張長軍，劉軍，沈慶欽，賈可，劉杰

(1.魯南制藥集團(tuán)股份有限公司，山東臨沂 276005； 2.山東新時(shí)代藥業(yè)有限公司，山東費(fèi)縣 273400)

毛細(xì)管氣相色譜法測定霉酚酸酯原料藥中有機(jī)溶劑殘留量

張長軍1，2，劉軍1，2，沈慶欽1，2，賈可1，2，劉杰1，2

(1.魯南制藥集團(tuán)股份有限公司，山東臨沂 276005； 2.山東新時(shí)代藥業(yè)有限公司，山東費(fèi)縣 273400)

建立毛細(xì)管氣相色譜法測定霉酚酸酯原材料藥中5種有機(jī)溶劑殘留量。采用DB-WAX彈性石英毛細(xì)管色譜柱(30 m×0.53 mm，0.5μm)，氫火焰離子化檢測器(FID)，兩次程序升溫測定，5種有機(jī)溶劑能完全分離(R＞2.0)。乙酸乙酯、乙基苯、對(duì)二甲苯、間二甲苯、鄰二甲苯的線性范圍分別為5.120～512.0，2.010～201.0，2.110～211.0，2.000～200.0，2.080～208.0 μg／mL (r＞0.999)，檢出限分別為1.710，0.960，1.000，0.95，0.990 μg／mL，平均加標(biāo)回收率為96.0%～103.0%，測定結(jié)果的相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差為0.76%～0.99% (n=9)。該方法準(zhǔn)確，靈敏度高，可用于霉酚酸酯原料藥中有機(jī)溶劑殘留檢測。

霉酚酸酯；毛細(xì)管氣相色譜法；殘留溶劑

霉酚酸酯(mycophenolate mofetil)是一種新型的具有免疫抑制作用的抗生素，具有高效和高安全性的優(yōu)點(diǎn)，與其它同類藥相比，無明顯的肝腎毒性，主要用于腎臟和心臟移植術(shù)后器官排斥的預(yù)防，增加移植組織的成活率［1-2］。在霉酚酸酯原料藥的合成工藝中，涉及到的有機(jī)溶劑主要為乙酸乙酯和二甲苯，其中二甲苯主要含有4種結(jié)構(gòu)的化合物，通常為乙基苯(約17%)、鄰二甲苯(約9%)、間二甲苯(約60%)和對(duì)二甲苯(14%)。根據(jù) ICH(International of Technical Requirements for Registration of Pharmaceutical for Human Use，即：“人用藥品注冊(cè)技術(shù)要求國際協(xié)調(diào)會(huì)”)關(guān)于殘留溶劑指導(dǎo)原則的要求，乙酸乙酯為三類溶劑，在原料藥中的殘留量不得超過0.5%，二甲苯(乙基苯，鄰二甲苯，間二甲苯，對(duì)二甲苯)為二類溶劑，其殘留總量不得超過0.217%。

有文獻(xiàn)報(bào)道采用毛細(xì)管氣相色譜法測定霉酚酸酯生產(chǎn)中用到的有機(jī)溶劑乙醇、異丙醇、乙酸乙酯和甲苯［3］，與魯南制藥集團(tuán)股份有限公司生產(chǎn)過程使用的溶劑相差較大，不適合用于該公司產(chǎn)品的質(zhì)量控制。為了有效控制霉酚酸酯原料產(chǎn)品的質(zhì)量，筆者參考相關(guān)文獻(xiàn)，建立了毛細(xì)管氣相色譜法測定霉酚酸酯生產(chǎn)工藝中用到的5種溶劑(乙酸乙酯、乙基苯、對(duì)二甲苯、間二甲苯、鄰二甲苯)的殘留量，并進(jìn)行了方法學(xué)研究［4-7］。結(jié)果顯示，該方法測量結(jié)果準(zhǔn)確，靈敏度高，可用于霉酚酸酯中有機(jī)殘留溶劑的控制。

1 實(shí)驗(yàn)部分

1.1 主要儀器與試劑

氣相色譜儀：7890A型，美國安捷倫公司；

電子天平：AB204-S型，瑞士Metiler Toledo公司；

霉酚酸酯：批號(hào)081201～081203，山東新時(shí)代藥業(yè)有限公司；

乙酸乙酯、乙基苯、鄰二甲苯、間二甲苯、對(duì)二甲苯、二甲亞砜：分析純。

1.2 色譜條件

色譜柱：DB-WAX毛細(xì)管色譜柱(30 m×0.53 mm，0.5μm)；氣化室溫度：250℃；FID檢測器溫度：300℃；載氣：氮?dú)?；柱流量?.0 mL／min；分流比10∶1；柱溫：30℃保持2 min，以3℃／min升至80℃，然后以100℃／min升至200℃，保持5 min；進(jìn)樣體積：1.0 μL。

1.3 溶液制備

(1)對(duì)照品儲(chǔ)備溶液。精密稱取乙酸乙酯50.0 mg，乙基苯、間二甲苯、鄰二甲苯、對(duì)二甲苯各21.7 mg，置于100 mL容量瓶中，加入二甲亞砜溶解并定容，混勻。

(2)對(duì)照品溶液。精密移取對(duì)照品貯備溶液5.0 mL，置于10 mL容量瓶中，加入二甲亞砜溶解并定容。

(3)供試品溶液。精密稱取霉酚酸酯樣品0.5 g，置于10 mL容量瓶中，加入二甲亞砜溶解并定容，混勻。

2 結(jié)果與討論

2.1 色譜條件優(yōu)化

通過對(duì)色譜柱、載氣流量和升溫梯度的考察和優(yōu)化，結(jié)合系統(tǒng)適用性要求，最終確定了合適的色譜條件（見1.2）。在該條件下，5種有機(jī)溶劑及試樣溶劑均能很好地分離，分離度R＞2.0，滿足檢測要求。精密移取空白溶劑、對(duì)照品溶液和供試品溶液各1.0 μL，分別進(jìn)樣測定。色譜圖見圖1。

2.2 溶劑選擇

用水作溶劑時(shí)，由于5種有機(jī)溶劑和霉酚酸酯樣品的水溶性差而出現(xiàn)峰面積重復(fù)性較差，且色譜峰嚴(yán)重拖尾的現(xiàn)象，故選擇溶解能力較好的二甲亞砜作為溶劑。在選定溶劑中，5種有機(jī)溶劑和樣品均能較好溶解，色譜峰面積穩(wěn)定，峰形較好，理論塔板數(shù)較高，且二甲亞砜對(duì)其它殘留溶劑不產(chǎn)生干擾(見圖1B)。

圖1 霉酚酸酯殘留溶劑色譜圖

2.3 空白試驗(yàn)

取二甲亞砜作為空白溶液，在1.2色譜條件下進(jìn)行測定。結(jié)果顯示，空白溶劑無干擾峰，見圖1A。

2.4 專屬性試驗(yàn)

取對(duì)照品溶液進(jìn)樣測定，色譜圖見圖1B。結(jié)果顯示，5種有機(jī)溶劑均完全分離(R＞2)，理論塔板數(shù)均大于10 000。

2.5 工作曲線方程

精密移取對(duì)照品貯備溶液10.0，6.0，5.0，4.0，3.0，2.0，1.0，0.1 mL至10 mL容量瓶中，加二甲亞砜稀釋至刻度，混勻，依次進(jìn)樣分析。以待測溶劑的質(zhì)量濃度c為橫坐標(biāo)、以其峰面積A為縱坐標(biāo)進(jìn)行線性回歸，工作曲線方程、線性范圍、線性相關(guān)系數(shù)見表1。

2.6 定量限和檢出限

精密移取0.1 mL對(duì)照品貯備溶液至10 mL容量瓶中，加入二甲亞砜稀釋至刻度，混勻。取上述溶液適量，加入二甲亞砜采用遞減稀釋法依次測定。以信噪比S／N=10時(shí)的質(zhì)量濃度為定量限，以信噪比S／N=3時(shí)的質(zhì)量濃度為檢出限。5種有機(jī)溶劑的定量限和檢出限見表1。

2.7 精密度試驗(yàn)

配制對(duì)照品溶液1份，連續(xù)進(jìn)樣6次，記錄色譜峰面積，然后計(jì)算各組分峰面積的相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差，見表2。由表2可知，5種溶劑峰面積測定結(jié)果的相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差均小于2% (n=6)，表明該方法精密度良好。

表1 線性方程、相關(guān)系數(shù)、線性范圍及檢出限

表2 精密度試驗(yàn)結(jié)果(n=6)

2.8 回收試驗(yàn)

精密稱取已知?dú)埩羧軇┖康拿狗铀狨悠?份，每份0.5 g，置于10 mL容量瓶中，分為3組進(jìn)行測定，然后進(jìn)行加標(biāo)回收試驗(yàn)，結(jié)果見表3。由表3可知，5種有機(jī)溶劑的加標(biāo)回收率在96.0%～103.0%之間，說明該方法的準(zhǔn)確度較高。

表3 回收試驗(yàn)結(jié)果(n=9)

2.9 樣品測定

按照方法配制供試品溶液，進(jìn)樣分析。結(jié)果顯示，3批樣品(081201，081202，081203)中，只檢測到乙酸乙酯，其余4種溶劑均未檢出，色譜圖見圖1C。3批樣品中乙酸乙酯檢測結(jié)果分別為0.074%，0.061%，0.065% (n=2)，產(chǎn)品質(zhì)量符合國際標(biāo)準(zhǔn)規(guī)定的有機(jī)殘留溶劑限量要求。

3 結(jié)語

采用氣相色譜法對(duì)霉酚酸酯原料藥中5種殘留有機(jī)溶劑進(jìn)行了測定。結(jié)果表明，該方法測定結(jié)果準(zhǔn)確，靈敏度高，在考察的濃度范圍內(nèi)線性關(guān)系良好(r＞0.999)，加標(biāo)回收率符合檢測要求。該法可作為霉酚酸酯原料藥中殘留溶劑的控制方法。

［1］徐小薇，姜萍.免疫抑制作用的抗生素——霉酚酸酯［J］.中國藥學(xué)雜志，1999(8): 66-67.

［2］葉文玲.霉酚酸酯藥理作用的研究現(xiàn)狀［J］.國外醫(yī)學(xué)：泌尿系統(tǒng)分冊(cè)，1998(6): 42-45.

［3］林斌.氣相色譜法測定嗎替麥考酚酯有機(jī)溶劑殘留［J］.海峽藥學(xué)，2011(3): 52-54.

［4］ICH指導(dǎo)委員會(huì).藥品注冊(cè)的國際技術(shù)要求2007質(zhì)量部分[M].周海鈞，主譯.北京：人民衛(wèi)生出版社，2006: 129-144.

［5］梁漢昌.痕量物質(zhì)分析氣相色譜法[M].北京：中國石化出版社，2000: 5-12.

［6］吳烈鈞.氣相色譜檢測方法[M].北京：化學(xué)工業(yè)出版社，2001: 191-192.

［7］呂鴻，張文申，許峰，等.氣相色譜法快速同時(shí)測定室內(nèi)裝飾裝修材料膠黏劑中的苯、甲苯、二甲苯的含量［J］.化學(xué)分析計(jì)量，2011(1): 59-61.

Determination of Organic Solvents Residue in Mycophenolate Mofetil by Capillary Gas Ghromatography

Zhang Changjun1，2, Liu Jun1，2, Shen Qingqin1，2, Jia Ke1，2, Liu Jie1，2
(1. Lunan Pharmaceutical Group， Shandong Linyi 276005，China；2.Shandong Newtimes Pharmaceutical Company Ltd.， Feixian 273400，China)

Capillary gas chromatography method was established to determine the contents of five organic solvents residue in mycophenolate mofetil. DB-WAX (30 m×0.53 mm，0.5 μm) capillary column was used for the separation of five solvents. Hydrogen flame ionization detector was used for detection, five solvents could be separated completely under condition of two temperature program. The linear range of ethyl acetate, ethyl benzene, p-xylene, m-xylene, o-xylene were 5.120-512.0，2.010-201.0，2.110-211.0，2.000-200.0，2.080-208.0 μg／mL, repectively, and detection limits were 1.710，0.960，1.000，0.95，0.990 μg／mL, repectively. The average recoveries of five solvents were in the range of 96.0%-103.0%，and the relative standard deviation was 0.76%-0.99% (n=9). The method is accurate, sensitive, and it is suitable for the determination of organic solvents residue in mycophenolate mofetil.

mycophenolate mofetil; capillary gas chromatography; residue solvent

O657.7

A

1008-6145(2014)04-0060-03

10.3969／j.issn.1008-6145.2014.04.018

聯(lián)系人：劉軍； E-mail: ljljlj0531@126.com

2014-05-08