張 淼，任 力，胡 蓉，褚曉雨，朱廣卿

Ki67、EGFR在三陰性及非三陰性乳腺癌中的表達(dá)與相關(guān)性分析

張 淼，任 力，胡 蓉，褚曉雨，朱廣卿

目的 對比Ki67、EGFR在三陰性乳腺癌(triple-negative breast cancer，TNBC)及非三陰性乳腺癌(non triple-negative breast cancer，NTNBC)中的表達(dá)，探討Ki67與EGFR基因表達(dá)的相關(guān)性。方法 免疫組織化學(xué)法檢測513例乳腺癌標(biāo)本中Ki67及EGFR的表達(dá)，對比兩者在TNBC和NTNBC中的區(qū)別，應(yīng)用Spearman法分析Ki67與EGFR基因表達(dá)的相關(guān)性。結(jié)果 TNBC組織中Ki67 陽性表達(dá)率(94.32%)明顯高于NTNBC(80.47%)，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05) 。TNBC組織中EGFR表達(dá)率(68.18%)明顯高于NTNBC(11.76%)，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。結(jié)論 Ki67和EGFR在TNBC中均表達(dá)升高，但兩者無相關(guān)性，兩者均對乳腺癌預(yù)后判斷有重要意義。

三陰性乳腺癌；Ki67；表皮生長因子受體

乳腺癌是女性常見惡性腫瘤，其中三陰性乳腺癌(triple-negative breast cancer，TNBC)是指雌激素受體(estrogen receptor，ER)、孕激素受體(progesterone receptor，PR)、表皮生長因子2(human epidermal growth factor receptor 2，HER-2)表達(dá)均為陰性的乳腺癌[1]。目前，TNBC無內(nèi)分泌治療、靶向藥物治療指征，主要依靠化學(xué)藥物治療，表現(xiàn)為增殖速度快、容易局部復(fù)發(fā)、遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移率高、病死率高、預(yù)后較差[2]，故成為臨床研究熱點(diǎn)之一。TNBC的發(fā)生、發(fā)展與細(xì)胞的異常增殖有關(guān)，而Ki67是評估腫瘤細(xì)胞增殖活性的重要標(biāo)記物，對乳腺癌預(yù)后判斷有重要意義[3]。表皮生長因子受體(epidermal growth factor receptor，EGFR)也在細(xì)胞增殖過程中起重要作用，EGFR過度表達(dá)可促進(jìn)乳腺惡性腫瘤細(xì)胞增殖、加快轉(zhuǎn)移、抑制凋亡[4]。本研究旨在分析TNBC與NTNBC中Ki67、EGFR表達(dá)的差異，探討Ki67與EGFR的相關(guān)性。

1 資料與方法

1.1 一般資料 選取我院2008-01-01至2013-06-01共513例乳腺癌患者資料，均為女性。手術(shù)方式: 根治術(shù)3例，改良根治術(shù)453例，保乳術(shù)57例。均有病理結(jié)果，其中浸潤性導(dǎo)管癌359例，浸潤性小葉癌67例，其他類型87例(包括黏液腺癌9例，髓樣癌9例，大汗腺癌1例，導(dǎo)管內(nèi)癌26例，硬癌4例，派杰氏病13例，脂質(zhì)癌3例，單純癌14例，類癌2例，鱗癌3例，腺癌3例) 。

1.2 方法 腫瘤標(biāo)本經(jīng)4%甲醛固定，石蠟4 mm厚切片，HE染色，光鏡觀察。免疫組化采用EnVision二部法，試劑盒購自福州邁新生物技術(shù)有限公司。ER、PR 結(jié)果判斷: ER或PR≥10%腫瘤細(xì)胞核棕黃色染色為陽性表達(dá)；<10%腫瘤細(xì)胞染色為陰性。 HER2結(jié)果判斷:0或( + ) 者被判定為HER2 陰性，(++) 及( +++) 者被判定為HER2陽性。如ER、PR、HER2 均陰性即定義為TNBC，有任何一個(gè)陽性者即定義為NTNBC。其中TNBC 88例，年齡29～81歲，中位年齡49.8歲；NTNBC 425例，年齡26～89歲，中位年齡54.2歲。

1.3 Ki67、EGFR結(jié)果判斷 Ki67陽性細(xì)胞為細(xì)胞核棕黃色著色，光鏡下觀察，5個(gè)高倍鏡視野計(jì)數(shù)200個(gè)細(xì)胞，計(jì)算陽性細(xì)胞所占的細(xì)胞總數(shù)百分比。陽性細(xì)胞數(shù)≤5%為陰性(-)，6%～25%為弱陽性(+)，26%～50%為陽性(++)，>50%為強(qiáng)陽性(+++)。EGFR陽性細(xì)胞為膜著色，不著色為陰性(-)，著色陽性細(xì)胞數(shù)<25%為(+)，25%～50%為(++)，>50%為(+++) 。TNBC和NTNBC組均檢測Ki67和EGFR，對比兩組的陰性、弱陽性、陽性、強(qiáng)陽性表達(dá)率及相關(guān)性。

1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理 采用SPSS17.0 統(tǒng)計(jì)軟件進(jìn)行數(shù)據(jù)處理，計(jì)數(shù)資料采用χ2檢驗(yàn)，應(yīng)用Spearman法分析Ki67與EGFR基因表達(dá)的相關(guān)性，P<0.05 為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié) 果

2.1 Ki67和EGFR在兩組乳腺癌組織中的表達(dá) TNBC組織中Ki67、EGFR陽性表達(dá)率均明顯高于NTNBC，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)，見表1。EGFR和Ki67在乳腺癌組織中表達(dá)的免疫組化結(jié)果見圖1。

表1 Ki67在TNBC和NTNBC中的表達(dá) (n；%)

注：與NTNBC組比較，①P<0.05

圖1 EGFR和Ki67在乳腺癌組織中表達(dá)(SP，×400)

2.2 Ki67和EGFR在TNBC組織中的相關(guān)性 88 例TNBC患者中，Ki67陽性率為94.32%(83/88)，EGFR陽性率為68.18%(60/88)，Ki67與EGFR無明顯相關(guān)性(χ2=0.193，P>0.05，表2)。

表2 Ki67和EGFR在TNBC中的表達(dá)

3 討 論

分子生物學(xué)技術(shù)的發(fā)展使乳腺癌的分子病理學(xué)研究不斷深入，ER、PR 和HER-2已成為乳腺癌病理學(xué)常規(guī)檢查項(xiàng)目，內(nèi)分泌治療和靶向治療已讓大多數(shù)乳腺癌患者受益。TNBC作為乳腺癌中的特殊類型，占全部乳腺癌的10%～17%[5]，只能依賴傳統(tǒng)的放化療，且療效欠佳[6]。

Ki67是一種增殖細(xì)胞內(nèi)的核抗原，功能與細(xì)胞周期密切相關(guān)，半衰期為1 h或更短[7，8]。Ki67抗原是當(dāng)前較為肯定的核增殖標(biāo)志物，因其半衰期短，脫離細(xì)胞周期后迅速降解，因此成為評估腫瘤細(xì)胞增殖活性的重要標(biāo)記物[9]。Bauer等[10]研究表明，多種惡性實(shí)體腫瘤中Ki67的表達(dá)率遠(yuǎn)高于正常組織，與多種惡性腫瘤的發(fā)展、轉(zhuǎn)移、預(yù)后有關(guān)。乳腺癌也是如此，Ki67高表達(dá)與原發(fā)腫瘤較大、腋窩淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移數(shù)目較多、分期較晚有關(guān)。本研究表明，Ki67在TNBC組織中的陽性表達(dá)率明顯高于NTNBC(P<0.05)，提示Ki67強(qiáng)陽性表達(dá)很可能是TNBC預(yù)后差的一個(gè)重要原因。

EGFR是酪氨酸激酶受體家族，多種腫瘤的發(fā)生發(fā)展與EGFR的異常表達(dá)有關(guān)，其與乳腺癌的增殖及生長也有密切相關(guān)。有研究表明，乳腺腫瘤患者中27%～30%有EGFR過表達(dá)[11]，TNBC中高表達(dá)概率更高達(dá)45%～70%[12]。本研究顯示，TNBC中約68.18%表達(dá)EGFR，明顯高于其在NTNBC中(11.76%)的表達(dá)，考慮與腫瘤增殖速度快有關(guān)。

另外，本研究發(fā)現(xiàn)，TNBC中Ki67和EGFR均為高表達(dá)，但兩者無相關(guān)性，與有關(guān)文獻(xiàn)報(bào)道不同，考慮與樣本量小及樣本構(gòu)成不同有關(guān)。EGFR的高表達(dá)可能在TNBC的增殖發(fā)展中起重要作用，可以作為靶向藥物治療TNBC的重要突破口。但目前這些實(shí)驗(yàn)入組例數(shù)較少，而且酪氨酸激酶抑制藥僅對EGFR基因突變的非小細(xì)胞肺癌有效，而并非針對EFGR高表達(dá)的肺癌[14]，故在乳腺癌患者中也需尋找酪氨酸激酶抑制藥的療效預(yù)測指標(biāo)。EGFR基因擴(kuò)增與過表達(dá)的關(guān)系，仍是今后研究的重點(diǎn)方向。

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(2014-07-18收稿 2014-09-06修回)

(責(zé)任編輯 尤偉杰)

Expression of Ki67,EGFR in triple negative breast cancer and correlation analysis

ZHANG Miao,REN Li, HU Rong,CHU Xiaoyu,and ZHU Guangqing.

Department of Oncology, Air Force General Hospital of PLA, Beijing 100142,China

Objective To study Ki67, EGFR in non-triple negative and triple negative expression in breast cancer, and to explore the correlation between Ki67 and EGFR gene expression. Methods Immune histochemical method was used to detect Ki67 in specimens of 513 cases of breast cancer and the expression of EGFR, comparing both in triple negative and none triple negative breast cancer, and the correlation was analyzed by chi square and Spearman method. Results Ki67 positive expression rate in triple negative breast cancer tissues (94.32%) was significantly higher than that in triple negative breast cancer (80.47%) (P<0.05). Triple negative rate of EGFR expression in breast cancer tissue (68.18%) was significantly higher than that of non-triple negative breast cancer (11.76%) (P<0.05). Conclusions Ki67 and EGFR expression in triple negative breast cancer increases，but no correlation between both,has important significance in breast cancer prognosis judgement.

triple negative breast cancer；Ki67；EGFR

張 淼，本科學(xué)歷，主治醫(yī)師，E-mail:kjzhangmiao@sina.cn

100142北京，空軍總醫(yī)院腫瘤內(nèi)科

朱廣卿，E-mail: kjzhugq@sina.com

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