許桂芳，彭勇，陳勇

（1.寧波市第一醫(yī)院 檢驗(yàn)科，浙江 寧波 315010；2.寧波市第二醫(yī)院 風(fēng)濕免疫科，浙江 寧波315010）

痛風(fēng)是一種由單鈉尿酸鹽（MSU）沉積在關(guān)節(jié)及其周圍組織所致的晶體相關(guān)性關(guān)節(jié)病，其病理特征為受累關(guān)節(jié)大量炎癥細(xì)胞及炎癥因子的浸潤。最新的流行病學(xué)調(diào)查顯示每年女性痛風(fēng)新發(fā)病率為1.4‰，而男性則高達(dá)4‰[1]。盡管痛風(fēng)的發(fā)病機(jī)制目前尚未十分明確，但近年來有學(xué)者提出NALP3（NACHT-LRR-PYD-containing protein 3）炎癥體在痛風(fēng)發(fā)病中具有重要作用[2]。NALP3炎癥體可以識(shí)別MSU晶體并引起白細(xì)胞介素（inteleukin，IL）-1β和IL-18等一系列炎癥因子的成熟和釋放，從而促使痛風(fēng)的急性發(fā)作[3]。痛風(fēng)的急性發(fā)作具有自限性的特點(diǎn)，急性發(fā)作僅僅持續(xù)幾天到幾周之后疾病將自行緩解，但目前對(duì)于痛風(fēng)炎癥反應(yīng)的自限性機(jī)制尚不十分清楚。IL-37是近年來發(fā)現(xiàn)的一種具有抑制固有免疫和炎癥反應(yīng)的細(xì)胞因子，研究表明IL-37可以抑制炎癥反應(yīng)中的IL-1β和IL-18等炎癥因子的表達(dá)[4-5]。IL-37參與了類風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎和系統(tǒng)性紅斑狼瘡等多種炎癥性疾病的調(diào)控，表現(xiàn)出了一定的抑制炎癥反應(yīng)的作用[4，6]。而關(guān)于IL-37在痛風(fēng)患者血清中的表達(dá)水平及其作用目前鮮見報(bào)道。本研究通過檢測(cè)痛風(fēng)患者急性期和完全緩解期兩個(gè)階段血清中IL-37、IL-1β和IL-18的水平并分析其相關(guān)性，探討IL-37在痛風(fēng)患者血清中的表達(dá)情況及其在痛風(fēng)發(fā)病中的作用。

1 資料和方法

1.1 一般資料 收集2013年6月至2014年1月寧波市第二醫(yī)院風(fēng)濕免疫科門診和住院的20例痛風(fēng)初次發(fā)病的患者作為痛風(fēng)組，其中男19例，女1例，年齡28～62歲，平均（46.00±9.68）歲，診斷均符合1977年美國風(fēng)濕病學(xué)會(huì)痛風(fēng)的診斷標(biāo)準(zhǔn)[7]。將痛風(fēng)組分為急性發(fā)作期和完全緩解期兩個(gè)階段。急性發(fā)作期符合以下條件：①痛風(fēng)初次發(fā)作0～48 h內(nèi)，臨床表現(xiàn)為寡關(guān)節(jié)腫脹疼痛，患者主訴疼痛程度評(píng)分（VRS-4法）＞5分；②炎癥指標(biāo)[血沉（ESR）和C反應(yīng)蛋白（CRP）]升高。本組患者急性發(fā)作期ESR為（50.6±22.9）mm/h，CRP為（33.19±23.65）mg/L。完全緩解期為初次急性發(fā)作經(jīng)正規(guī)抗炎治療7～14 d后且符合以下條件：患者主訴疼痛程度評(píng)分＜1分，炎癥指標(biāo)（ESR和CRP）降至正常。本組患者完全緩解期ESR為（13.0±6.3）mm/h，CRP為（3.29±2.38）mg/L。高尿酸血癥組20例，其中男19例，女1例，所有患者血清尿酸升高，其中男性＞420μmol/L，女性＞360μmol/L，平均（463.2±24.9）μmol/L；年齡29～60歲，平均（44.85±8.82）歲。健康對(duì)照組20例，其中男19例，女1例，均來自同期在我院體檢中心常規(guī)體檢的健康志愿者，年齡30～62歲，平均（45.55±8.57）歲。血尿酸水平痛風(fēng)組急性發(fā)作期（483.9±91.4）μmol/L，完全緩解期（369.2±84.7）μmol/L，高尿酸血癥組（463.2±24.9）μmol/L，健康對(duì)照組（302.6±74.7）μmol/L。3組人群年齡、性別構(gòu)成差異均無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05）。本研究得到寧波市倫理委員會(huì)批準(zhǔn)，所有受試者均知情同意。

1.2 排除標(biāo)準(zhǔn) 合并心血管系統(tǒng)疾病、惡性腫瘤、肝病、腎功能障礙、高血壓、糖尿病、其他急慢性炎癥、感染及自身免疫性疾病等。

1.3 標(biāo)本采集 所有受試者空腹8 h以上晨起抽取外周靜脈血5 mL。室溫下待血液凝固后，3 000 r/min離心10 min，收集上清，于-80 ℃冰箱保存待測(cè)。痛風(fēng)組急性發(fā)作期患者采血前未予以任何治療；痛風(fēng)組完全緩解期患者于急性發(fā)作期經(jīng)非甾體抗炎藥和秋水仙堿或激素正規(guī)治療7～14 d，痛風(fēng)完全緩解后取血。

1.4 IL-37、IL-1β和IL-18檢測(cè) 采用ELISA法檢測(cè)痛風(fēng)組（急性發(fā)作期和完全緩解期）、高尿酸血癥組和健康對(duì)照組血清中IL-1β、IL-18和IL-37水平，所有檢測(cè)試劑盒均購自北京索萊寶生物公司，操作嚴(yán)格按照說明書進(jìn)行。

1.5 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理方法 所有數(shù)據(jù)均采用SAS9.2軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)分析。計(jì)量資料均采用±s表示，若連續(xù)數(shù)據(jù)符合正態(tài)分布采用均數(shù)比較，否則采用非參數(shù)統(tǒng)計(jì)。均數(shù)比較采用t檢驗(yàn)，多組間比較采用單因素方差分析，之后兩兩比較采用SNK法檢驗(yàn)。非參數(shù)統(tǒng)計(jì)兩組間比較采用Wilcoxon秩和檢驗(yàn)，多組間比較采用Kruskal-Whitne秩和檢驗(yàn)，檢驗(yàn)水準(zhǔn)采用Bonferroni進(jìn)行校正。雙變量符合正態(tài)分布采用Pearson相關(guān)分析，否則采用Spearman秩相關(guān)分析。以P＜0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 IL-37、IL-1β和IL-18的表達(dá)差異 痛風(fēng)組患者急性發(fā)作期IL-1β和IL-18水平均顯著高于完全緩解期，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）；而IL-37的水平僅略高于完全緩解期，差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05）。痛風(fēng)組患者急性發(fā)作期IL-37、IL-1β及IL-18水平均高于高尿酸血癥組和健康對(duì)照組，差異均具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（均P＜0.05）；而完全緩解期僅IL-37水平高于高尿酸血癥組和健康對(duì)照組（P＜0.05）。高尿酸血癥組與健康對(duì)照組相比各指標(biāo)差異均無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（均P＞0.05）。詳見表1。

2.2 IL-37與其他指標(biāo)的相關(guān)性 通過相關(guān)性分析發(fā)現(xiàn)痛風(fēng)組患者急性發(fā)作期的IL-37水平與其ESR、CRP、IL-1β和IL-18的水平呈正相關(guān)（均P＜0.01）。詳見表2。

表1 3組患者血清IL-37、IL-1β和IL-18水平比較（n=20，±s，pg/mL）

表1 3組患者血清IL-37、IL-1β和IL-18水平比較（n=20，±s，pg/mL）

與完全緩解期比：aP＜0.05；與高尿酸血癥組比：bP＜0.05；與健康對(duì)照組比：cP＜0.05

組別 I L-3 7 I L-1 β I L-1 8痛風(fēng)組急性發(fā)作期 1 8 8.2 9±1 2 1.0 5 bc 7 8.2 3±4 0.8 9 abc 6 1 6.8 2±3 1 6.8 0 abc完全緩解期 1 5 5.3 9±8 5.8 4 bc 4 5.9 3±2 5.8 4 3 9 4.0 2±2 7 2.9 9高尿酸血癥組 9 4.6 7±3 8.0 6 4 9.7 1 1±1 8.5 1 2 4 2.0 3±2 1 6.4 8健康對(duì)照組 8 5.9 1±4 6.2 1 4 7.4 6±1 9.6 8 2 1 0.5 1±1 6 4.2 6

表2 痛風(fēng)組患者急性發(fā)作期IL-37水平與其他指標(biāo)的相關(guān)性分析

3 討論

痛風(fēng)是最為常見的炎性關(guān)節(jié)病之一，屬于自身炎癥性疾病，目前認(rèn)為其發(fā)病是由于長(zhǎng)期的高尿酸血癥所致。近年來的研究表明，MSU晶體沉積于關(guān)節(jié)及其周圍組織后可以激活細(xì)胞膜內(nèi)模式識(shí)別受體—NALP3炎性體，從而誘導(dǎo)一系列炎癥因子的釋放，其中最主要的炎癥因子包括IL-1β、IL-6、IL-18及腫瘤壞死因子-α（TNF-α）等，進(jìn)而引起關(guān)節(jié)的急性炎癥[2，9]。目前IL-1β的拮抗劑被用于臨床治療急性痛風(fēng)并取得了一定的療效[10]。但是痛風(fēng)性關(guān)節(jié)炎患者急性發(fā)作即使不經(jīng)過積極的抗炎治療炎癥也僅僅持續(xù)數(shù)天至數(shù)周，而后可自行緩解，但痛風(fēng)緩解機(jī)制尚不明確。

IL-37是近年來發(fā)現(xiàn)的IL-1家族的新成員，具有抗炎及免疫抑制作用。體外研究表明，IL-37具有抑制外周血單個(gè)核細(xì)胞及巨噬細(xì)胞等分泌IL-1α、IL-1β、IL-18及TNF-α等炎癥因子的作用[4]。McNamee等[11]在結(jié)腸炎小鼠模型中發(fā)現(xiàn)人IL-37b轉(zhuǎn)基因小鼠（IL-37btg）的結(jié)腸炎的炎癥反應(yīng)程度明顯較野生型小鼠輕，且結(jié)腸組織來源的細(xì)胞培養(yǎng)的上清中IL-1β、TNF-α及IFN-γ等的表達(dá)水平顯著降低。Bulau等[12]在肝炎小鼠模型中也發(fā)現(xiàn)人IL-37b質(zhì)?？梢砸种聘窝仔∈篌w內(nèi)的IL-1、IL-6等炎癥因子的表達(dá)。有學(xué)者發(fā)現(xiàn)類風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎患者的滑膜組織襯里層細(xì)胞內(nèi)高表達(dá)IL-37b，并推測(cè)IL-37b可能通過負(fù)反饋抑制炎癥反應(yīng)[4]。此外，有研究發(fā)現(xiàn)IL-37b可以與IL-18結(jié)合蛋白結(jié)合，進(jìn)而抑制IL-18的信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)通路[13]。因此IL-37b可作為一種抑炎細(xì)胞因子在炎癥性疾病中起著重要作用。

本研究檢測(cè)痛風(fēng)患者初次急性發(fā)作期和完全緩解期兩個(gè)階段的血清中IL-37、IL-1β及IL-18水平，并與高尿酸血癥患者及健康對(duì)照者進(jìn)行比較，結(jié)果發(fā)現(xiàn)痛風(fēng)患者急性發(fā)作期IL-1β及IL-18水平要高于完全緩解期水平，而IL-37的水平與完全緩解期比較差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義；完全緩解期IL-37的水平顯著高于高尿酸血癥及健康對(duì)照組，而IL-1β及IL-18水平無明顯差異。IL-37、IL-1β及IL-18水平在痛風(fēng)急性發(fā)作時(shí)顯著升高，通過相關(guān)性分析發(fā)現(xiàn)IL-37水平與其ESR和CRP等炎癥指標(biāo)及IL-1β和IL-18等炎癥因子的水平呈正相關(guān)；且完全緩解期ESR和CRP均下降至正常水平?？傊?，IL-37、IL-1β及IL-18的表達(dá)與痛風(fēng)炎癥密切相關(guān)，但經(jīng)抗炎治療后IL-1β、IL-18、ESR及CRP的炎癥指標(biāo)顯著下降，而IL-37的水平?jīng)]有隨著炎癥得到控制而明顯下降，還處于較高水平。

綜上所述，IL-37參與了痛風(fēng)的急性發(fā)作及緩解過程，且IL-37在其中可能起著一定的抑制炎癥作用，但具體機(jī)制有待進(jìn)一步探討。

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