī)方劑劑量配比理論提供一定的實(shí)驗(yàn)基礎(chǔ)。

1材料與方法

1.1 動(dòng)物

SPF級(jí)SD（Sprague Dawley）大鼠50只，由成都達(dá)碩生物科技有限公司提供，合格證號(hào)：SCXK（川）2008-11，雌雄各半，體重200±20g，檢疫后備用。適應(yīng)性飼養(yǎng)1周，自由攝食顆粒飼料，動(dòng)物房溫度維持在18-25℃左右。成都中醫(yī)藥大學(xué)基礎(chǔ)醫(yī)學(xué)院SPF級(jí)動(dòng)物實(shí)驗(yàn)室進(jìn)行，設(shè)施合格證：川實(shí)動(dòng)管使第2003-015號(hào)。

1.2 藥材與試劑

白術(shù)、茯苓、大黃、厚樸、枳實(shí)均購(gòu)自同仁堂成都分店，經(jīng)成都中醫(yī)藥大學(xué)制劑室鑒定為正品。

2，4，6-三硝基苯磺酸（TNBS）購(gòu)自Sigma公司，批號(hào)：P2297。進(jìn)口分裝腫瘤壞死因子（Tumor necrosis factor-α，TNF-α）定量試劑盒（LOT：201106）、白介素-1（Interleukin-1，IL-1）定量試劑盒（LOT：201106）、白介素-6（Interleukin-6，IL-6）定量試劑盒（LOT：201106）由成都亞芯科技有限公司提供。

1.3 供試藥物制備

1.3.1 中藥湯劑的制備

稱取藥材，浸泡30min，共煎煮2次，每次30min，合并濾液，60℃恒溫水浴濃縮至1g/ml，經(jīng)0.45μm微孔濾膜過濾除菌，4℃保存?zhèn)溆谩?/p>

1.3.1.1 小承氣湯的配比

厚樸：枳實(shí)：大黃為3：3：2。

1.3.1.2 白術(shù)茯苓湯的高中低劑量

大鼠用藥劑量按照國(guó)家中醫(yī)藥管理局的相關(guān)規(guī)定，人鼠單位體重用藥量直接換算后的5、10、20倍為低、中、高劑量[4]。

1.3.2 TNBS灌腸液的制備

無(wú)水乙醇加雙蒸餾水配成50%乙醇75ml，然后將5%TNBS10ml×15與50%乙醇（2：1=V：V）混合均勻，滅菌后裝瓶4℃保存。

1.4 脾虛型CD動(dòng)物模型制備

本實(shí)驗(yàn)采用破氣耗氣加饑飽失常之復(fù)因脾虛造模法[5]結(jié)合Morris方法[6]建立脾虛型CD動(dòng)物模型。50只SD大鼠，全部雄性，按體重隨機(jī)分為2批，10只常規(guī)飼養(yǎng)，為空白組，40只造模?？瞻捉M10只，常規(guī)飼養(yǎng)；40只造模大鼠采用小承氣湯按20ml（kg/d），1次/d的劑量灌胃，加隔天禁食造成饑飽失常，連續(xù)14d，復(fù)制脾虛模型。并于造模第7d開始禁食不禁水24h，用2%戊巴比妥鈉30mg/kg腹腔注射麻醉，予TNBS灌腸液1ml灌腸。灌腸器插入肛門約6cm-8cm，注入灌腸液1ml。大鼠頭朝下體位，且灌腸器拔出后再繼續(xù)保持1min左右，以防灌腸液流出。每隔5d重復(fù)灌腸1次，共5次。

1.5 實(shí)驗(yàn)分組及給藥方法

造模結(jié)束后，造模大鼠隨機(jī)分為1個(gè)模型組、白術(shù)茯苓湯高、中、低劑量組?？瞻捉M從實(shí)驗(yàn)開始至實(shí)驗(yàn)結(jié)束正常喂食、飲水；模型組灌胃等量0.9%生理鹽水，1次/d，連續(xù)7d，白術(shù)茯苓湯高中低劑量組按10ml/kg灌胃，1次/d，連續(xù)5d。

1.6 標(biāo)本采集與處理

各組實(shí)驗(yàn)大鼠在第38d禁食不禁水24h，股動(dòng)脈取血處死。取血后不抗凝4℃靜置保存2-3h，用離心機(jī)2500r/min離心15min，取上清液為待測(cè)樣本。用ELISA法測(cè)定血清中TNF-α、IL-1、IL-6水平。

1.7 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法

所有數(shù)據(jù)用SPSS13.0統(tǒng)計(jì)軟件處理，組間計(jì)量資料比較采用單因素方差分析法，結(jié)果以均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差（ X±s）表示，

2結(jié)果

2.1 脾虛型CD大鼠一般情況

造模后各組大鼠均出現(xiàn)腹瀉、粘液膿血便、肛周大量糊狀稀便黏附、食量減少、形體消瘦、毛發(fā)干枯、喜靜愛扎堆。白術(shù)茯苓湯高中低劑量組經(jīng)治療后，高、低劑量組大鼠仍有少量稀便、粘液便、肛周糊有少量稀便；中劑量組大鼠大便基本恢復(fù)正常，肛周逐漸干凈，體重增加。

2.2 各組大鼠血清細(xì)胞因子水平的變化比較（表1）

3 討論

CD在中醫(yī)學(xué)中尚無(wú)某一病名與之對(duì)應(yīng)，根據(jù)其臨床表現(xiàn)，常將其歸屬于“泄瀉”、“腸澼”、“腹痛”、“痢疾”、“便血”等范疇。臨床觀察發(fā)現(xiàn)該病基本病機(jī)為脾虛夾濕。脾主運(yùn)化，喜燥惡濕，脾虛氣弱常既發(fā)水濕停滯的病變，若飲食不節(jié)或情志不遂等致脾胃損傷，脾不運(yùn)濕，水濕停滯，濕濁下注腸道，則發(fā)為泄瀉，正如《素問.藏氣法時(shí)論》謂：“脾病者……虛則腹?jié)M，腸鳴饗泄，食不化?！睗駵c間，搏結(jié)氣血，氣血運(yùn)行不暢，血肉腐敗，則見腹痛、便血等。脾虛夾濕是CD的基本病機(jī)之一，治當(dāng)健脾祛濕。白術(shù)茯苓湯出自《古今醫(yī)統(tǒng)大全》，為“治濕瀉，又治食積、濕熱作瀉”之基礎(chǔ)方。方中白術(shù)益氣健脾兼能燥濕，茯苓淡滲利濕兼可健脾，二藥相配，相須為用，既加強(qiáng)了益氣健脾以助運(yùn)化的作用，其燥濕滲濕作用又顧及了脾不運(yùn)濕、濕濁下注之病變。在方劑學(xué)研究中，藥對(duì)配伍是方劑配伍的基礎(chǔ)，劑量配比是方劑研究的基礎(chǔ)，因此本研究采用白術(shù)茯苓湯高中低劑量配比的實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)，旨在探索白術(shù)茯苓這一基本藥對(duì)的高中低劑量配比對(duì)脾虛型CD大鼠治療的藥效相關(guān)性。

西醫(yī)學(xué)中CD為慢性肉芽腫性炎癥，病變可累及胃腸道各部位，以回腸末端及其鄰近結(jié)腸為主。其發(fā)生普遍認(rèn)為與環(huán)境、感染、遺傳以及免疫等多種因素綜合作用所致[7]。TNF-α、IL-1、 IL-6等細(xì)胞因子已被公認(rèn)是介導(dǎo)IBD發(fā)病的促炎因子，在IBD患者的結(jié)腸粘膜中，炎性細(xì)胞因子如IL-1β、TNF-α、 IL-6升高。本研究結(jié)果顯示與正常組比較，脾虛型CD模型大鼠血清中促炎因子TNF-α、IL-1、 IL-6水平明顯升高（P<0.05），白術(shù)茯苓湯高中低劑量配比各組與模型組大鼠血清TNF-α、IL-1、 IL-6比較，高劑量組TNF-α、IL-1降低（P<0.05）；低劑量組TNF-α降低（P<0.05）；中劑量組TNF-α、IL-1、 IL-6降低（P<0.05）。

本次研究提示脾虛型CD大鼠血清中TNF-α、IL-1、 IL-6水平明顯增高，而白術(shù)茯苓湯高中低劑量配比中，尤以中劑量組下調(diào)TNF-α、IL-1、 IL-6水平最為突出和均衡，提示茯苓白術(shù)湯劑量對(duì)脾虛型CD療效的影響為非正比關(guān)系，當(dāng)茯苓白術(shù)湯劑量逐漸增加至一定水平時(shí)，藥物作用達(dá)到最佳，繼續(xù)增加藥物劑量，藥物的作用反而會(huì)降低，以此印證在臨床藥效關(guān)系中，適當(dāng)?shù)乃幬飫┝坎艜?huì)發(fā)揮最佳的治療作用。

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