繆國(guó)平

（江蘇省南通大學(xué)附屬海安人民醫(yī)院，江蘇 南通 226600）

高效液相色譜法測(cè)定清熱類制劑中有效成分含量的窺探

繆國(guó)平

（江蘇省南通大學(xué)附屬海安人民醫(yī)院，江蘇 南通 226600）

一直以來我國(guó)傳統(tǒng)中醫(yī)博大精深并已經(jīng)具有了幾千年的歷史。中藥制劑在中醫(yī)治療中具有十分重要的作用，其藥材基礎(chǔ)主要是傳統(tǒng)中藥材，通過將各種藥材按比例配制從而得到中藥制劑。從中藥類型上來看主要又包括了中成藥、中藥成方制劑、單味制劑等。相對(duì)于西藥而言中藥制劑發(fā)揮療效需要一個(gè)持續(xù)性的過程，但中藥制劑的不良反應(yīng)較少同時(shí)毒副作用低；另外在中藥制劑使用的過程中還能夠發(fā)揮出調(diào)理作用。為了讓中藥試劑充分發(fā)揮其效果就需要對(duì)其中的成分進(jìn)行全面的分析，本文對(duì)高效液相色譜法測(cè)定清熱類制劑中有效成分含量進(jìn)行了研究并提出了相關(guān)的觀點(diǎn)，供與參考。

高效液相色譜；清熱類制劑；有效成分

相對(duì)于西藥制劑傳統(tǒng)中醫(yī)藥制劑具有一定的優(yōu)勢(shì)，首先中藥制劑用量較少、毒副作用??；其次中藥制劑具有高效性與持久性，藥用效率高；再者中藥制劑儲(chǔ)存較為方便，給藥方式較為簡(jiǎn)單；另外中藥制劑的穩(wěn)定性較好。近年來我國(guó)中藥制劑發(fā)展取得了很大的突破，特別是中藥復(fù)方制劑水平較以往有了很大的提升。事實(shí)上在中藥制劑制備過程中由于成分較為復(fù)雜因此在不同成分的提取過程中需要用到不同的工藝，這種技術(shù)限制也造成中藥制劑控制不能做到面面俱到也就使得中藥制劑質(zhì)量良莠不齊了。為了讓中藥制劑的質(zhì)量得到保證就需要對(duì)其中的有效成分進(jìn)行分析、把握，準(zhǔn)確得到有效成分的含量，這樣才能夠讓中藥制劑的制備得到更為有效的控制[1]。

1 清熱類制劑簡(jiǎn)述

在傳統(tǒng)中藥中清熱類制劑是較為常見的類型，從分型上來看清熱類制劑又被分為清熱涼血藥、清熱燥濕藥、清熱瀉火藥以及清熱解毒藥和清虛熱藥。清熱類制劑在臨床治療中主要用作治療發(fā)熱類疾病，另外對(duì)炎癥、感染類疾病都具有一定的功效。在中藥制劑發(fā)展的過程中部分中藥制劑已經(jīng)可以取代西藥，它們不僅僅可以除去抗病原微生物同時(shí)能夠調(diào)節(jié)人體機(jī)制讓人體免疫力以及新陳代謝得到促進(jìn)[2]。

2 高效液相色譜簡(jiǎn)述

高效液相色譜（High Performance Liquid Chromatography）誕生于上世紀(jì)60年來，目前該技術(shù)是最為常見的分離檢測(cè)技術(shù)之一，常見的高效液相色譜又包括了吸附色譜、分配色譜離子、交換色譜以及凝膠色譜。高效液相色譜在使用過程中需要高壓支持，這主要是由于流動(dòng)相在經(jīng)過色譜柱時(shí)受到的阻力較大。從分離檢測(cè)速度上來看高效液相色譜具有高速性以及高效性，且分離較純，靈敏度高，但所需要的成本偏高[3]。在高效液相色譜技術(shù)不斷發(fā)展的情況下其應(yīng)用范圍也得到了擴(kuò)展。高效液相色譜檢測(cè)中藥制劑流程主要如下：對(duì)樣品大致情況進(jìn)行掌握并確定分離目的→考慮藥品如何預(yù)處理以及特殊處理→篩選合適的檢測(cè)儀器并設(shè)置相關(guān)參數(shù)→合理篩選液相色譜并進(jìn)行預(yù)實(shí)驗(yàn)對(duì)最佳分離條件進(jìn)行評(píng)估→對(duì)分離條件進(jìn)行優(yōu)化→對(duì)分離問題進(jìn)行檢查→定量校正→論證方法[4]。

3 清熱類制劑中有效成分含量測(cè)定分析

以下以小兒解表顆粒測(cè)定為例對(duì)清熱類制劑中有效成分含量測(cè)定進(jìn)行分析。

小兒解表顆粒是市面上較為常見的清熱類制劑之一，其主要成分包括了牛黃、黃芩、葛根等。以下采取實(shí)驗(yàn)對(duì)其中的綠原酸、黃芩苷、連翹苷成分進(jìn)行測(cè)量。實(shí)驗(yàn)儀器：安捷倫高效液相色譜儀、電子天平以及臺(tái)式恒溫振蕩器等。實(shí)驗(yàn)試劑：小兒解表顆粒、綠原酸、黃芩苷、連翹苷、乙腈（色譜純）、甲醇（色譜純）、醋酸（分析純）、蒸餾水。實(shí)驗(yàn)方法：選取規(guī)格為4.6 mm×250 mm，5 μm的色譜柱進(jìn)行填柱，流動(dòng)相選取乙腈和0.4%乙酸混合液。采取梯度洗脫，在0～6 min內(nèi)乙腈梯度范圍由10%向30%遞增，在6～12 min內(nèi)乙腈梯度范圍由30%～40%遞增。0～5.5 min波長(zhǎng)長(zhǎng)度為280 nm，之后1 min內(nèi)波長(zhǎng)調(diào)節(jié)為327 nm，在6.5～12 min時(shí)波長(zhǎng)還原為280 nm。柱溫控制在28 ℃，流速為1 mL/min。

實(shí)驗(yàn)結(jié)果：見圖1。

圖1 標(biāo)準(zhǔn)樣色譜圖與樣品色譜圖比較

取梯度樣品進(jìn)行測(cè)定，通過線性回歸處理得出綠原酸線性方程為y=5.29x-5.39（r=0.9996）、黃芩苷線性方程為y=11.83x+6.27（r=0.9996）、連翹苷線性方程為y=10.98x-1.41（r=0.9997）。對(duì)樣本進(jìn)行精密度試驗(yàn)，三者峰面積RSD分別為1.1%、0.6%以及1.1%，從RSD情況來看表明檢測(cè)儀器的精密度較為理想。對(duì)樣本進(jìn)行穩(wěn)定性實(shí)驗(yàn)得到三者峰面積RSD分別為1.4%、2.4%以及1.3%，這說明樣品在穩(wěn)定程度較好。另進(jìn)行重復(fù)性實(shí)驗(yàn)得到三者峰面積RSD為1.9%、2.8%以及1.8%，重復(fù)性良好。

以n%=[（C×V）×10-6/W]×100%作為提取率計(jì)算公式，其中C為標(biāo)準(zhǔn)曲線得到的濃度；V為溶劑體積；W為樣品質(zhì)量。

實(shí)驗(yàn)過程中分別對(duì)萃取溶劑因素、萃取時(shí)間因素、溫度因素進(jìn)行定性分析得出當(dāng)料液比、溫度和提取時(shí)間不變時(shí)，甲醇濃度控制在45%～55%區(qū)間內(nèi)提取率較為理想。同理控制其他影響因素，料液比在1∶50～1∶55時(shí)組分提取率較為理想；控制其他因素，溫度處于55～65℃時(shí)提取率最高；控制其他因素，提取時(shí)間控制在50～75 min時(shí)提取率較高。綜上對(duì)提取工藝進(jìn)行修正，甲醇濃度為51%，料液比為1∶53，提取時(shí)間為70 min，溫度控制在60 ℃，綠原酸、黃芩苷、連翹苷的提取率分別為0.736%、1.92%、0.471%。

4 結(jié) 語

從上述實(shí)驗(yàn)中可以看出不同廠家產(chǎn)的小兒解表顆粒存在著一定程度的成分差異，但是差異性不大。由此可見采取高效液相色譜法測(cè)定清熱類制劑中有效成分含量對(duì)中藥制劑質(zhì)量控制備可提供可靠的依據(jù)，值得推廣。

[1] 李思維,謝蓉,王梅.中心組合試驗(yàn)設(shè)計(jì)和響應(yīng)面分析優(yōu)化黃芩中黃芩苷提取工藝[J].陜西中醫(yī)學(xué)院學(xué)報(bào),2012,35(5):114-117.

[2] 王貞.黃芩甙的含量測(cè)定研究概況[J].光明中醫(yī),2012,27(8):141-146.

[3] 文國(guó)俊.清熱解毒類中成藥中重金屬含量的測(cè)定及評(píng)價(jià)[J].光譜實(shí)驗(yàn)室,2012,29(4):137-139.

[4] 李文烈,曹海芳,魏剛.中藥制劑質(zhì)量控制的研究進(jìn)展[J].中國(guó)執(zhí)業(yè)藥師,2012,9(7):159-161.

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1671-8194（2014）28-0085-02