唐宋琪，陳云慧，鄭翔鴻，鐘森

（1.海南醫(yī)學(xué)院，海口 571199；2.成都中醫(yī)藥大學(xué)，成都 611137；3.成都中醫(yī)藥大學(xué)附屬醫(yī)院，成都 610075）

抗結(jié)核化療藥物的肝毒性一直是困擾結(jié)核治療的重要因素［1，2］?？菇Y(jié)核藥物引起的肝損傷，不但影響結(jié)核患者治療的依從性，而且影響患者及其家屬的生活質(zhì)量［3］。中醫(yī)藥在肺結(jié)核治療領(lǐng)域的應(yīng)用歷史悠久，相關(guān)記載文獻(xiàn)眾多。中藥制劑雙百口服液（SBOL）是具有代表性的藥物之一，其功效為養(yǎng)陰潤(rùn)肺、益氣健脾，用于治療肺陰不足、脾氣虛弱所致的肺結(jié)核。SBOL與抗結(jié)核化療藥物聯(lián)合應(yīng)用可明顯降低抗結(jié)核藥物性肝損傷的發(fā)生率及肝損傷嚴(yán)重程度［4］，然而其作用機(jī)制并不明確。本文以SD大鼠為研究對(duì)象，將中藥制劑SBOL作為干預(yù)手段，從細(xì)胞色素酶CYP2E1及肝組織抗氧化角度探討中醫(yī)藥防治抗結(jié)核藥物性肝損傷的作用機(jī)制。

1 材料和方法

1.1 動(dòng)物

清潔級(jí)SD大鼠，雌性，45只，體質(zhì)量（150±20）g，生產(chǎn)許可證號(hào)：SCXK（川）2008－0011。SD大鼠購(gòu)回適應(yīng)性喂養(yǎng)1w后，隨機(jī)分為3組：空白組、異煙肼（H）及利福平（R）組、HR＋SBOL組，每組15只。

1.2 藥物

SBOL，吉林一正藥業(yè)有限公司，組方：百合、沙參、寸冬、生地、生曬參、川貝、百部、地骨皮、白芨、黃芪、山藥、貓爪草，批號(hào)：B20020363；H，沈陽(yáng)紅旗制藥有限公司，批號(hào)：0906031；R，沈陽(yáng)紅旗制藥有限公司，批號(hào)：0909071。

1.3 試劑

血清丙氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶（ALT）試劑，四川邁克科技有限責(zé)任公司，批號(hào)：0711061；血清天門冬氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶（AST）試劑，四川邁克科技有限責(zé)任公司，批號(hào)：0711051；CYP2E1ELISA 試劑盒，美國(guó)Uscnlife，批號(hào)：E0988r；肝組織勻漿丙二醛（MDA）試劑盒，南京建成生物工程研究所，批號(hào)：20100107；肝組織勻漿超氧化物歧化酶（SOD）試劑盒，南京建成生物工程研究所，批號(hào)：20100107；肝組織勻漿谷胱甘肽過(guò)氧化物酶（GSH－Px）試劑盒，南京建成生物工程研究所，批號(hào)：20100107。

1.4 儀器

HITACHI 7170型全自動(dòng)生化儀（日本日立）；全自動(dòng)多功能酶標(biāo)儀MK3（芬蘭雷勃）；721分光光度計(jì)（上海第三分析儀器廠）。

1.5 給藥方法與劑量［2］

空白組：生理鹽水20mL／kg灌胃，1次／d；HR組：H 30mg／kg，R 60mg／kg，灌胃，1次／d；HR＋SBOL組：H 30mg／kg，R 60mg／kg，SBOL 6mL／kg，灌胃，1次／d。給藥周期：4w。

1.6 指標(biāo)與測(cè)定方法

ALT、AST：全自動(dòng)生化分析儀檢測(cè)；肝組織勻漿細(xì)胞色素CYP2E1酶：ELISA試劑盒檢測(cè)；MDA、SOD和GSH－Px：紫外分光試劑盒檢測(cè)。

1.7 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法

采用SPSS 17.0軟件處理數(shù)據(jù)。計(jì)量資料以均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差（±s）表示，組間比較采用單因素方差分析LSD法，P＜0.05為差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 HR與SBOL聯(lián)合應(yīng)用對(duì)大鼠血清AST、ALT的影響

給藥4w后，單純給予HR的大鼠血清AST、ALT明顯升高；聯(lián)合SBOL給藥的大鼠血清ALT高于空白對(duì)照組，血清AST未發(fā)生明顯變化。研究結(jié)果提示，SBOL與HR聯(lián)合給藥可有效控制大鼠肝臟酶學(xué)的異常升高（見(jiàn)表1）。

表1 大鼠血清AST、ALT的變化（±s）

表1 大鼠血清AST、ALT的變化（±s）

▲與空白組比較，P＜0.05；◆與 HR組比較，P＜0.05

?

2.2 HR與SBOL聯(lián)合應(yīng)用對(duì)大鼠肝組織CYP2E1含量的影響

給藥4w后，單純給予HR的大鼠肝組織勻漿CYP2E1含量明顯高于空白組和HR＋SBOL組；聯(lián)合SBOL給藥的大鼠肝組織勻漿CYP2E1含量與空白組比較，未發(fā)生明顯變化。研究結(jié)果提示，HR引起的大鼠肝臟酶學(xué)異常變化可能與CYP2E1有關(guān)，SBOL可能通過(guò)抑制肝組織CYP2E1含量，對(duì)抗HR引起的肝損傷（見(jiàn)表2）。

表2 大鼠肝組織CYP2E1的含量（±s）

表2 大鼠肝組織CYP2E1的含量（±s）

▲與空白組比較，P＜0.05；◆與 HR組比較，P＜0.05

?

2.3 HR與SBOL聯(lián)合應(yīng)用對(duì)大鼠肝組織GSHPx、SOD、MDA的影響

給藥4w后，單純給予HR的大鼠肝組織MDA含量明顯升高，SOD和GSH－Px含量降低；聯(lián)合SBOL給藥的大鼠肝組織MDA含量與空白組比較，未發(fā)生明顯變化，SOD和GSH－Px含量均升高。研究結(jié)果提示，HR引起的大鼠肝臟酶學(xué)異常變化可能與MDA的蓄積有關(guān)，SBOL可能通過(guò)提高肝組織中SOD和GSH－Px含量發(fā)揮抗氧化作用，對(duì)抗HR引起的肝損傷（見(jiàn)表3）。

表3 大鼠肝組織中MDA、SOD、GSH－Px的含量（±s）

表3 大鼠肝組織中MDA、SOD、GSH－Px的含量（±s）

▲與空白組比較，P＜0.05；◆與 HR組比較，P＜0.05

?

3 討論

前期臨床研究［4，5］發(fā)現(xiàn)，中藥與抗結(jié)核化療藥物聯(lián)合應(yīng)用可有效降低抗結(jié)核藥物性肝損傷的發(fā)生率及肝損傷嚴(yán)重程度，本研究也證實(shí)了SBOL的保肝作用。CYP2E1是一種肝臟毒物代謝酶，具有遺傳多態(tài)性，可參與外源性和內(nèi)源性化合物的代謝［6－8］，抑制CYP2E1在肝組織中的含量，減少其對(duì)抗結(jié)核化療藥物的有毒代謝，減少肝毒性代謝產(chǎn)物的產(chǎn)生。本研究結(jié)果顯示，大鼠在服用HR后，血清ALT、AST升高，同時(shí)肝組織中CYP2E1含量也升高，該結(jié)果提示HR合用可能具有誘導(dǎo)CYP2E1產(chǎn)生的作用，CYP2E1含量的升高可能增加了HR對(duì)肝臟的毒性。中藥SBOL與抗結(jié)核化療藥物聯(lián)合應(yīng)用可穩(wěn)定肝組織中CYP2E1含量，減輕化療藥物對(duì)大鼠肝臟的損害，在一定程度上對(duì)抗HR造成的肝損害。

中藥的抗氧化作用與保肝作用關(guān)系密切［9，10］，本研究從抗氧化角度探討了中藥防治抗結(jié)核藥物性肝損傷的作用機(jī)制。研究發(fā)現(xiàn)，SBOL與HR聯(lián)合應(yīng)用可穩(wěn)定大鼠肝組織中MDA的含量，升高SOD和GSH－Px的含量，該結(jié)果提示SBOL具有一定的抗氧化作用，其保肝作用與抗氧化有關(guān)。研究同時(shí)發(fā)現(xiàn)，HR合用可降低大鼠肝組織SOD和GSH－Px的含量，然而，SOD和GSH－Px含量的降低是由于HR的合用直接抑制了SOD和GSH－Px的合成，還是由于其增加了自由基的產(chǎn)生，導(dǎo)致SOD和GSHPx的消耗過(guò)多，仍有待進(jìn)一步研究。

［1］劉嵋松，孫良梅，王勝圣，等.中西醫(yī)結(jié)合療法治療初治繼發(fā)性肺結(jié)核病的臨床療效及安全性評(píng)價(jià)［J］.中國(guó)中醫(yī)藥信息雜志，2013，20（9）：6－9，12.

［2］魏偉，吳希美，李元建.藥理實(shí)驗(yàn)方法學(xué)［M］.4版.北京：人民衛(wèi)生出版社，2010：71.

［3］賈忠，吳晶，馬建軍，等.一線抗結(jié)核藥物肝損害的研究現(xiàn)狀［J］.中國(guó)防癆雜志，2013，35（6）：468－471.

［4］孫真真.抗結(jié)核藥物肝毒性的研究進(jìn)展［J］.兒科藥學(xué)雜志，2013，19（2）：60－63.

［5］馮偉，劉福榮，馬傳銳，等.結(jié)核病患者家屬生活質(zhì)量及其影響因素分析［J］.中南大學(xué)學(xué)報(bào)：醫(yī)學(xué)版，2013，31（10）：1075－1079.

［6］王曉存.基因多態(tài)性與抗結(jié)核藥物所致不良反應(yīng)的相關(guān)性研究［D］.北京：北京市結(jié)核病胸部腫瘤研究所，2013.

［7］王濤.細(xì)胞色素P450－2E1基因多態(tài)性與抗結(jié)核藥物所致藥物性肝損害相關(guān)性研究［D］.北京：中國(guó)人民解放軍軍醫(yī)進(jìn)修學(xué)院，2012.

［8］謝鵬鳴.CYP450－2E1基因多態(tài)性與抗結(jié)核藥物所致肝損害關(guān)聯(lián)研究［D］.新疆：新疆醫(yī)科大學(xué)，2012.

［9］王明媚，周亮，張?chǎng)?，?藥物性肝損傷的診斷和防治研究進(jìn)展［J］.中國(guó)藥業(yè)，2014，23（7）：94－96.

［10］黃明春，陳劍鴻，胡小剛，等.金絲桃苷對(duì)CCl＿4誘導(dǎo)大鼠急性肝損傷抗氧化應(yīng)激研究［J］.局解手術(shù)學(xué)雜志，2013，22（6）：14－16.