楊 宇 施 鵬 張歆悅 王煜曄 崔 瑩 李 爽

抑郁模型大鼠海馬中BDNF含量與抑郁樣行為的相關(guān)性分析

楊 宇1施 鵬2張歆悅1王煜曄1崔 瑩1李 爽1

目的 研究抑郁模型大鼠海馬中BDNF含量與抑郁樣行為的相關(guān)性。方法選擇雄性Wistar大鼠作為實(shí)驗(yàn)對象，隨機(jī)分為抑郁模型組和健康對照組，依次給予足底電擊、冰水游泳、熱應(yīng)激、夾尾、禁水、禁食建立抑郁模型，采用Western-blot的方法檢測海馬組織中BDNF含量的蛋白含量，采用糖水實(shí)驗(yàn)和懸尾實(shí)驗(yàn)測定抑郁樣行為。結(jié)果抑郁模型組海馬組織中BDNF的蛋白含量低于健康對照組，且與糖水消耗量呈正相關(guān)、與懸尾不動時間呈負(fù)相關(guān)。結(jié)論抑郁大鼠模型海馬中BDNF含量降低，且與抑郁樣行為具有相關(guān)性。

抑郁癥；腦源性神經(jīng)營養(yǎng)因子；抑郁樣行為

抑郁癥是精神科的常見疾病，但發(fā)病機(jī)制仍未闡明，這也給藥物治療造成了較大難度。BDNF是一類與神經(jīng)功能密切相關(guān)的細(xì)胞因子，其含量異常可導(dǎo)致精神神、經(jīng)癥狀的發(fā)生。在下列研究中，分析了抑郁模型大鼠海馬中BDNF含量與抑郁樣行為的相關(guān)性，現(xiàn)匯報(bào)如下。

1 材料與方法

1.1 材料由沈陽醫(yī)學(xué)院實(shí)驗(yàn)動物中心提供30只健康Wistar雄性大鼠作為本次研究對象，體重（250 ±10）g。常規(guī)試劑和耗材購買于生工生物公司，抗體購買于Sigma公司，手術(shù)器械等由機(jī)能實(shí)驗(yàn)中心提供。大鼠編號后，采用隨機(jī)數(shù)表法分為抑郁模型組和健康對照組，每組15只。抑郁模型組按照模型建立方法進(jìn)行手術(shù)，健康對照組按照常規(guī)方法進(jìn)行飼養(yǎng)。

1.2 方法

1.2.1 飼養(yǎng)方法 在動物實(shí)驗(yàn)中心的動物房飼養(yǎng)，溫度（25±1）℃、濕度60%～70%，自然晝夜節(jié)律光照，自由獲得食物和飲水。

1.2.2 模型建立方法 每日隨機(jī)挑選以下刺激中的一種，包括電流 1.0mA、頻率1Hz的足底點(diǎn)擊，共30次；4℃冰水游泳、10m in；45℃熱應(yīng)激、30min；夾尾1m in；禁水24h；禁食24h。持續(xù)刺激21d，保證每種刺激不少于2次。

1.2.3 Western-Blot 處死大鼠后分離海馬組織，加入RIPA后提取總蛋白，100℃變性后進(jìn)行Western-blot。按配配方和流程配置濃縮膠、分離膠，以此進(jìn)行垂直電泳和電轉(zhuǎn)膜，完成后取出NC膜并用脫脂牛奶封閉2h。TBST洗滌5min×3遍后加入BDNF和actin的第一抗體，4℃搖床孵育過夜。第2天取出NC膜，于HRP標(biāo)記的第二抗體中孵育2h，TBST洗滌后顯影，并讀取蛋白條帶的灰度值。

1.2.4 糖水實(shí)驗(yàn) 刺激21d后，進(jìn)行糖水實(shí)驗(yàn)：給予1%蔗糖水溶液，測定24h內(nèi)糖水的消化量。

1.2.5 懸尾實(shí)驗(yàn) 刺激21d后，進(jìn)行懸尾實(shí)驗(yàn)：在大鼠尾部距尖端約1cm處用膠布固定，與懸尾測試儀相連接，使大鼠呈懸空倒掛狀、與臺面距離約15cm。當(dāng)大鼠由掙扎轉(zhuǎn)為靜止不動時開始計(jì)時，記錄6min內(nèi)大鼠的累計(jì)懸尾不動時間。

1.3 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法采用SPSS 18.0軟件進(jìn)行分析，計(jì)量資料采用t檢驗(yàn)分析；相關(guān)性分析采用以BDNF蛋白含量為自變量、抑郁樣行為為應(yīng)變量的單因素回歸分析。檢驗(yàn)標(biāo)準(zhǔn)以P＜0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 大鼠海馬組織中的 BDNF含量抑郁模型組海馬組織中BDNF的蛋白含量[（46.4±6.4）vs（100.0 ±16.2），t=10.985、P＜0.05]低于健康對照組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2.2 海馬組織中 BDNF含量與抑郁樣行為的相關(guān)性抑郁模型組海馬組織中BDNF的蛋白含量與糖水消耗量呈正相關(guān)、與懸尾不動時間呈負(fù)相關(guān)，見表1。

表1 海馬組織中BDNF含量與抑郁樣行為的相關(guān)性分析結(jié)果

3 討論

抑郁癥是臨床常見疾病，危害極大，但發(fā)病機(jī)制仍未闡明。5-羥色胺、去甲腎上腺素等神經(jīng)遞質(zhì)在抑郁癥發(fā)病中的作用已得到了一致認(rèn)可，針對其設(shè)計(jì)的再攝取抑制劑藥物也被應(yīng)用于抑郁癥的治療。但該類藥物起效需要4～6周，提示5-HT、NE異常僅是抑郁癥發(fā)病，也限制了其臨床應(yīng)用價(jià)值。腦源性神經(jīng)營養(yǎng)因子BDNF在神經(jīng)系統(tǒng)中發(fā)揮了重要作用，參與了神經(jīng)元的生長、分化等過程，并于神經(jīng)的可塑性有關(guān)。其含量異常可能導(dǎo)致神經(jīng)元的損傷，進(jìn)而產(chǎn)生一系列的神經(jīng)精神癥狀[1]。

在本研究中，從鼠海馬中BDNF含量與抑郁樣行為相關(guān)性的角度分析了BDNF這一細(xì)胞因子在抑郁癥發(fā)病過程中的作用[2]。糖水消耗實(shí)驗(yàn)和懸尾實(shí)驗(yàn)是評價(jià)大鼠抑郁程度的常用方法，處于慢性應(yīng)激和抑郁狀態(tài)中的大鼠會出現(xiàn)糖水?dāng)z入量減少、懸尾不動時間延長[3]。通過單因素回歸分析的方法分析相關(guān)性可知，抑郁模型組海馬組織中BDNF的蛋白含量與糖水消耗量呈正相關(guān)、與懸尾不動時間呈負(fù)相關(guān)。這就提示海馬組織中BDNF含量減少可導(dǎo)致抑郁樣行為的發(fā)生，與抑郁癥的發(fā)病密切相關(guān)。

由此可以得出，抑郁大鼠模型海馬中BDNF含量降低，且與抑郁樣行為具有相關(guān)性，可作為臨床治療抑郁癥的靶點(diǎn)。

[1] 王丹.海馬BDNF和iNOS與慢性應(yīng)激性抑郁的關(guān)系[J].信陽師范學(xué)院學(xué)報(bào)(自然科學(xué)版),2010,23(2):237-242.

[2] 董愛國,趙麗麗,李海紅,等.BDNF在抑郁癥發(fā)病機(jī)制中的作用及其抗抑郁作用機(jī)制的研究進(jìn)展[J].中國醫(yī)療前沿,2011,6(6):16-19.

[3] 王涵,李娜,文威,等.慢性應(yīng)激致大鼠抑郁行為涉及海馬形態(tài)變化和BDNF表達(dá)降低[J].基礎(chǔ)醫(yī)學(xué)與臨床,2011,31(5):565-569.

R749.4

A

1673-5846(2014)05-0232-02

1沈陽醫(yī)學(xué)院基礎(chǔ)醫(yī)學(xué)院，遼寧沈陽 110034

2沈陽醫(yī)學(xué)院附屬中心醫(yī)院，遼寧沈陽 110034