王小泉 吳巖峰袁勇貴 王祖森

色氨酸羥化酶2基因多態(tài)性與晚發(fā)性抑郁癥及其療效的關(guān)聯(lián)研究*

王小泉1吳巖峰2袁勇貴3王祖森1

目的探討色氨酸羥化酶2(TPH2)基因多態(tài)性與晚發(fā)性抑郁癥(LOD)及其療效的關(guān)系。方法采用聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)-限制性片段長度(PCR-RFLP)法完成191例晚發(fā)性抑郁癥(研究組)和162例正常對照者(對照組)的TPH2基因rs4290270、rs7305115兩個(gè)位點(diǎn)多態(tài)性的測定。研究組在基線及治療后6周評定17項(xiàng)漢密爾頓抑郁量表(HAMD-17)以評估臨床療效。結(jié)果(1)TPH2基因rs4290270和rs7305115兩位點(diǎn)基因型和等位基因頻率在研究組和對照組的分布差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＞0.05);(2)單倍型分析顯示，rs4290270-rs7305115兩位點(diǎn)單倍型在研究組和對照組之間分布的差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＞0.05);(3)治療后第6周末達(dá)痊愈組和非痊愈組及與對照組的TPH2基因rs4290270、rs7305115多態(tài)性的基因型和等位基因頻率分布差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＞0.05);治療6周有效組和無效組及與對照組的rs4290270、rs7305115兩位點(diǎn)基因型和等位基因頻率分布差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＞0.05)。結(jié)論TPH2基因rs4290270，rs7305115多態(tài)性可能與晚發(fā)性抑郁癥及抗抑郁劑療效無明顯關(guān)聯(lián)。

色氨酸羥化酶晚發(fā)性抑郁癥基因多態(tài)性治療效果

抑郁癥是一種嚴(yán)重的精神疾病，主要表現(xiàn)為心境低落，興趣減低，悲觀厭世及思維遲緩等［1］。中樞神經(jīng)系統(tǒng)內(nèi)5-羥色胺(5-hydroxytryplamine，5-HT)是一種重要的神經(jīng)遞質(zhì)，在腦內(nèi)參與調(diào)節(jié)情緒、睡眠、進(jìn)食及性行為等多種生理功能。有研究認(rèn)為5-HT能神經(jīng)遞質(zhì)功能活動(dòng)的紊亂可能在抑郁癥的發(fā)病中起著重要的作用［2］。色氨酸羥化酶(tryptophan hydroxylase，TPH)是5-HT合成的關(guān)鍵酶。TPH有兩種亞型，即TPH1和TPH2，而TPH2在腦內(nèi)產(chǎn)生5-HT的神經(jīng)元部位優(yōu)先表達(dá)［3］，因此TPH2基因成為抑郁障礙分子遺傳學(xué)研究的重要候選基因之一。已有很多研究［4～7］報(bào)道TPH2基因多態(tài)性與抑郁癥的發(fā)病有關(guān)，并且影響抗抑郁藥的療效［8，9］。但目前TPH2基因多態(tài)性與晚發(fā)性抑郁癥關(guān)系的研究報(bào)道較少。本研究采用關(guān)聯(lián)分析的方法，探討TPH2基因rs4290270、rs7305115兩個(gè)位點(diǎn)多態(tài)性與晚發(fā)性抑郁癥及抗抑郁藥療效之間的關(guān)系。

1 對象與方法

1.1 對象研究組為2009年2月～2011年8月在南京醫(yī)科大學(xué)附屬腦科醫(yī)院老年精神科住院的患者。入組標(biāo)準(zhǔn):(1)所有患者均符合美國精神疾病診斷與統(tǒng)計(jì)手冊第4版(DSM-Ⅳ)抑郁癥的診斷標(biāo)準(zhǔn);(2)首次發(fā)病年齡≥55歲;(2)17項(xiàng)漢密爾頓抑郁量表(HAMD-17)評分≥17分;(3)入組前2周內(nèi)未服用任何抗抑郁劑。排除標(biāo)準(zhǔn):(1)腦器質(zhì)性及軀體疾病所致的精神障礙;(2)躁狂發(fā)作史;(3)嚴(yán)重的心、肝、腎功能障礙史。共入組191例，其中男46例，女145例;年齡55～78歲，平均年齡(64.71±6.23)歲;HAMD-17評分(28.46±12.01)分。對照組為南京某綜合醫(yī)院體檢者。入組標(biāo)準(zhǔn):(1)年齡≥55歲，平均年齡(65.40±6.61)歲;(2)無精神疾病史;(3)HAMD-17評分≤7分;(4)符合研究組排除標(biāo)準(zhǔn)。共162名，其中男48名，女114名;年齡60～78歲。兩組在年齡及性別的差異均無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＞0.05);以上研究對象均無血緣關(guān)系;所有受試者均被提前告知測試的目的，并簽署知情同意書。本研究獲得南京醫(yī)科大學(xué)附屬腦科醫(yī)院倫理委員會(huì)審核批準(zhǔn)。

1.2 方法

1.2.1 用藥方法入組患者給予選擇性5-羥色胺再攝取抑制劑(selective serotonin reuptake inhibitors，SSRIs)，包括帕羅西汀(10～40 mg/d)、舍曲林(50～200 mg/d)和西酞普蘭(20～40 mg/d)中的一種進(jìn)行治療，試驗(yàn)觀察期為6周，觀察期內(nèi)不合用其他任何抗抑郁劑，可跟據(jù)病情短期合并苯二氮類藥物。

1.2.2 療效評定療效指標(biāo)采用漢密爾頓抑郁量表(HAMD-17項(xiàng))，在基線及治療后6周評定。按HAMD總分及減分率來衡量療效，總分≤7分為痊愈，減分率≥50%為有效，＜50%為無效。

1.2.3DNA提取取250 μl EDTA抗凝的靜脈血，使用Axygen(美國)生物科技公司的AxyPrep全血基因組DNA小量試劑盒提取DNA。

1.2.4 基因多態(tài)性檢測TPH2基因rs4290270、rs7305115兩位點(diǎn)多態(tài)性分型采用聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)-限制性片段長度多態(tài)性(PCR-RFLP)方法。(1) rs4290270位點(diǎn)上游引物序列:5'-AATTATGCACAGCC CACCATTT-3'，下游引物序列:5'-TTTAGGCCTGCCAT TTGTTACC-3'。PCR溫度循環(huán)條件為:反應(yīng)總體積25 μl，其中引物各1 μl(10 μM)，2×Taq PCR Mastermix (南京博爾迪生物有限公司)12.5 μl，DNA模板2 μl (100 ng)，滅菌雙蒸水8.5 μl。PCR反應(yīng)條件:95℃預(yù)變性5 min，95℃變性45 s，55℃復(fù)性45 s，72℃延伸45 s，36個(gè)循環(huán)，最后72℃延伸3 min。PCR產(chǎn)物用限制性內(nèi)切酶Nde I(NEB公司，美國)37℃溫育1 h。酶切產(chǎn)物經(jīng)2%瓊脂糖凝膠電泳及溴化乙啶染色觀察擴(kuò)增效果并使用凝膠成像系統(tǒng)判斷基因型。TT型僅有一條帶，為481bp，AA型酶切后出現(xiàn)153、328 bp 2條帶，AT型酶切后出現(xiàn)153、328、481 bp 3條帶。(2)rs7305115位點(diǎn)上游引物序列:5'-TACCTGAGCCC ACGAGACTTTC-3'，下游引物:5'AAAGCTAGAGCATC GAGCCAGA-3'。PCR反應(yīng)條件為:反應(yīng)總體積25 μl，其中引物各1 μl(10 μM)，2×Taq PCR Mastermix(南京博爾迪生物有限公司)12.5 μl，DNA模板2 μl(100 ng)，滅菌雙蒸水8.5 μl。PCR溫度循環(huán)條件:95℃預(yù)變性5 min，95℃變性45 s，57.7℃復(fù)性45 s，72℃延伸45 s，36個(gè)循環(huán)，最后72℃延伸3 min。PCR產(chǎn)物用限制性內(nèi)切酶Msp I(NEB公司，美國)37℃溫育1 h。酶切產(chǎn)物經(jīng)2%瓊脂糖凝膠電泳及溴化乙啶染色并使用凝膠成像系統(tǒng)判斷基因型。AA型有66、259 bp 2條帶，GG型酶切后出現(xiàn)28、66、231 bp 3條帶，AG型酶切后出現(xiàn)28、66、231、259 bp 4條帶。

1.2.5 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理使用SPSS13.0軟件進(jìn)行數(shù)據(jù)分析。研究組與對照組基因型、等位基因頻率及Hardy-Weinberg平衡定律的吻合度檢驗(yàn)采用卡方檢驗(yàn);獨(dú)立樣本t檢驗(yàn)和卡方檢驗(yàn)確定研究組和對照組人口學(xué)資料是否具有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異;使用在線SHEsis軟件［10］進(jìn)行連鎖不平衡(LD)和單倍型分析。所有的統(tǒng)計(jì)檢驗(yàn)均采用雙側(cè)檢驗(yàn)，檢驗(yàn)水準(zhǔn)α=0.05。

2 結(jié)果

2.1Hardy-Weinberg平衡吻合度檢驗(yàn)研究組和對照組rs4290270、rs7305115兩位點(diǎn)的基因型分布均符合Hardy-Weinberg平衡定律，吻合度檢驗(yàn)良好(P＞0.05)，說明本研究樣本具有群體代表性。

2.2 兩組TPH2基因rs4290270和rs7305115位點(diǎn)基因型和等位基因頻率分布比較研究組與對照組rs4290270基因型及等位基因頻率差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＞0.05)。見表1。研究組與對照組rs7305115基因型及等位基因頻率差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＞0.05)。見表2。

表1 兩組rs4290270位點(diǎn)基因型及等位基因頻率比較［n(%)］

2.3 兩組TPH2基因rs4290270和rs7305115位點(diǎn)單倍型分析經(jīng)單倍型分析，TPH2 rs4290270-rs7305115兩個(gè)位點(diǎn)連鎖不平衡系數(shù)為D'=0.368，r2=0.120，不存在強(qiáng)連鎖不平衡。rs4290270-rs7305115兩個(gè)位點(diǎn)存在AA、AG、AT、TG 4種，各單倍型在研究組和對照組之間的分布比較差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＞0.05)。見表3。

表2 兩組rs7305115位點(diǎn)基因型及等位基因頻率比較［n(%)］

2.4 研究組rs4290270、rs7305115多態(tài)性各基因型及基因頻率分布與治療6周后療效比較在治療6周末，痊愈62例(32.5%)，有效152例(79.6%)，無效39例(20.4%)。治療后第6周末，rs4290270的基因型及基因頻率在抗抑郁藥治療有效組和無效組、痊愈組和非痊愈組之間的分布差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＞0.05);抗抑郁藥治療有效組、無效組、痊愈組及非痊愈組分別與對照組之間在rs4290270的基因型及基因頻率分布的差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＞0.05)。見表4。治療后第6周末，rs7305115的基因型及基因頻率在抗抑郁藥治療有效組和無效組、痊愈組和非痊愈組之間的分布差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＞0.05);抗抑郁藥治療有效組、無效組、痊愈組及非痊愈組分別與對照組之間在rs7305115的基因型及基因頻率分布的差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＞0.05)。見表5。

表3 兩組rs4290270-rs7305115位點(diǎn)單倍型頻率分布比較［n(%)］

表4 研究組rs4290270多態(tài)性各基因型及基因頻率分布與治療6周后療效比較［n(%)］

表5 研究組rs7305115多態(tài)性各基因型及基因頻率分布與治療6周后療效比較［n(%)］

3 討論

抑郁癥的發(fā)生與5-HT代謝有關(guān)，TPH2是5-HT合成的關(guān)鍵酶，其基因在中縫核5-HT神經(jīng)元內(nèi)特異性表達(dá)，調(diào)節(jié)中樞5-HT合成。TPH2基因位于12號(hào)染色體長臂(12q21.1)，包括11個(gè)外顯子，長為93.5 kb［11］。國內(nèi)外許多學(xué)者針對TPH2基因與抑郁癥的發(fā)病和抗抑郁劑療效方面進(jìn)行了大量的研究。Zill等［12］在德國人群中檢測了300例抑郁癥患者、265例健康對照者TPH2基因的外顯子5-7之間約28 kb區(qū)域內(nèi)10個(gè)單核苷酸多態(tài)性位點(diǎn)，結(jié)果顯示TPH2基因rs1386494和rs1843809兩位點(diǎn)與抑郁癥存在關(guān)聯(lián)，單體型分析也支持這一結(jié)果。Zhang等［13］在2005年首次發(fā)現(xiàn)TPH2基因G1463A variant(rs120074175)多態(tài)性與老年抑郁癥發(fā)病有關(guān)，并且該位點(diǎn)與SSRIs類抗抑郁藥的療效相關(guān)。但在隨后的幾項(xiàng)研究中，這一結(jié)果并未得到重復(fù)性驗(yàn)證。不一致原因可能與種族差異、研究對象的年齡及研究方法不同有關(guān)。Pereira等［14］對土耳其人的研究發(fā)現(xiàn)，TPH2基因與晚發(fā)性抑郁癥的發(fā)病關(guān)聯(lián)。Zhou等［15］對非洲裔美國人的研究顯示，TPH2基因rs4290270的T等位基因與抑郁癥的發(fā)病相關(guān)。Zhang等［16］對中國漢族人群中伴有自殺企圖的抑郁癥患者的研究顯示TPH2基因rs7305115 AA基因型明顯低于對照組，并認(rèn)為A等位基因是有自殺企圖的抑郁癥患者的保護(hù)性因素。Xu等［17］對中國漢族人群的研究顯示rs7305115多態(tài)性以及rs4290270-rs7305115單倍型與6周后的抗抑郁劑的療效有關(guān)。但Tsai等［7］在亞洲人群中并沒有發(fā)現(xiàn)TPH2 rs4290270、rs7305115兩個(gè)位點(diǎn)與抑郁癥及抗抑郁劑的療效關(guān)聯(lián)。

本研究分析了TPH2 rs4290270和rs7305115兩個(gè)多態(tài)性位點(diǎn)的基因頻率和等位基因頻率以及在研究組中rs4290270和rs7305115兩個(gè)位點(diǎn)多態(tài)性與抗抑郁劑療效的關(guān)系，結(jié)果顯示，研究組和對照組的基因型、等位基因頻率無統(tǒng)計(jì)學(xué)差異;治療后第6周末，rs4290270和rs7305115位點(diǎn)的基因型、等位基因頻率在有效組和無效組、痊愈組和非痊愈組之間的差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，TPH2基因的rs4290270和rs7305115位點(diǎn)的基因型、等位基因頻率分布無統(tǒng)計(jì)學(xué)差異;并且有效組、無效組、痊愈組及非痊愈組分別與對照組比較時(shí)，兩位點(diǎn)的基因型、等位基因頻率分布無統(tǒng)計(jì)學(xué)差異，與Tsai等［7］的結(jié)果相似。提示在中國漢族人群中，TPH2基因rs4290270和rs7305115兩個(gè)位點(diǎn)多態(tài)性可能在LOD的發(fā)病中不起主要作用，SSRIs類藥物的作用機(jī)制可能與TPH2基因rs4290270和rs7305115兩個(gè)位點(diǎn)多態(tài)性無關(guān)。

本研究存在以下不足:首先，對于病例對照研究分析來說，本研究樣本量較小，因此有必要擴(kuò)大樣本量，對TPH2基因是否與晚發(fā)性抑郁癥關(guān)聯(lián)進(jìn)一步驗(yàn)證。其次，抑郁癥的遺傳機(jī)制較為復(fù)雜，是一種多基因遺傳疾病，某個(gè)基因的多態(tài)性可能是通過一個(gè)或一些與此多態(tài)性連鎖不平衡的其他多態(tài)性的效應(yīng)而聯(lián)合發(fā)揮作用，因此要選擇更多的SNPs作為遺傳標(biāo)記進(jìn)行研究。另外，晚發(fā)性抑郁癥是一種異質(zhì)性疾病，臨床表現(xiàn)變異較大，還可進(jìn)一步劃分亞型進(jìn)行研究。此外，心理社會(huì)因素也影響抑郁癥的發(fā)病及治療效果，因此TPH2基因與環(huán)境因素相互作用與抑郁癥以及抗抑郁藥療效的關(guān)系也有待深入研究。

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Association of polymorphisms in tryptophanhydroxylase enzyme 2 gene with late - onset depression and efficacy ofantidepressants．

WANG Xiaoquan，WU Yanfeng，YUAN Yonggui，et al． Department of Psychiatry，the 4th People's Hospital ofWuhu City，Wuhu 241002，China

ObjectiveTo investigate the association of polymorphisms in tryptophanhydroxylase enzyme 2 ( TPH2) gene withlate-onset depression ( LOD) and efficacy of antidepressants in Chinese Han population.MethodsPolymorphisms of rs4290270and rs7305115 in TPH2 gene was genotyped by using Polymerase Chain Reaction-Restriction Fragment Length Polymorphism( PCR-RFLP) in 191 LOP patients ( study group) and 162 healthy controls ( control group) . Patients in study group wereassessed with Hamilton Depression Scale-17 items ( HAMD-17 ) at baseline and at the end of the 6th week of treatment toevaluate the efficacy of antidepressants.Results(1) There were no significant differences in genotypic frequency and allelicfrequency of rs4290270 and rs7305115 in TPH2 gene between study group and control group ( P ＞ 0. 05) . ( 2) No significantdifference was found in frequency of rs4290270-rs7305115 haplotype between the two groups ( P ＞ 0. 05) . ( 3) There were nosignificant differences in distribution of genotypes and alleles of rs4290270 and rs7305115 among remissioners，non-remissionersand healthy controls，as well as among responders，non-responders and healthy controls ( P ＞ 0. 05 ) .ConclusionThepolymorphisms of rs4290270 and rs7305115 in TPH2 gene are unlikely associated with the pathogenesis of LOD and the efficacyof antidepressants.

Tryptophanhydroxylase enzyme Late - onset depression Gene polymorphism Therapeutic efficacy

R749.4

A

1009-7201(2014)-01-0004-04

10.3969/j.issn.1009-7201.2014.01.002

2013-06-06)

(

2013-08-09)

國家自然科學(xué)基金資助項(xiàng)目(編號(hào):81071101);安徽省蕪湖市科技惠民計(jì)劃(編號(hào):2012hm36)

1.241002，安徽省蕪湖市第四人民醫(yī)院2.南京醫(yī)科大學(xué)第二附屬醫(yī)院3.東南大學(xué)附屬中大醫(yī)院

袁勇貴，E-mail:yygylh2000@sina.com.cn